苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)大立方形多角体突变株的分子生物学研究

利用空斑技术,从既能形成多角体又含ＴＫ酶基因的苜蓿丫纹夜蛾重组核型多角体病毒ＡｃＭＮＰＶ－ＴＫ中,纯化了一株形成大立方形多角体的病毒突变株ＡｃＭＮＰＶ－ＴＫｍｔ５１３。用ＥｃｏＲＩ、ＰｓｔⅠ、ＢｇｌⅡ及ＫｐｎⅠ等限制性内切酶对它做了酶切分析,并克隆了多角体蛋白全基因及其侧翼部分的片段。对所克隆的部分全序列测定结果,发现在多角体蛋白基因读码框内只出现了一个碱基的突变,导致了第２５位的氨基酸密码子由ＧＧＴ变为ＧＡＴ,该位氨基酸由甘氨酸（Ｇｌｙ）变为天冬氨酸（Ａｓｐｑ）还利用ＰＣＲ技术扩增出突变了的多角体蛋白基因部分片段,并将它克隆入转移载体质粒ｐＥＶ５５,与不形成多角体的重组病毒ＴｎＮＰＶ－ＨＢｓＤ４ＤＮＡ共转染Ｓｆ９细胞,结果产生同样的大立方形多角体病毒。     

AcMNPV大方形多角体突变株的特征研究

对在细胞核中只形成一个几乎与细胞核同样大的立方形多角体突变株ＡｃＭＮＰＶ－ＴＫｍｔ５１３的多角体及其感染细胞,做超薄切片及透射电镜观察,结果表明,在感染细胞核内病毒粒子并没有被包埋到多角体蛋白内,而且多角体蛋白人有野生型病毒多角体蛋白那样的晶格结构。生物测定结果表明,经提纯后的突变多角体对虫体无感染力,面感染了突变株病毒的弱的感染力。序列测定结果证实,其ｆｐ２５基因无突变发生,苴ｆｐ２５基因在Ｓｆ     

家蚕核型多角体病毒egt基因的结构和功能分析

以苜宿银纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＭＮＰＶ）的ｅｇｔ基因作探针,从家蚕核型多角体病毒镇江株（ＢｍＮＰＶ ＺＪ－８）基因组中克隆了ｅｇｔ基因及其旁侧序列,作了该片段的酶切图谱;测定了ＢｍＮＰＶ ＺＪ－８ｅｇｔ基因序列。与ＡｃＭＮＰＶ的ｅｇｔ基因相比同源性为９５％;基因大小都为１５１８ｂｐ。利用ｅｇｔ基因旁侧序列构建了转移载体ｐＵＤｅｇｔ,以绿色荧色光蛋白基因（ＥＧＦＰ）作报告基因取代ｅｇｔ基因,构建     

家蚕核型多角体病毒基因polh的诱变分析

曾报道经化学诱变剂ＭＭＣ、９－ＡＡ和ＥＭＳ诱变的家蚕核型多角体病毒（ＢｍＮＰＶ）多角体形态出现异常,继代分离的诱变ＢｍＮＰＶ基因组对ＥｃｏＲＩ、ＢｇｌＩＩ和ＢａｍＨＩ的酶切谱发生变化。研究进一步揭示,诱变ＢｍＮＰＶ的多角体外层蛋白晶格排列呈现紊乱;多角体蛋白的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳谱与对照组比较有显著差异;对多角体蛋白基因ｐｏｌｈ的测序结果显示,３组诱变ＢｍＮＰＶ的ｐｏｌｈ基因发生了多处碱基（氨基酸     

茶尺蠖核型多角体病毒多角体蛋白基因核苷酸序列及其在Baculoviridae中的地位(英文)

茶尺蠖核型多角体病毒（ＥｏＳＮＰＶ）基因组的ｐｏｌｈ和ｅｇｔ基因区约１４．２ｋｂ的酶切图谱被构建．ｅｇｔ基因位于ｐｏｌｈ基因上游约４．８ｋｂ处,但转录方向与ｐｏｌｈ基因相反．ＥｃｏＲⅤ－Ｌ片段ｐｏｌｈ基因及其旁侧的１１２５核苷酸序列被测定．ｐｏｌｈ基因编码区长７３８核苷酸,可编码２４６氨基酸的多肽．起始密码子ＡＴＧ上游是一个富含ＡＴ（ＡＴ占７１．２％）的启动子区,在－５２核苷酸处有杆状病毒晚期基因启动子转录起始基序ＡＴＡＡＧ．在终止密码子下游２０８核苷酸有一个ｐｏｌｙ（Ａ）信号,ＡＡＴＡＡＡ．但ＥｏＳＮＰＶｐｏｌｈ基因起始密码子ＡＴＧ相邻核苷酸序列为ＧＴＡＡＴＧＴ,其－３是个Ｇ,这与已知的１６种其它杆状病毒ｐｏｌｈ基因－３位置均是Ａ不相同．在分析了ＥｏＳＮＰＶ和ＨａＳＮＰＶ多角体蛋白基因核苷酸序列的基础上,通过ＭＡＬＩＧＮ程序,比较了目前已发表的２６种杆状病毒包涵体蛋白的序列,ＥｏＳＮＰＶ与黄杉毒蛾核型多角体病毒（ＯｐＳＮＰＶ）的同源性为最高,核苷酸序列的同源性为８３．０％,氨基酸序列达９４．７％;与其它２０种鳞翅目ＮＰＶ的同源性也很高,核苷酸序列同源性为７２．６％～８１．９％,氨基酸序列为８３．７％～９３     

中国棉铃虫核型多角体病毒DNA聚合酶基因的克隆和序列分析

应用谷实夜蛾核型多角体病毒（ＨｚＳＮＰＶ）ＤＮＡ聚合酶基因ＨｉｎｄⅢ／ＰｓｔⅠ３５９６ｂｐ片段作探针,经Ｓｏｕｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交,克隆了中国棉铃虫核型多角体病毒（ＨａＳＮＰＶ）完整的ＤＮＡ聚合酶基因,大小约为３．４ｋｂ。限制性内切酶分析表明,ＨａＳＮＰＶＤＮＡ聚合酶基因限制性内切酶图谱与ＨｚＳＮＰＶ相似。用双脱氧链终止法测定该基因部分核苷酸序列（８０５ｂｐ）,推导出编码区２０６ａ。序列同源性比较显示,ＨａＳＮＰＶＤＮＡ聚合酶与ＨｚＳＮＰＶ之间具有高度的同源性;与ＬｄＭＮＰＶ、ＡｃＭＮＰＶ、ＢｍＳＮＰＶ、ＣｆＭＮＰＶ和ＯｐＭＮＰＶ也具有一定的同源性     

中国棉铃虫核型多角体病毒几丁质酶基因的定位与克隆

以α３２ＰｄＡＴＰ标记含ＣｆＭＮＰＶ几丁质酶基因的重组质粒为探针,在６８℃条件下对棉铃虫单粒包埋核型多角体病毒（ＨａＳＮＰＶ）进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交,将ＨａＳＮＰＶ的几丁质酶基因分别定位在ＢａｍＨＩＥ、ＢｇｌⅡＥ、ＥｃｏＲＩＧ、ＨｉｎｄⅢＦ、ＸｂａＩＨ、ＢａｍＨＩ＋ＨｉｎｄＩＩＭ和ＢａｍＨＩ＋ＸｂａＩＨ,并以ｐＴＺ１９Ｒ为载体获得了ＸｂａＩＨ片段克隆。     

粘虫核型多角体病毒多角体蛋白基因结构和序列的研究

测定了粘虫核型多角体病毒（Ｌｅｕｃａｎｉａｓｅｐａｒａｔａｎｕｃｌｅａｒｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓ,ＬｓＮＰＶ）两个ＥｃｏＲＶ片段的共１２０１ｂｐ序列,发现了一个７１４ｂｐ的开放阅读框（ＯＲＦ）,根据其与多种ＮＰＶ多角体蛋白基因（ｏｃｕ）同源性的比较和５＇端典型的１４ｂｐ保守序列,说明此ＯＲＦ即为ＬｓＮＰＶ的ｏｃｕ基因。根据核苷酸序列预测的多角体蛋白有２４６个氨基酸,其中酸性和碱性氨基酸数相等,疏水氨基酸含量很高,氨基酸组成中以谷氨酸（Ｇｌｕ）含量最高,谷氨酰胺和半胱氨酸含量最低。编码区碱基同源性与ＭｂＮＰＶ最高,为９７．０％;氨基酸同源性与ＭｂＮＰＶ最高,为９７．５％。密码子偏爱选用以第三个碱基为嘧啶的密码子。二级结构分析表明,α－螺旋（Ｈ）和β－折叠（Ｓ）相等,β－转角含量是Ｈ和Ｓ含量之和。     

苜蓿尺蠖核型多角体病毒囊膜蛋白

苜蓿尺蠖核型多角体病毒（ Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ ｎｕｃｌｅａｒ ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ,ＡｃＭＮＰＶ）在细胞质中合成其囊膜蛋白,但在细胞核内组装并包埋病毒粒子,这些蛋白的核定向转运机制是人们甚感兴趣的课题。以ＡｃＭＮＰＶ多角体衍生型病毒ＯＤＶ（ｏｃｃｌｕｓｉｏｎ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｖｉｒｕｓ,ＯＤＶ）的一种囊膜蛋白ＯＤＶ－Ｅ１８为对象,通过Ｅ１８与一个标记短肽Ｆ     

黄地老虎颗粒体病毒DNA片段的克隆与颗粒体蛋白基因的定位

用ｐＵＣ１９质粒作载体,克隆了黄地老虎颗粒体病毒（Ａｇｒｏｌｉｓｓｅｇｅｔｕｍｇｒａｎｕｌｏｓｉｓｖｉｒｕｓ,简称ＡｓＧＶ）ＤＮＡＰｓｔＩ－Ｄ．Ｅ．Ｆ．Ｇ．Ｈ．Ｊ．Ｋ．等７个片段。以［￣（３２）Ｐ］－ｄＣＴＰ标记的油桐尺蠖核型多角体病毒（Ｂｕｚｕｒａｓｕｐｐｒｅｓｓａｒｉａｎｕｃｌｃａｒｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓ简称ＢｓＮＰＶ）多角体蛋白基因为探针,在３７℃条件下对ＡｓＧＶ）颗粒体蛋白基因进行了定位,将其分别定位于ＢｓｌⅡ－Ｓ或ＴＰｓＴＩ－Ａ或Ｂ和ＥｃｉＲＩ－Ａ片段上。     

粘虫核型多角体病毒多角体蛋白基因结构和序列和研究

测定了粘虫核型我角体病毒两个ＥｃｏＲＶ片段共１２０１ｂｐ序更,发现一个７１４ｂｐ的开放阅读框（ＯＲＦ）,根据其与ＮＰＶ多角体收白基因同源性的比较和５端典型的１４ｂｐ保守序列。说明此ＯＲＦ即为ＬｓＮＰＶ的ｏｃｕ基因。根据核苷邓列预测的多角体蛋白有２４６个氨基酸,其中酸性和碱性氨基酸数相符,疏水氨基酸含理很高,氨基酸组成中以谷氨酸含量最高,谷氨酰胺和半胱氨酸含量最低。编码区碱基同源性与ＭｂＮＰＶ最高,     

棉铃虫核型多角体病毒Hind III-K片段的核苷酸序列及其分析

测定了棉铃虫（Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａａｒｍｉｇｅｒａ）核型多角体病毒（ＨａＳＮＰＶ）基因组ＤＮＡ的ＨｉｎｄＩＩＫ片段核苷酸序列。该片段全长３２５５ｂｐ,含可编码大于４０个氨基酸残基的多肽的开放阅读框（ＯＲＦ）１５个,包括多角体蛋白（ｐｈ）基因编码区３′端４８９ｂｐ和蛋白激酶ＨａｖＰＫ基因编码区８０１ｂｐ。在ｐｈ和ＨａｖＰＫ两基因之间鉴定出一个可编码４１２个氨基酸残基的ＯＲＦ１２３６,转录方向与ｐｈ和ＨａｖＰＫ基因相反。同源分析表明,ＯＲＦ１２３６与谷实夜蛾（Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａｚｅａ）核型多角体病毒（ＨｚＳＮＰＶ）的ＯＲＦ８推导的蛋白氨基酸序列有９５．９％同源性,与苜蓿丫纹夜蛾（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）核型多角体病毒（ＡｃＭＮＰＶ）ＯＲＦ１６２９只有２４．８％同源性,但三者均含有二组由多个脯氨酸残基串联而成的特征基序。     

斜纹夜蛾核多角体病毒几丁质酶基因的克隆及序列分析

以苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｔｉｒｎｉｃａ ｍｕｌｔｉｎｕｃｌｅｏｃａｐｓｉｄ ｎｕｃｌｅａｒ ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ,ＡｃＭＮ－ＰＶ）基因组含几丁质酶基因（ｃｈｉＡ）的ｐｓｔＩ Ｍ片段为探针,通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交将斜纹夜蛾核多角体病毒（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａ ｎｕｃｌｅａｒ ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓ ｖｉｒｕｓ,ＳｐｌｔＮＰＶ）的ｃｈｉ     

苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒复制与宿主细胞核骨架关系初探

用选择性抽提方法和整装细胞电镜技术观察苜蓿丫纹夜蛾多粒包埋核型多角体病毒（ＡｃＭＮＰＶ）感染的Ｔｎ５Ｂ１细胞的核骨架结构体系,发现感染早期病毒的复制过程未对宿主细胞核骨架的形态结构产生明显影响,而感染晚期多角体的装配在核骨架网络中进行。ｉｅ－１基因和多角体蛋白基因为探针,点杂交分析基因转录活性与宿主细胞核骨架的关系,结果表明在病毒感染早期,无论是正具转录活性的ｉｅ－１基因还是不具转录活性的多角体蛋     

斜纹夜蛾核多角本病毒（SpltNPV）基因组4.73Kb片段的？…

报道了斜纹夜蛾核多角体病毒（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｌｉｔｕｒａ ｎｕｃｌｅｏｐｏｌｙｈｅｄｒｏｖｉｒｕｓ,ＳｐｌｔＮＰＶ）基因组ＥｃｏＲＩ－Ｅ片段中长４７３０ｂｐ的序列分析结果。该序列上含有完整的ＳｐｌｔＮＰＶ ｏｄｖ－ｅ６６基因,一个开入读码框ＯＲＦ １０８６（ＡｃＭＮＰＶＯＲＦ１０９的同源区）和一类似亮氨酸拉链蛋白的基因（命名为ｐ３４基因）。序列比较分析表明,ＳｐｌｔＮＰＶ ｏｄｖ－ｅ６６基因     

茶毛虫核型多角体病毒（EpNPV）多角体蛋白基因的定位及克隆

茶毛虫核型多角体病毒 (Ｅｕｐｒｏｃｔｉｓｐｓｅｕｄｏｃｏｎｓｐｅｒ ｓａＮｕｃｌｅａｒＰｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓＶｉｒｕｓ简称ＥｐＭＰＶ) ,属于杆状病毒科核型多角体病毒属 ,能使茶毛虫染病死亡。ＥｐＮＰＶ据报道最初由日本学者于 195 7年发现[1] ,随后在其它国家和地区也有相关报道[2 ] ;我国在贵州、湖北、广西和云南等地也有发现 ,并在ＥｐＮＰＶ病毒杀虫剂的大田应用方面做了大量的工作 ,取得了一定的社会、经济和生态效益[3] 。本文以苜蓿丫纹夜蛾多粒包埋核型多角体病毒(ＡｕｔｏｇｒａｐｈａｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａＭＮＰＶ…     

蜀柏毒蛾核型多角体病毒结构多肽及基因组酶切分析

对蜀伯毒蛾核型多角体病毒（Ｐａｒｏｃｎｅｒｉａ ｏｒｉｅｎｔａ Ｎｕｃｌｅａｒ ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｖｉｒｕｓ,简称ＰａｏｒＮＰＶ）形态结构、结构多肽、限制内切酶图谱等特性进行了研究。采用不连续系统垂直板ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析了ＰａｏｒＮＰＶ的多角体蛋白、病毒粒子结构多肽。应用５种限制性内切酶对ＰａｏｒＮＰＶ基因组ＤＮＡ进行了酶切分析。结果表明：经热处理的多角体蛋白仅有一条带,分子量为３１．５ｋＤ,不     

汉滩病毒核壳蛋白（NP）在杆状病毒系统的表达及其免疫原性研究

应用杆状病毒表达载体成功地表达了汉滩病毒７６－１１８株（ＨＴＮＶ）核壳蛋白,将ＨＴＮＶＳ基因插入杆状病毒转染质粒ｐＡｃＹＭＩＢ的多角体基因启动子下游附近,与经Ｂｓｕ３６１酶切线性化的杆状病毒（ＡｃＶＥＰＡ）ＤＮＡ共同转染Ｓ１９细胞,经空斑筛选获得了高效表达ＮＰ的重组杆状病毒（ＡｃＶＨａｎＳ）。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ证实,表达产物与ＨＴＮＶ毒粒ＮＰ分子量均为５０ＫＤ左右,紫外扫     

大鼠甘氨肽α—羟化单氧酶在昆虫细胞中的活性表达

将编码大鼠甘氨肽α－羟化单氧酶（ＰＨＭ）ｃＤＮＡ基因,插入昆虫杆状病毒转移表达载体ｐＢａｃＰＡＫ８,构建成表达质粒ｐＢａｃＰＨＭ２,与修饰的银纹夜蛾核多角体病毒ＢａｃＰＡＫ６线性化ＤＮＡ共转染秋粘虫细胞Ｓｆ２１,通过同源重组,得到在核多角体蛋白基因启动子控制下的ＰＨＭ基因的重组病毒ＢａｃＰＨＭ。用ＢａｃＰＨＭ感染Ｓｆ２１细胞,无血清培养上清在７２小时后检测到酰胺化酶最高活力;用细胞免疫组化法和免疫     

木毒蛾核型多角体病毒形态结构及理化性质的研究

木毒蛾核型多角体病毒属昆虫杆状病毒科,核型多角体病毒属,多粒包埋型。在扫描电镜下,多角体呈不规则多面体,大小下一,平均直径为１．４μｍ,病毒粒子杆状,大小约为３９４×５６ｎｍ,经ＳＤＭ－ＰＡＧＥ分析,病毒多角体蛋白分子量为３０．５ｋＤ,病毒粒子结构蛋白由１９条多肽组成,分子量范围在８８－１７ｋＤ之间。多角体富含Ｇｌｕ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、而Ｃｙｓ、Ｍｅｔ、和Ｈｉｓ含量较少。其酸碱氨基酸之比为１．２６。病毒核酸为一环状ＤＮＡ,长度约为３８μｍ,经ＨｉｎｄⅢ、ＰｓｔⅠ、ＥｃｏＲⅠ和ＢｇｌⅠ单酶切以及ＢａｍＨⅠ＋ＨｉｎｄⅢ、ＢａｍＨⅠ＋ＰｓｔⅠ、ＢａｍＨⅠ＋ＢｇＩⅠ和Ｘｈｏｌ＋ＥｃｏＲⅠ双酶切分析,ＤＮＡ总分子量约为７１．６×１０￣６Ｄａｌｔｏｎｓ。