金鱼生长激素II基因在杆状病毒中的表达

以ｐＳＸＩＶＶＩ＾＋Ｘ３为转移载体,将编码金鱼生长激素Ⅱ的ｃＤＮＡ插入粉纹夜蛾核型多角体病毒（ＴｎＮＰＶ）基因组中,构建了重组病毒株ＴｎＮＰＶ－ＳＸ＾＋ｇｆＧＨⅡ４６。该毒株能在草地贪夜蛾离体培养细胞及银纹夜蛾幼虫中表达金鱼生长激素基因。蛋白免疫印迹表明,表达的生长激素蛋白分子量为２２．５ｋＤａ,与理论计算值相符,且表达的生长激素可分泌到感染细胞的培养基及虫体血淋巴中。ＲＩＡ结果表明,表达产物与天     

苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒（AcMNPV）大立方形多角体突变株的分子…

利用空斑技术,从既能形成多角体又含ＴＫ酶基因的苜蓿丫纹夜蛾重组核型多角体病毒ＡｃＭＮＰＶ－ＴＫ中,纯化了一株形成大立方形多角体的病毒突变ＡｃＭＮＰＶ－ＴＤｍ１５１３。用Ｅｏｏｒｌ、ＲｓｔⅠ、ＢｇｌⅡ及ＫｐｎⅡ等限制性内切酶对它做了酶切分析,并克隆了多角体蛋白全基因及其侧翼部分的片段。对所克隆的部分了理测定结果,发现在多角体蛋白基因读码框内只出现了一个碱基的突变,导致了第２５位的氨基酸密码子由ＧＧＴ     

杆状病毒重组蛋白金鱼生长激素I的纯化

利用放射免疫分析（ＲＩＡ）证实了含金鱼生长激素Ｉ ｃＤＮＡ的重组病毒在感染细胞９６ｈ后所表达的生长激素达到最高水平,平均每１０＾５个细胞可分泌金鱼生长激素Ｉ最高达２８８．０７ｎｇ;平均每克干虫可产生金鱼生长激素Ｉ９２５．３μｇ。从感染重组病毒的无血清细胞培养基中纯化生长激素Ｉ,平均每毫升培养基可纯化具免疫活性纯度９５％以上的金鱼生长激素Ｉ达６６４．２２４ｎｇ。纯化后蛋白的Ｎ－末端首２０个氨基酸序列     

金鱼生长激素Ⅱ基因在杆状病毒中的表达

以ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３为转移载体,将编码金鱼生长激素Ⅱ的ｃＤＮＡ插入粉纹夜蛾核型多角体病毒（ＴｎＮＰＶ）基因组中,构建了重组病毒株ＴｎＮＰＶＳＸ＋ｇｆＧＨⅡ４６。该毒株能在草地贪夜蛾（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）离体培养细胞及银纹夜蛾（Ａｇｙｒｏｇｒａｍｍａａｇｎａｔａ）幼虫中表达金鱼生长激素基因。蛋白免疫印迹表明,表达的生长激素蛋白分子量为２２．５ｋＤａ,与理论计算值相符,且表达的生长激素可分泌到感染细胞的培养基及虫体血淋巴中。ＲＩＡ结果表明,表达产物与天然的生长激素有相似的免疫特性,重组病毒在感染细胞９６ｈｐｉ所表达的生长激素达到最高水平,平均每１０５个细胞可在细胞培养基中检测到金鱼生长激素Ⅱ达８６．７４ｎｇ;平均每克干虫可产生金鱼生长激素Ⅱ２１４μｇ。     

利用杆状病毒表达系统表达金鱼生长激素I基因

以不含起始密码ATG的质粒Psxivvi⁺X3为转移载体,将编码金鱼生长激素I的Cdna插入粉纹夜蛾核型多角体病毒(TnNPV)基因组中,构建了形成多角体的重组病毒株TnNPV—SX⁺gfGHl21a。该毒株能利用合成多角体XIV串联启动子,在重组病毒感染的草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda,Sf)昆虫细胞及银纹夜蛾幼虫中表达金鱼生长激素I基因。感染离体细胞及虫俸后的蛋白SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳表明．所表达的蛋白分子量为22．5kDa,与理论计算值相符。Westem印迹证实。金鱼生长激素特异蛋白得到表达。     

苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)大立方形多角体突变株的分子生物学研究

利用空斑技术,从既能形成多角体又含ＴＫ酶基因的苜蓿丫纹夜蛾重组核型多角体病毒ＡｃＭＮＰＶ－ＴＫ中,纯化了一株形成大立方形多角体的病毒突变株ＡｃＭＮＰＶ－ＴＫｍｔ５１３。用ＥｃｏＲＩ、ＰｓｔⅠ、ＢｇｌⅡ及ＫｐｎⅠ等限制性内切酶对它做了酶切分析,并克隆了多角体蛋白全基因及其侧翼部分的片段。对所克隆的部分全序列测定结果,发现在多角体蛋白基因读码框内只出现了一个碱基的突变,导致了第２５位的氨基酸密码子由ＧＧＴ变为ＧＡＴ,该位氨基酸由甘氨酸（Ｇｌｙ）变为天冬氨酸（Ａｓｐｑ）还利用ＰＣＲ技术扩增出突变了的多角体蛋白基因部分片段,并将它克隆入转移载体质粒ｐＥＶ５５,与不形成多角体的重组病毒ＴｎＮＰＶ－ＨＢｓＤ４ＤＮＡ共转染Ｓｆ９细胞,结果产生同样的大立方形多角体病毒。     

AcMNPV大方形多角体突变株的特征研究

对在细胞核中只形成一个几乎与细胞核同样大的立方形多角体突变株ＡｃＭＮＰＶ－ＴＫｍｔ５１３的多角体及其感染细胞,做超薄切片及透射电镜观察,结果表明,在感染细胞核内病毒粒子并没有被包埋到多角体蛋白内,而且多角体蛋白人有野生型病毒多角体蛋白那样的晶格结构。生物测定结果表明,经提纯后的突变多角体对虫体无感染力,面感染了突变株病毒的弱的感染力。序列测定结果证实,其ｆｐ２５基因无突变发生,苴ｆｐ２５基因在Ｓｆ