北方地区汉族人核苷酸剪切修复基因mRNA的表达与头颈鳞癌发病风险的初步研究

目的:探讨我国北方汉族人核苷酸剪切修复(Nucleotide excision repair,NER)基因mRNA的表达水平与头颈鳞癌发病风险的相关性,为头颈鳞癌的诊断提供新的生物学标志物。方法:收集205例头颈鳞癌患者和176例健康对照,均为我国北方地区汉族人。通过实时定量聚合酶链反应实验检测研究对象外周血淋巴细胞中的5个核心核苷酸剪切修复基因mRNA的相对表达情况。对病例和对照之间一般特征的分布差异进行卡方检验,通过Wilcoxon秩和检验计算不同基因的mRNA表达水平的差异。采用logistic回归计算优势比(OR值)及95%置信区间(95%CI)。此外,通过ROC曲线评价NER基因模型的诊断价值。结果:病例组DDB1的mRNA表达低于对照组(P=0.075)。在logistic回归分析中,矫正年龄、性别、吸烟状况和饮酒因素后,DDB1的mRNA相对表达水平与SCCHN患病风险关系的ORs,在第二、第三和第四四分位数水平中分别为1.90(95%CI,1.02-3.54)、1.54(95%CI,0.82-2.87)和1.88(95%CI,1.00-3.52),分布与其mRNA的高表达水平相比。此外,DDB1(Ptrend=0.036)的蛋白表达水平降低与SCCHN风险增加之间也存在剂量反应关系)。ROC曲线提示DDB1表达水平与性别结合的效应模型中AUC显著改善(P=0.046)。结论:我国北方汉族DDB1的mRNA相对表达的降低与SCCHN患病风险的增加显著相关。     

中国北方汉族人群DNA修复能力的水平与头颈鳞癌发病风险的初步研究

目的:初步探讨北方汉族人DNA修复能力(DNA repair capacity,DRC)的水平与头颈鳞癌发病风险的相关性,为头颈鳞癌的诊断提供新的检测标志物。方法:收集71例头颈鳞癌患者和65例健康对照,均为我国北方地区汉族人。通过宿主细胞再活化(host cell reactivate,HCR)实验检测研究对象外周血淋巴细胞DRC的表达水平。对头颈鳞癌病例组和对照组之间一般特征的差异进行卡方检验,通过t检验及Wilcoxon秩和检验分析两组间DRC水平的差异。通过logistic回归模型计算优势比(OR值)及95%可信区间(95%CI)。此外,我们通过logistic模型计算ROC曲线下面积,进一步评价DRC模型的诊断价值。结果:头颈鳞癌组中DRC的水平在统计学上低于对照组(P=0.007)。在logistic回归模型分析中,矫正完年龄、性别、吸烟状况和饮酒因素后,DRC的水平与头颈鳞癌患病风险关系的ORs,在低水平与其DRC高水平相比为2.35(95%CI,1.11-4.98)。此外,DRC的水平降低与头颈鳞癌风险增加之间也存在剂量反应关系。最后,ROC曲线模型提示DRC模型中曲线下面积有所改善(P=0.068)。结论:北方汉族人中DRC水平的降低与头颈鳞癌发病风险的增加相关。本研究结果需在更大样本的后续研究中进一步验证。     

BMP．4在头颈鳞癌中的表达及其临床意义

目的：探讨BMP-4及其信号通路蛋白Smadl与P-Smadl在头颈鳞癌组织中的表达与该疾病临床病理学参数及预后的关系。方法：分别对89例头颈鳞癌与20例癌旁组织标本进行石蜡包埋,预切片染色。采用免疫组织化学方法检测BMP-4、Smadl与P．Smadl蛋白的表达,分析其在头颈鳞癌组织中的表达与各,临床病理学参数的关系。应用log-rank检验分析其与头颈鳞癌预后的关系。结果：（1）BMP-4、Smadl与p-Smadl蛋白在头颈鳞癌组织中的表达均显著高于癌旁组织。（2）BMP-4与p-Smadl的表达与头颈鳞癌组织的i临床分期、淋巴结转移、病理分级、转移以及复发等因素相关,而与患者的年龄无关;Smadl的表达与头颈鳞癌的,临床分期和病理分级有关,而与其年龄、淋巴结转移和复发等因素均无关。③BMP-4与p-Smadl的表达与头颈鳞癌患者预后有关,而Smadl的表达与患者的预后无关。结论：检测BMP．4、Smadl与p-Smadl的表达对头颈鳞癌诊断具有重要意义,并可有效地预测其转移与预后。     

人XPB基因在核苷酸剪切修复和基因转录中的分子机制

核苷酸剪切修复(NER)途径是维持生物体基因组稳定的重要机制。人着色性干皮病B组(xeroderma pigmentosum group B,XPB)基因又名ERCC3基因,它既是NER途径不可缺少的成员又是转录因子TFIIH的最大p89亚基。它是具有从3’端→5’端依赖ATP的单链DNA解旋酶活性的蛋白质,执行依赖DNA的ATP酶和解旋酶功能,在损伤DNA修复和基因转录中均起重要作用,并将两者有机偶联。该基因突变将导致3种不同的遗传疾病：着色性干皮病(xeroderma pigmentosum,XP),科凯恩氏综合征(cockayne’s syndrome,CS),毛发硫营养不艮(trichothiodystrophy,TTD)。其基因型通过在DNA修复和转录中的功能与表型联系起来。另外,XPB与p53存在物理和功能上的相互作用。现从XPB的3个方面即“一个基因,两种功能,3种疾病”作一综述。     

建立检测树鼩葡萄糖转运蛋白GLUT9 mRNA相对表达水平的实时荧光定量PCR方法

建立检测树鼩葡萄糖转运蛋白GLUT9 mRNA相对表达水平的实时荧光定量PCR方法.设计检测GLUT9(SLC2A9)及内参GAPDH mRNA的引物,以树鼩新鲜肾脏组织提取的总RNA为模板,进行实时荧光定量扩增,获得SLC2A9及GAPDH的标准曲线及其相对表达变化.测序结果显示扩增的SLC2A9及GAPDH核苷酸序...     

肺鳞癌患者与健康人血清的差异蛋白质组学研究

为筛选肺鳞癌的血清标志物,采用二维凝胶电泳(2-DE)技术分离I期肺鳞癌患者和健康人的血清蛋白质,PDquest图像分析软件识别差异蛋白质点,电喷雾串联质谱(ESI-Q-TOF MS/MS)鉴定差异蛋白,然后应用蛋白质印迹和免疫组化方法分别检测差异蛋白——结合珠蛋白-2(haptoglobin-2,HP-2)在肺鳞癌患者血清和健康人血清以及肺鳞癌组织和癌旁正常支气管上皮组织中的表达.建立了肺鳞癌患者和健康人血清的2-DE图谱,图像分析软件识别了1O个差异蛋白质点,质谱鉴定了4种差异蛋白;蛋白质印迹分析显示,HP-2在肺鳞癌血清中的表达水平显著高于健康人(P<0.05),但其表达水平与肺鳞癌的临床分期无明显相关性;免疫组化结果显示,HP-2在肺鳞癌组织中的表达水平高于癌旁正常支气管上皮组织(P<0.05).研究结果提示:HP-2是候选的肺鳞癌血清分子标志物,血清中HP-2水平对肺鳞癌诊断可能具有一定的参考价值;肺鳞癌组织中HP-2表达上调可能是患者血清中HP-2表达升高的原因之一.     

MLL3基因对宫颈癌细胞放射敏感性和DNA损伤修复能力的影响

摘要 目的：探究髓系/淋巴系或混合谱系白血病3基因（myeloid/lymphoid or mixed-lineage leukemia 3,MLL3）对宫颈癌细胞生长、转移、放射敏感性的影响。方法：选择60例宫颈鳞癌患者的癌组织及配对癌旁组织,采用实时定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测检测MLL3 mRNA水平。体外培养SiHa细胞,将其分为以下5组：Control组（不转染）、NC-sh组（转染阴性对照shRNA慢病毒）、MLL3-sh组（转染MLL3 shRNA慢病毒）、NC-OE组（转染阴性对照过表达慢病毒）和MLL3-OE组（转染MLL3过表达慢病毒）。进一步采用2300EX直线加速器9 MeV ?茁射线照射细胞建立放射抵抗SiHa细胞（SiHaR）,然后将其分为：NC-sh组、MLL3-sh组、8 Gy+NC-sh组和8 Gy+MLL3-sh组。NC-sh组和MLL3-sh组细胞不照射,8 Gy+NC-sh组和8 Gy+MLL3-sh组细胞用9 MeV β射线照射8 Gy。采用MTT法检测细胞增殖情况;Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡;Transwell检测细胞侵袭能力;qRT-PCR检测MLL3、共济失调毛细血管扩张征突变基因（ATM）、ATM-Rad3相关基因（ATR）、乳腺癌易感基因（BRCA1）和RAD50双链断裂修复蛋白（RAD50）的mRNA水平;Western blot检测MLL3、Bcl-2相关X蛋白基因（Bax）、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因（Bcl-2）、cleaved caspase 3、基质金属蛋白酶（MMP）2、MMP9和γ-H2AX的表达;免疫荧光染色检测γ-H2AX的表达。结果：与癌旁组织相比,宫颈鳞癌组织中的MLL3 mRNA水平显著降低（P<0.001）。与NC-sh组比较,MLL3-sh组SiHa细胞的MLL3 mRNA和蛋白相对表达量降低,细胞活力升高,细胞凋亡率、Bax和cleaved caspase 3蛋白相对表达量降低,Bcl-2蛋白相对表达量升高,侵袭细胞数量、MMP2和MMP9蛋白相对表达量升高（P<0.05）。与NC-OE组比较,MLL3-OE组SiHa细胞的MLL3 mRNA和蛋白相对表达量升高,细胞活力降低,细胞凋亡率、Bax和cleaved caspase 3蛋白相对表达量升高,Bcl-2蛋白相对表达量降低,侵袭细胞数量、MMP2和MMP9蛋白相对表达量降低（P<0.05）。与SiHa细胞相比,SiHaR细胞中的MLL3 mRNA和蛋白相对表达量均升高（P<0.001）。与8 Gy+NC-sh组比较,8 Gy+MLL3-sh组SiHaR细胞的细胞活力降低,γ-H2AX的蛋白相对表达量和γ-H2AX foci数目升高,ATM、ATR、BRCA1和RAD50的mRNA水平降低（P<0.05）。结论：宫颈癌细胞MLL3的表达下调促进了其生长和转移,但降低DNA损伤修复能力,提高宫颈癌细胞的放射敏感性。     

中国西北地区胃粘膜肠上皮化生危险因素调查

目的:明确中国西北地区人群胃粘膜肠上皮化生的危险因素。方法:通过病例对照研究,采用问卷调查表的形式,纳入了从2014年8月到2015年4月西京医院门诊就诊的具有胃镜检查报告单和/或胃粘膜病理检查报告单的患者。幽门螺杆菌的检测采用13C-/14C-尿素呼气试验或者快速尿素酶试验。结果:本研究共纳入了1800例患者,其中胃粘膜肠上皮化生患者261例。胃粘膜肠上皮化生的危险因素为年龄艹60岁(OR,2.317;95%CI 1.668-3.220;P0.001)、幽门螺杆菌感染(OR,2.911;95%CI2.339-3.623;P0.001)、吸烟(OR,2.322;95%CI 1.553-3.470;P0.001)、胃癌家族史(OR,2.229;95%CI 1.444-3.439;P0.001)、高盐饮食(OR,1.557;95%CI 1.118-2.168;P=0.009)、辛辣刺激饮食(OR,1.551;95%CI 1.121-2.147;P=0.008)、胆汁反流(OR,1.851;95%CI 1.135-3.021;P=0.014)。结论:我国西北地区胃粘膜肠上皮化生的危险因素为年龄艹60岁、幽门螺杆菌感染、吸烟、胃癌家族史、高盐饮食、辛辣饮食和胆汁反流。     

RhoGDI2在肺鳞癌、腺癌组织和肺癌细胞系中的表达及其临床意义

目的本研究探讨RhoGDI2在肺鳞癌和腺癌组织及肺癌细胞系中的作用及其临床意义。方法采用免疫组织化学和RT-PCR方法检测112例肺癌组织标本中RhoGDI2蛋白和20例新鲜肺癌组织中RhoGDI2 mRNA的表达,结合肺癌的临床病理特点进行分析。同时应用Western blot和RT-PCR方法检测肺癌细胞系中RhoGDI2蛋白和mRNA水平的表达情况。结果肺鳞癌和腺癌组织中RhoGDI2的表达与组织分级有关,随着分化程度的降低,RhoGDI2蛋白表达降低(P0.01);与TNM分期有关,随着分期级别的升高,RhoGDI2蛋白表达降低(P0.01);与是否淋巴结转移有关,存在淋巴结转移的标本,RhoGDI2蛋白表达降低(P0.01)。RhoGDI2蛋白的表达与组织类型、患者的年龄和性别无关。在选取的肺癌细胞系A549、95D、SPC-A-1和NCI-H446中,无论mRNA水平还是蛋白水平RhoGDI2都有表达,但表达水平不尽相同,在A549、NCI-H446细胞系中表达较低,在SPC-A-1、95D细胞系中表达相对较高。结论RhoGDI2与肺癌的发生发展和转移过程有关,进一步研究RhoGDI2与其作用因子之间的相互作用,将有助于进一步揭示肺癌发生发展及转移过程。     

口腔鳞癌α-catenin和β-catenin的表达与颈淋巴转移研究

采用蛋白杂交技术 ,对 6 8例口腔癌中的α catenin和 β catenin蛋白表达进行了研究 ,探讨其表达与口腔癌颈淋巴结转移的相关性 ,发现与未发生淋巴结转移的口腔鳞癌相比 (32 ) ,淋巴结转移的口腔鳞癌组织中(36 ) ,α catenin和 β catenin蛋白表达出现明显的降低 (P <0 .0 1 )。此结果提示了口腔鳞癌淋巴结转移与α catenin和 β catenin蛋白表达的丧失是密切相关 ,可以作为较有价值的判定肿瘤转移发生可能性以及愈后的判断指标     

Functional profiling of nucleotide Excision repair in breast cancer

Homologous recombination deficiency conferred by alterations in BRCA1 or BRCA2 are common in breast tumors and can drive sensitivity to platinum chemotherapy and PARP inhibitors. Alterations in nucleotide excision repair (NER) activity can also impact sensitivity to DNA damaging agents, but NER activity in breast cancer has been poorly characterized. Here, we apply a novel immunofluorescence-based cellular NER assay to screen a large panel of breast epithelial and cancer cell lines. Although the majority of breast cancer models are NER proficient, we identify an example of a breast cancer cell line with profound NER deficiency. We show that NER deficiency in this model is driven by epigenetic silencing of the ERCC4 gene, leading to lack of expression of the NER nuclease XPF, and that ERCC4 methylation is also strongly correlated with ERCC4 mRNA and XPF protein expression in primary breast tumors. Re-expression of XPF in the ERCC4-deficient breast cancer rescues NER deficiency and cisplatin sensitivity, but does not impact PARP inhibitor sensitivity. These findings demonstrate the potential to use functional assays to identify novel mechanisms of DNA repair deficiency and nominate NER deficiency as a platinum sensitivity biomarker in breast cancer.     

Differential activity of UV-DDB in mouse keratinocytes and fibroblasts: impact on DNA repair and UV-induced skin cancer

UV-damaged DNA-binding protein (UV-DDB) is essential for global genome nucleotide excision repair of UV-induced cyclobutane pyrimidine dimers (CPD) and accelerates repair of 6-4 photoproducts (6-4PP). The high UV-induced skin cancer susceptibility of mice compared to man has been attributed to low expression of the UV-DDB subunit DDB2 in mouse skin cells. However, DDB2 knockout mice exhibit enhanced UVB skin carcinogenesis indicating that DDB2 protects mice against UV-induced skin cancer. To resolve these apparent contradictory findings, we systematically investigated the NER capacity of mouse fibroblasts and keratinocytes. Compared to fibroblasts, keratinocytes exhibited an increased level of UV-DDB activity, contained significantly higher levels of other NER proteins (i.e. XPC and XPB) and displayed efficient repair of CPD. At low UVB dosages, the difference in skin cancer susceptibility between DDB2 KO and wild type mice was even much more pronounced than previously reported with high dose UVB exposures. Hence, our observations show that mouse keratinocytes express sufficient levels of UV-DDB for efficient repair of photolesions and efficient protection against UV-induced skin cancer at physiological relevant UV exposure.