甲醛致大鼠鼻腔癌与K-ras癌基因活化相关

为探讨甲醛致大鼠鼻腔癌的分子机制,对甲醛诱发的大鼠鼻腔癌细胞系FAT7中的转化序列进行检测.采用的实验方法,包括肿瘤细胞DNA与选择标志基因(neo)共转染、裸鼠成瘤性分析、Southern杂交、聚合酶链反应(PCR)和序列分析等.结果发现:在第二轮裸鼠肿瘤DNA中含有大鼠源性的K-ras基因序列,而无大鼠源性的H-ras、N-ras和p53基因序列.这表明甲醛诱发的大鼠鼻腔癌细胞系FAT7中所含的转化序列与H-ras、N-ras及p53基因无关,K-ras癌基因的活化可能参与甲醛致大鼠鼻腔癌.     

PPFP基因促进人正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1增殖和迁徙运动能力的体外实验研究

目的:研究PPFP基因对人正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1生物学特性的影响,以明确PPFP是否具有致瘤作用。方法以我们前期实验构建的PPFP基因慢病毒载体稳定转染细胞株Nthy-ori 3-1PPFP、空白慢病毒载体稳定转染细胞株Nthy-ori 3-1Vector和未转染细胞株Nthy-ori 3-1为研究对象,以MTT法检测细胞增殖情况,平板克隆形成实验检测克隆形成数,软琼脂集落形成实验检测集落形成率,划痕愈合实验观察各组细胞体外迁徙运动能力,流式细胞仪检测各组细胞凋亡和细胞周期。结果以Nthy-ori 3-1Vector组和Nthy-ori 3-1组细胞为对照组,Nthy-ori 3-1PPFP组细胞较对照组在细胞增殖能力、平板克隆形成数、软琼脂集落形成率、体外迁徙运动能力均明显提高或增强,而细胞凋亡率明显下降,G0/G1期细胞明显减少,S期及G2/M期细胞则显著增加。结论PPFP基因可显著促进人正常甲状腺细胞Nthyori 3-1的增殖能力,并显著抑制其凋亡和促进其迁徙运动能力,提示该基因可能在滤泡状甲状腺癌恶性增殖和侵袭转移过程中起关键性作用。     

化学致癌物DNP致人胚鼻咽上皮细胞转化相关基因的鉴定

为了探讨DNP致癌的分子机理,鉴定出化学致癌物二亚硝基哌嗪(DNP)致人胚鼻咽上皮细胞转化相关的基因及其活化方式．采用DNA共转染、裸鼠致瘤性试验、Southern杂交、PCR测序和序列同源性比较分析等,对DNP转化的人胚鼻咽上皮细胞株HENE—DNP进行研究．经过两轮DNA共转染和裸鼠致瘤性实验．Southern杂交表明,裸鼠肿瘤DNA中均含有人特异性高度重复序列Alu．用人Ha-ras、Ki-ras及N-ras癌基因特异性引物对裸鼠肿瘤DNA进行PCR扩增,仅能扩增出人Ha-ras基因相应的片段．Southem杂交进一步证实．裸鼠肿瘤DNA中存在与人Ha-ras基因片段大小一致的杂交带．RT-PCR产物测序,并将测序结果与GenBank进行序列同源性比较分析,发现裸鼠肿瘤中人Ha-ras基因cDNA第26位密码子第2位碱基发生了T→C的转换,编码的氨基酸由亮氨酸相应地变换成丝氨酸．化学致癌物DNP致人胚鼻咽上皮细胞转化相关的基因是Ha-ras,原癌基因c-Ha-ras激活可能是DNP转化人胚鼻咽上皮细胞的分子机制之一。     

肺鳞癌患者与健康人血清的差异蛋白质组学研究

为筛选肺鳞癌的血清标志物,采用二维凝胶电泳(2-DE)技术分离I期肺鳞癌患者和健康人的血清蛋白质,PDquest图像分析软件识别差异蛋白质点,电喷雾串联质谱(ESI-Q-TOF MS/MS)鉴定差异蛋白,然后应用蛋白质印迹和免疫组化方法分别检测差异蛋白——结合珠蛋白-2(haptoglobin-2,HP-2)在肺鳞癌患者血清和健康人血清以及肺鳞癌组织和癌旁正常支气管上皮组织中的表达.建立了肺鳞癌患者和健康人血清的2-DE图谱,图像分析软件识别了1O个差异蛋白质点,质谱鉴定了4种差异蛋白;蛋白质印迹分析显示,HP-2在肺鳞癌血清中的表达水平显著高于健康人(P<0.05),但其表达水平与肺鳞癌的临床分期无明显相关性;免疫组化结果显示,HP-2在肺鳞癌组织中的表达水平高于癌旁正常支气管上皮组织(P<0.05).研究结果提示:HP-2是候选的肺鳞癌血清分子标志物,血清中HP-2水平对肺鳞癌诊断可能具有一定的参考价值;肺鳞癌组织中HP-2表达上调可能是患者血清中HP-2表达升高的原因之一.     

冷藏对新鲜冰冻血浆诱导内皮细胞迁移的影响及其分子机制研究

探讨冷藏是否导致新鲜冰冻血浆(fresh frozen plasma,FFP)中的转化生长因子-β(transform growth factor-β,TGF-β)发生变化并降低其对内皮细胞迁移的诱导能力及其分子机制.为证实冷藏可能导致FFP中TGF-β的水平升高进而影响其功能,首先采用ELISA法分析当天解冻FFP(FFP Day 0)和解冻后4℃冷藏1～5天FFP中TGF-β含量,迁移实验及Western blot分析比较FFP(Day 0)和FFP(Day 5)处理人肺微血管内皮细胞(human pulmonary microvascular endothelial cells,HPMECs)后的细胞迁移率及TGF-β信号通路Smad2和Smad3磷酸化,进一步采用ALK5-siRNA和ALK5特异性抑制剂阻断细胞TGF-βⅠ型受体ALK5的活性,分析下调TGF-β/Smad2/3信号传导后的内皮细胞迁移率.结果显示:随着冷藏时间的延长,FFP中TGF-β1水平逐渐增加,其增加率为244.31 ng/(L.d)(P<0.05);与FFP(Day 0)相比,FFP(Day 5)诱导内皮细胞HPMECs的TGF-β信号通路Smad2/3磷酸化显著增加(P<0.05);不管是FFP(Day 0)还是FFP(Day 5)体外均能诱导内皮细胞迁移,与FFP(Day 0)相比,FFP(Day 5)诱导细胞迁移能力显著降低(P<0.05);阻断TGF-βⅠ型受体ALK5的活性、下调Smad 3信号传导可恢复FFP(Day5)诱导细胞迁移能力.上述结果表明,FFP能显著诱导内皮细胞迁移,4℃冷藏增加FFP中TGF-β1水平并增加内皮细胞TGF-β1信号传导,进而降低FFP诱导内皮细胞迁移.提示,FFP复苏疗效的提高可能与增加内皮细胞迁移有关,冷藏导致内皮细胞迁移降低进而降低FFP复苏疗效.