9V型肺炎球菌疫苗中多糖含量微孔板蒽酮-硫酸检测方法的建立及验证

目的建立微孔板蒽酮-硫酸法检测9V型肺炎球菌疫苗中多糖含量的检测方法,并对其进行验证和初步应用。方法通过对蒽酮-硫酸方法的改进,建立检测9V型肺炎球菌疫苗中多糖含量稳定可靠的微孔板蒽酮-硫酸法。分别对蒽酮-硫酸法中硫酸溶液浓度、加热时间进行优化,并对建立的方法进行特异性、线性、精密度及准确度的验证。结果最佳硫酸溶液比例为6∶1(浓硫酸∶水),最佳加热时间为10 min。在检测9V型肺炎球菌多糖、多糖衍生物及多糖蛋白结合物中多糖含量时,此方法特异性强;在20~120μg/m L范围内,标准曲线线性良好(r20.995);实验内及实验间均具有良好的精密度(CV值分别为2.92%~3.32%和3.10%~4.06%);准确度试验中3个质量浓度的回收率均在96.17%~106.63%之间。结论微孔板蒽酮-硫酸法可被用来有效、准确、稳定地检测9V型肺炎球菌多糖、多糖衍生物及多糖蛋白结合物中多糖的含量,该方法较传统蒽酮-硫酸法操作简便快捷,节约样品、试剂等材料,非常适用于相关的疫苗生产过程中的质量控制。     

应用苯酚法测定植物组织中的碳水化合物

为了还原糖和多糖的比色测定,曾经报道过许多的比色法。目前,常用的蒽酮比色法有许多缺点:蒽酮试剂较贵;而且蒽酮在硫酸中是不稳定的;也不可用于甲基化的糖和戊糖的测定。苯酚法可用于糖、甲基化的糖和多糖的比色测定,方法简捷、便宜、灵敏度高;实验时基本上不受蛋白质存在的影响,因而简化了糖的提取程序。依据Kochert方法,作了条件试验,取得了     

天可力氨糖胶囊中氨基葡萄糖硫酸钾测定方法比较

目的:选择一种能准确测定天可力氨糖胶囊中氨基葡萄糖硫酸钾含量的方法。方法:参照GB/T 20365-2006硫酸软骨素和盐酸氨基葡萄糖含量的方法进行液相色谱法测定以及利用盐酸氨基葡萄糖Fdson—Morgan反应后在525 nm左右波长处有吸收峰,测定其吸收值与标准品比较进行比色定量。结果:液相色谱法测定时胶囊中的其它中药成分干扰很大,数据偏差太大;而比色法测定时,氨基葡萄糖盐酸盐含量在175μg/mL浓度范围内,呈良好线性关系:Y(μg/mL)=0.196X-O.004,R=0.997,平均回收率102.09%。结论:该比色法测定方法灵敏、准确、简便,可供天可力氨糖胶囊中氨基葡萄糖硫酸钾含量测定。     

蕲蛇酶的中性己糖及唾液酸的含量测定

目的测定蕲蛇酶的中性己糖及唾液酸含量. 方法中性己糖采用苯酚-硫酸法(Dubois,1956)测定,唾液酸采用间苯二酚-盐酸法(Spiro,1966)测定.结果中性己糖平均含量为(3.45±0.81)%,唾液酸平均含量为(1.05±0.26)%.结论蕲蛇酶属于糖蛋白,已测定的中性己糖及唾液酸总量为(4.50±1.07)%.     

正交试验法优选伴抗宁口服液的闪式提取工艺

目的优选伴抗宁口服液的闪式提取工艺。方法采用正交试验法,以苯酚-硫酸比色法测定总多糖的含量为评价指标。采用闪式提取法提取中药材。结果伴抗宁口服液的最佳闪式提取工艺条件为药材用12倍量的水浸泡3 h,提取时间为1 m in,提取电压180 V。供试品平均回收率为99.27%（n=5）,RSD%为1.37。结论伴抗宁口服液的提取工艺方法经济、简单、稳定,可行质量可控。     

不同硫取代度昆布多糖硫酸酯的合成及理化性质初步研究

目的:对昆布多糖进行不同硫取代度的硫酸酯化修饰,并对其产物的硫酸基含量、糖含量与分子量进行检测,为研究不同硫取代度昆布多糖硫酸酯的生物活性奠定物质基础。方法:采用氯磺酸-吡啶法对昆布多糖进行硫酸化修饰,通过改变硫酸化修饰条件,来制取不同硫酸基取代度的昆布多糖硫酸酯;利用盐酸水解-硫酸钡比浊法测定昆布多糖硫酸酯的硫酸基含量,并通过公式求得其硫取代度;用苯酚-硫酸法测定昆布多糖硫酸酯的多糖含量,并使用HPGPC法测定其分子量。结果:两种不同硫取代度昆布多糖硫酸酯的硫酸基含量分别为37.8%、45.92%,取代度分别为1.07、1.51,糖含量分别为44.52%、37.19%,分子量分别为13000、16000。结论:利用氯磺酸-吡啶法对昆布多糖进行硫酸酯化修饰,该方法可以获取不同取代度产物,酯化率高。     

蒽酮法测定爬山虎果中糖类的含量

用蒽酮法测定爬山虎熟果中糖类的含量,波长620nm,检测线性范围0．01—0．5mg/ml,相关系数为0．9993,RSD＝5．64％回收率为98．56％。此方法操作简便准确、显色灵敏、重现性好、不受还原性物质的干扰。能测定总糖,还能测定可溶性糖,因此适合野生植物中糖类含量测定。     

天然产物中的糖含量测定方法正确性的研究

通过蒽酮-硫酸法和苯酚-硫酸法,采用不同的标准单糖以及不同的单糖组成比来测定天然产物中的糖含量,得到一种比较准确性高的方法,即按多糖中单糖组成比为标准来测定。     

高通量检测大样本桑黄发酵液总黄酮含量方法的建立

建立了大样本的桑黄发酵液样品中总黄酮的高通量测定方法。通过L9(34)正交实验设计优化,确定了基于亚硝酸钠-硝酸铝比色法的微孔板检测方法,优化后总黄酮含量测定的最佳反应条件:5%亚硝酸钠30μL,10%硝酸铝30μL,10%氢氧化钠50μL,室温反应10 min,检测波长为510 nm。检测结果表明,针对大样本检测,该法稳定性高,平均回收率为100.7%,相对标准偏差为0.607%,线性范围为0~50μg/m L,线性相关系数r2=0.9994。比较分析结果显示,和多种传统总黄酮测定方法相比,实验所建立的高通量测定方法检测大样本快速、准确、用药量小,且稳定性高。     

千斤拔多糖的提取纯化及其结构鉴定

利用正交试验考察千斤拔多糖的提取工艺,并比较脱蛋白方法中的Sevag法和三氯乙酸法的纯化效果,总糖含量测定采用苯酚-硫酸法,蛋白质含量测定采用考马斯亮蓝法;采用DEAE-52纤维柱法来分离多糖,并运用HPLC色谱来分析千斤拔多糖中的单糖成分。结果表明:经正交试验得出千斤拔多糖的最佳提取条件为时间2.5 h,料液比为1∶30,温度80℃,其多糖得率为8.558%。对比两种脱蛋白的方法,Sevage法萃取3次时蛋白的脱除效果最好。经DEAE-52纤维柱来分离多糖共分得7个组分。经HPLC色谱鉴定出有葡萄糖,甘露糖和阿拉伯糖,主要单糖成分为葡萄糖。     

60Co-γ射线处理稻草秸秆对其纤维质酶解效果的影响

通过60Co-γ射线处理干稻草秸秆以及提取的稻草粗纤维,研究辐照预处理后的稻草秸秆酶降解效果。采用DNS法和硫酸-苯酚法分别测定处理样品中水溶性还原糖和总糖的含量;通过电子显微镜扫描观测辐照处理对稻草秸秆纤维组织结构的影响。结果表明:采用1 000 kGy~1 500 kGy的辐照剂量处理稻草秸秆,能有效破坏稻草的纤维组织结构,特别是稻草表面硅晶结构和纤维结构,随着辐射剂量的加大破坏程度增强,稻草水溶性还原糖和总糖含量显著增加。辐照与酶复合处理稻草秸秆能极显著地提高稻草秸秆纤维的转化率,稻草秸秆降解的水溶性还原糖含量达到21.44%,总糖含量达75.85%。辐照处理对木质素降解无明显影响。     

香苓胶囊中多糖的含量测定

为建立香苓胶囊的含量测定方法,采用苯酚硫酸法,以葡萄糖作为标准品,分光光度法于490砌波长处测定吸光度。实验显示多糖的线性范围为2—10μg,／mL,r=0．9997,加样回收率为99．81％（n=5）,RSD=1．95％,样品中多糖的质量分数为89．22％,表明该方法可用于本品的质量控制。     

皱皮木瓜多糖的分离、纯化及抗氧化活性研究

为了研究木瓜多糖的提取、分离、纯化与抗氧化活性,采用水提醇沉法提取皱皮木瓜中的多糖,得多糖Ⅰ;利用Sevag法除去多糖中的蛋白质后得多糖Ⅱ;以30%H_2O_2脱除色素后再次醇沉得到精制多糖Ⅲ;透析除去小分子后利用AB-8大孔树脂进行分离以水、30%、50%、70%和95%乙醇洗脱,其中水洗脱部分多糖为Ⅳ。用苯酚-硫酸法测定多糖含量。多糖Ⅰ得率为9.83%,多糖含量(纯度,下同)为64.45%;脱蛋白后多糖Ⅱ中多糖含量为78.23%;经脱色后多糖Ⅲ含量达88.39%;大孔树脂水洗脱部分多糖Ⅳ含量为89.74%。以DPPH(2,2-二苯基-1-苦肼基)清除率和Fe~(3+)还原力方法测定木瓜多糖的抗氧化活性,木瓜多糖均体现出一定的抗氧化作用,呈浓度依赖性增强,其中多糖Ⅰ、Ⅱ表现出更好的作用。     

1株结皮真菌胞外多糖的初步研究

探究一株真菌胞外多糖最佳生产时间及其组成成分。通过对其发酵液胞外多糖含量及上清液黏度的测定,确定其最佳产糖时间,并用此条件提取胞外多糖粗品,用蒽酮-比色法测得提取的胞外多糖粗品的糖含量,薄层色谱法对所得的胞外多糖进行组分分析。当发酵至第5天时该株真菌的生物量、胞外多糖产量及发酵液的黏度均达到最高峰,分别为0.606 4 g/60 mL、20.22μg/mL和4.74 mPa/s,并且胞外多糖含量与发酵上清液黏度在一定程度上呈正相关。用蒽酮-比色法测得提取的胞外多糖粗品的糖含量为19.58μg/mL,并用4 mol/L的硫酸完全水解,硅胶G薄层层析,甲醇-氯仿(1:1,体积比)展层,苯胺-二苯胺-磷酸显色,表明其组成成分可能为D-甘露糖、D-半乳糖和D-葡萄糖。该菌株所产的胞外多糖具有提高结皮能力和防沙保水作用,为利用微生物治沙提供参考和种质资源。     

黄花菜多糖的提取工艺及含量测定

采用单因子试验和L9（33）正交试验设计对水浴提取黄花菜多糖的最佳工艺条件进行了优化,并对苯酚—硫酸法测定黄花菜多糖作了修正。结果表明：提取黄花菜多糖的最佳工艺条件为：温度80℃、浸提6h、料液比1∶15时,黄花菜多糖的提取率最高,多糖含量为2.68%。并以此计算出苯酚—硫酸法葡萄糖标准曲线测黄花菜多糖的换算因子为4.2。     

沙葱萤叶甲成虫越夏期间糖类、蛋白及脂肪含量的变化

【目的】明确沙葱萤叶甲Galeruca daurica成虫在越夏不同阶段主要生理生化指标变化的特点,为进一步揭示其越夏的机理提供基础。【方法】分别采用蒽酮硫酸法和氯仿-甲醇法测定越夏不同阶段(越夏前、越夏期和越夏后)的沙葱萤叶甲成虫体内总糖、海藻糖、糖原、脂肪及水分含量;采用考马斯亮蓝G-250染色法测定总蛋白含量。【结果】总糖、水分和总蛋白含量在沙葱萤叶甲成虫越夏前(分别为26.81μg/mg,77.47%和63.17μg/mg)和越夏后(分别为26.41~26.85μg/mg,75.29%~76.65%和59.53~64.93μg/mg)显著高于越夏期(分别为18.77~21.14μg/mg,61.50%~67.20%和39.82~52.54μg/mg),而糖原含量变化趋势正好相反(越夏前:8.43μg/mg;越夏后:5.91~6.14μg/mg;越夏期:10.18~11.58μg/mg),脂肪含量在越夏后(11.48%~11.65%)显著低于越夏前(42.48%)和越夏期(36.05%~64.79%);脂肪和总蛋白含量在越夏期间逐渐下降,而水分、总糖和糖原含量变化不明显;海藻糖含量在越夏不同阶段波动较大(2.66~25.31μg/mg)。【结论】脂肪和糖原是沙葱萤叶甲成虫越夏的主要能源物质。     

贵州省野生火棘果营养成分与气候因子相关性分析

野生火棘在贵州省的资源分布广泛，由于省内各地区气候因子的不同，导致野生火棘果实的营养性成分存在差异。为探究贵州省野生火棘果的营养性成分差异，明确影响营养成分积累的气候因子，筛选出适宜生长区域，采用硫酸-苯酚法、全自动凯氏定氮仪、索氏提取法和福林-酚比色法对火棘果粗多糖、总蛋白、总脂肪和总多酚含量进行测定，并进行差异性分析、主成分分析和聚类分析；同时结合气候因子，进行灰色关联度的相关性分析。结果显示，不同产地之间4种营养成分含量存在明显差异，可将10个不同产地火棘分成3大类；灰色关联度分析表明，相对湿度是影响贵州野生火棘果营养成分含量的主要影响因子；降低相对湿度利于火棘果中营养性成分的积累。     

正交实验法优选香菇多糖的提取工艺及其硫酸酯化研究

目的:考察香菇多糖的提取工艺,制备香菇多糖硫酸酯。方法:采用正交试验法考察加水量、提取时间、提取温度和粒度4个因素对香菇多糖硫酸酯提取率及其中总糖含量的影响,应用硫酸法制备香菇多糖硫酸酯并对得到的成分进行鉴别。结果:通过对正交实验结果的极差分析。得出提取温度和加水量对多糖提取率影响比较著性,提取温度和提取时间对多糖含量的影响比较著性。确定香菇多糖提取的最佳工艺为:应用40倍量的水,每次提取4 h,提取温度90℃,香菇粒度为80目。制备的多糖硫酸酯中硫酸基含量为22.80%,显示了相对较强的生物活性。结论:本实验成功的确定了提取香菇多糖的最佳工艺,制备了硫酸基含量较高的硫酸酯化香菇多糖。     

复方利血平氨苯蝶啶片采用RH-HPLC法同时测定其4种有效成分的含量

目的:通过RH-HPLC法准确并同时测定复方利血平氨苯蝶啶片中4种有效成分(包括氢氯噻嗪、硫酸双肼屈嗪、氨苯蝶啶和利血平)的含量。方法:通过RH-HPLC法测定其4种有效成分含量,色谱柱Eclipse XDB-C18;流动相:0.01 mol/L庚烷磺酸钠溶液(用冰醋酸将其PH值调整为3.0);甲醇(40:60);检测波长:265nm;流速:0.8 ml/min。结果:氢氯噻嗪、硫酸双肼屈嗪、氨苯蝶啶线性范围为0.04~0.25 mg/ml,利血平线性范围为0.5~2μg/ml;4种有效成分回收率96%~105%,平均回收率102%。结论:采用RH-HPLC法能够准确、简单、迅速的同时测定复方利血平氨苯蝶啶片中氢氯噻嗪、硫酸双肼屈嗪、氨苯蝶啶和利血平的含量,因此该种方法能够用于测定复方利血平氨苯蝶啶片的含量。     

苯酚消毒剂中邻苯基苯酚和对叔戊基苯酚的高效液相色谱测定法

目的建立同时测定苯酚消毒剂中的邻苯基苯酚和对叔戊基苯酚2种杀菌有效成分的高效液相色谱法。方法采用安捷伦ZorbaxODS,25cmx4.6mm,粒径5μm的反相色谱柱,流动相为乙腈-1%醋酸溶液(60:40),流速1.5mL/min,检测波长278nm,柱温为25℃下进行检测。结果邻苯基苯酚和对叔戊基苯酚的线性范围为5~150mg/L,相关系数为0.9999,检出限为5mg/L,相对标准偏差小于1.02%,加标回收率为93.6%~98.5%。结论该方法操作简便、快速、灵敏度高,适合消毒剂中的邻苯基苯酚和对叔戊基苯酚的同时测定。