成体和亚成体爪鲵端脑组织学初步研究

为了探讨爪鲵端脑的发育特点,充实比较神经生物学的研究资料,本文采用常规HE染色法,初步研究了成体和亚成体爪鲵端脑的组织学结构特征.结果 表明:爪鲵嗅球内细胞从外到内大致可分为6层结构,亚成体的细胞数量少于成体;成体爪鲵的侧脑室所占空间较大,脉络丛更为丰富,原始大脑皮层和原始海马都比亚成体发达,后者大脑内原始梨状区较为发达;隔区位于原始海马的下方,成体和亚成体都没有外侧隔核和内侧隔核之分,也没有外侧界沟作为原始梨状区和纹状体的分界,而在亚成体的侧脑室壁有内侧界沟区分原始海马和隔区,成体则没有;此外,爪鲵的纹状体属于古纹状体,杏仁核是位于第三脑室两侧的两个细胞团,端脑内细胞形态和大小分化较为单一.这些都表明亚成体爪鲵的端脑已大致具备了成体所具有的结构,并且也说明了爪鲵在两栖纲动物中属于较原始的种类,这在一定程度上填补了有关有尾两栖类神经系统资料以及神经发育资料的空白.     

磷酸化的p44/42MAPK在成年猫端脑和间脑内的分布

为研究丝裂原激活的蛋白激酶（p44/42mitogen-activated protein kinase,缩写为p44/42MAPK)在正常动物脑内的功能,用免疫组织化学方法对正常家猫端脑和间脑内,磷酸化p44/42MAPK的分布进行了研究,结果表明在正常猫端脑和间脑内,磷酸化p44/42MAPK的存在范围比较广泛,嗅球,岛叶,梨状皮质,外侧隔区,海马锥体细胞层,下丘脑腹内侧核及弓状核内均有较多的阳性神经元,杏仁核存在中等量的阳性神经元,另外,新皮质Ⅱ层,内侧隔区,齿状回,纹状体,后脑室旁核和外侧缰核,下丘脑室旁核有散在分布的阳性神经元,外侧膝状体和丘脑腹后核有许多胶质细胞呈免疫阳性染色。咱束内有浓密的阳性纤维。本研究结果表明p44/42MAPK存在于与嗅觉,情绪,内分泌和记忆活动等功能有关的脑区和核团,提示其参与这些功能过程,本文还提示p44/42MAPK既与神经细胞,也与神经胶质细胞的信号转导有关。     

鸽丘脑听觉中继核团传出神经投射的研究

应用神经示踪物生物素标记的葡聚糖对环鸽丘脑听觉中继核团的传出神经投射进行了研究。结果发现：（１）丘脑卵圆核的传出纤维投射至端脑新纹状体内侧的Ｌ２听区;（２）卵圆核壳的传出纤维投射至Ｌ１、Ｌ３和部分Ｌ２听区,在Ｌ区周围亦存在许多标记终末;（３）尾侧卵圆核壳的传出投射参与了卵圆核壳的形成并发出二束纤维分别投射至下丘脑腹内侧核和端脑新纹状体Ｌ区外侧的旁听区。本实验结果首次揭示在鸟类丘脑听中继核团、端脑新     

扬子鳄胚胎发育后期端脑背侧区的超微结构观察

背侧区位于大脑半球的外侧沟和终沟之间,向脑腔突入,几乎占满整个脑腔,有视觉,听觉和躯体感觉等重要功能,一些作者称它为脑室背嵴(Dorsal ventricular ridge).爬行类成体端脑背侧区的形态学和超微结构研究在国外有所报道1-3,而其胚胎发育详细资料只见于1987年Yanes对蜥蜴背侧区的研究4.扬子鳄(Alligator sinensis Fauvel)为国家重点保护动物之一,研究其组织胚胎结构在系统进化和饲养方面有着重要意义,同时也可填补国内在爬行类脑研究上的空白.       

四种细胞因子在中华蟾蜍脑中的分布

采用免疫组织化学SABC法,研究白介素-1α、干扰素-γ、神经生长因子-β和肿瘤坏死因子-α在成体中华蟾蜍脑中的表达和分布特点。结果发现,白介素-1α阳性细胞数量很多,分布于脑的各个区域。白介素-1α多在细胞的胞体中,而原始海马锥体细胞,中脑的背前侧被盖核和腹后侧被盖核中的细胞可见阳性的突起。干扰素-γ阳性细胞数量较多,分布在端脑的原始海马和隔区,丘脑腹外侧核,下丘脑的视前区、视交叉上核和腹侧漏斗核,中脑被盖的背前侧被盖核、腹前侧被盖核、背后侧被盖核和腹后侧被盖核中,小脑的Purkinje细胞层和延髓的网状核,其中原始海马,背前侧被盖核和背后侧被盖核,视交叉上核,Purkinje细胞层和网状核中的细胞中可见阳性突起。神经生长因子-β阳性细胞数量较少,主要存在于下丘脑的视前区和视交叉上核,中脑被盖的腹前侧被盖核,小脑的Purkinje细胞层和延髓的网状核中,其中视前区、Purkinje细胞层和网状核中细胞可见阳性突起。肿瘤坏死因子-α阳性细胞数量最少,分布范围仅限于中脑被盖背前侧区和延髓的网状核及中缝核,但细胞具有阳性突起。因此,白介素-1α和干扰素-γ在成体动物脑中分布较为广泛,可能是神经细胞生命活动所必需的;而神经生长因子-β和肿瘤坏死因子-α在成体动物脑中分布范围狭窄,其作用可能仅限于脑中的某些特殊区域。     

小鼠胚胎干细胞移植入成体大鼠脑内的区域特异性存活与分化

全能区域非特异性的胚胎干细胞是研究成体不同脑区控制干细胞分化能力的十分有力的工具。胚胎干细胞源性神经前体细胞移植入成体脑后可分化为功能性神经元,但是未分化的胚胎干细胞在成体脑内各个部位的存活、生长与分化的潜能差异尚不清楚。本文旨在探讨成体脑组织对胚胎干细胞的影响及胚胎干细胞在成体脑内的一系列行为。将少量转绿色荧光蛋白未分化的小鼠胚胎干细胞移植入成体大鼠脑内不同部位,分别于移植5、14和28d后处死大鼠,进行形态学观察及免疫组化定性,以了解未分化的小鼠胚胎干细胞在大鼠脑内不同区域的存活、生长与分化。结果发现未分化的小鼠胚胎干细胞可逐步整合入受体组织并向nestin阳性神经前体细胞分化。移植细胞及其后裔在海马生长最为旺盛,而在隔区最差（P〈0．01）;移植细胞分化为神经干细胞的效率也是在海马最高,而在隔区最低（P〈0．01）。提示只有部分脑区适合胚胎干细胞及其后裔生存,并提供促进其分化的有益环境。因此,由于位置特异的微环境因子及环境因素的存在,宿主组织特性对决定中枢神经系统疾病的细胞替代疗法策略是相当重要的。     

1例雄性朱鹮脑内脑啡肽的免疫组织化学分布

用免疫组织化学方法研究脑啡肽(ENK)在极危物种朱(Nipponia nippon)脑内的分布,结合计算机图像分析仪检测免疫阳性细胞和末梢的灰度值。ENK阳性细胞、纤维和终末分布如下:发声核团有原纹状体中间区腹部、丘脑背内侧核外侧部、中脑丘间核、中脑背内侧核、延髓舌下神经核。听觉中枢有丘脑卵圆核壳区、中脑背外侧核壳区、脑桥外侧丘系腹核、上橄榄核、耳蜗核等。内分泌核团有视前区前核、旧纹状体增加部、下丘脑外侧核、下丘脑腹内侧核等。结果表明,朱脑内ENK可能对发声、听觉和下丘脑内分泌的生理活动有一定的调制作用。     

鸣禽栗 新纹状体L复合区与发声控制系统的神经联系

利用辣根过氧化物酶顺、逆行追踪的方法对鸣禽栗端脑新纹状体Ｌ复合区的神经联系进行了研究。结果表明,新纹状体Ｌ复合区中的Ｌ２区主要接受来自丘脑卵圆核的传入,并与Ｌ１和Ｌ３区有纤维联系;而Ｌ１和Ｌ３区传出纤维投射至高级发声中枢腹侧的架区、古纹状体粗核喙背侧的杯区以及上纹状体腹部尾外侧等处;Ｌ复合区亦接受来自新纹状体前部巨细胞核内侧部的传入投射。     

大鼠脑视前区性双形核的位置,立体形态和细胞组成

本文用尼氏染色,在光镜下观察了大鼠脑视前区性双形核的位置、立体重塑和细胞组成。结果表明,该核团是一对圓柱形小核团,在视前区第三脑室两侧对称分布,头尾两端较细,中部稍膨大,其总长度雄性为262±35μm,雌性205±32μm。核团内由大、中、小三种神经元组成。雄性核团还可分为腹外侧和背内侧二个亚群,腹外侧亚群主由中神经元组成,背内侧亚群以大神经元占多数,雌性核团无明显的分群现象。     

鸣禽栗Wu新纹状体L复合区与发声控制系统的神经联系

利用辣根过氧化物酶顺、逆行追踪的方法对鸣禽栗Ｗｕ端脑新纹状体Ｌ复合区的神经联系进行了研究。结果表明,新纹状体Ｌ复合区中的Ｌ２区主要接受来自丘脑卵圆核的传入,并与Ｌ１和Ｌ３区有纤维联系;而Ｌ１和Ｌ３区传出纤维投射至高级发声中枢腹侧的架区、１古纹状体粗核 背侧的杯区以及上纹状体腹部尾外侧等处;Ｌ复合区亦接受一自新纹状体前部巨细胞核内侧部的传入投射。     

中药蟾酥的药理作用研究进展

蟾酥是我国传统中药,是蟾蜍科动物中华大蟾蜍或黑眶蟾蜍的干燥分泌物。蟾酥所含化学成分主要有蟾蜍内酯类、蟾毒色胺类等,现代药理学研究表明其具有抗肿瘤、强心、局麻、镇痛、抗炎等多种作用。本文综述近年来国内外学者对蟾酥的化学成分、药理作用的研究概况。     

红藻氨酸和GABA受体在中华大蟾蜍卵母细胞的表达

本文报道了利用中华大蟾蜍卵母细胞作为外源性膜蛋白的表达及其功能特性研究的模式系统。将大鼠脑的mRNA微量注入蟾蜍卵母细胞(每个卵母细胞注射50ng),在19℃下经48h以上培养后,由外源mRNA表达的大鼠脑的红藻氨酸和γ-氨基丁酸受体被整合到了卵母细胞膜上。红藻氨酸(5×10~(-5)mol/L)和γ-氨基丁酸(10~(-4)mol/L)所诱导的膜电流分别达到294.0±6.4nA(n=5)和309.5±4.9nA(n=4)。红藻氨酸浓度在10~(-3)mol/L时,其诱导的膜电流达最大值。进而,注射mRNA的卵母细胞,~(36)Cl~-流入速度比对照组高一倍多。这些结果表明,中华大蟾蜍卵母细胞,如同爪蟾卵母细胞一样,能表达具有功能的外源膜蛋白(受体蛋白和离子运输蛋白)。     

四种除草剂对中华大蟾蜍蝌蚪红细胞微核及核异常的影响

研究了除草剂精克草星、苯磺隆、使它隆和乙草胺单独及联合作用时对中华大蟾蝌蚪红细胞微核及核异常的影响。结果表明,处理２４小时时,单独作用的除草剂均可不同程度地引起微核率及核异常细胞率等遗传指标的上升。而且,在一定的浓度下各指标分别有高峰期,其中微核率与对照组差异极显著（Ｐ〈０．０１）或显著（Ｐ〈０．０５）。微核率与除草剂浓度之间无显著相关,不表现出剂量－效应关系。四种除草剂联合作用的微核率等指标反而     

激光照射对中华大蟾蜍早期胚胎染色体的影响

应用YAG倍频激光器对中华大蟾蜍四细胞期胚胎进行照射,观察胚胎的生长、发育,并对激光照射致畸的胚胎在尾芽期用压片法进行染色体分析。实验结果表明：激光照射后正常的胚胎其染色体无变化,激光照射致畸的胚胎其染色体有丢失和加倍等变化。     

蟾蜍种间核移植胚胎发育早期LDH同工酶的表现

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳,对中华大蟾蜍(Bufo bufo比gargarizans)与花背蟾蜍(Bufo raddei)种间核移植胚胎发育早期六个不同阶段中全胚胎的乳酸脱氢酶(LDH)同工酶进行了分析。酶谱比较的结果表明:在正、反种间移核胚胎中,供体核LDH基因的活动开始表现于尾芽胚期;此前,杂种胚胎中LDH同工酶谱类型与受体一致。     

不同能量激光照射后中华大蟾蜍早期胚胎发育及其蛋白质谱变化的研究

应用YAG倍频激光器选择不同能量密度激光微束对中华大蟾蜍4细胞期胚胎进行照射,观察胚胎的生长、发育状况,统计出膜率、畸胎率和死亡率。实验结果表明：低能量激光照射明显地提高了胚胎的孵化速度,且使畸变率降低;而高能量激光对胚胎发育有明显抑制作用,而且使畸变率增高。不同能量密度激光微束照射中华大蟾蜍早囊胚,0．5h后制备样品进行双向电泳,凝胶成像后用PDQuest软件进行分析。结果显示激光照射对蛋白质点数及其分布有影响,影响程度与照射激光密度有关。结论：激光照射可以影响胚胎发育和蛋白质的合成。     

镉、铅对蟾蜍精巢毒作用的酶学研究

为研究镉、铅对精巢的生化毒作用机理 ,应用氯化镉、硝酸铅溶液对成年雄性蟾蜍进行腹腔染毒 (按镉计 0 .1、0 .2、0 .4、0 .8mg/ kg体重 ;按铅计 1、2、4、8mg/ kg体重 ) ,连续染毒 7d后活体解剖 ,测定分析精巢中各种酶的活性。结果显示 ,在镉染毒下 ,精巢乳酸脱氢酶 (L DH)和酸性磷酸酶 (ACP)的活性随镉染毒剂量的增加而降低 ,而碱性磷酸酶 (AL P)未发现明显变化 ;在铅染毒下 ,乳酸脱氢酶 (L DH)和碱性磷酸酶 (AL P)的活性随铅染毒剂量的增加而降低 ,而酸性磷酸酶 (ACP)未发现明显变化 ;乳酸脱氢酶 (L DH)同工酶在镉、铅染毒下则主要表现为酶带 L DH1 、L DH2 的抑制或缺失和 L DH5活性的增强。因此 ,镉、铅对蟾蜍的雄性生殖毒性机理可能与酶的活性存在着一定的关系 ,L DH可以考虑作为反映镉、铅中毒对精巢功能影响程度的一种有价值的生化指标     

中华大蟾蜍输卵管促受精因子的实验分析

在孕酮作用厂,切除卵巢的中华大蟾蜍输卵管上皮细胞不仅能够使外源移植的卵母细胞在输卵管中正常运行,还保证卵母细胞正常受精。根据输卵管卷曲部分泌物的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析,存在依赖孕酮的３３ｋＤ蛋白质。经兔抗３３ｋＤ蛋白抗体处理具输卵管分泌物的卵母细胞,受精率受到显著抑制·提示该蛋白有促受精活性。输卵管分泌物介入受精涉及复杂的多种因子。     

中华大蟾蜍卵母细胞质膜存在钙依赖性的氯离子通道

本文采用双微电极电压钳方法研究了中华大蟾蜍卵母细胞内源性电压门控型离子通道的成分及其生理特性。卵母细胞去极化至 -30 mV 及更正电压时,有一持续的电压依赖性外向电流出现。钾离子通道拮抗剂四乙基氯化氨(tetraethy-lammonium chloride, TEA, 10 mmol/L)和 4- 氨基吡啶(4-aminopyridine, 4-AP, 10 mmol/L)协同作用时,该电流只能被抑制到最大电流幅度的(23.4±0.72)%。但是,上述浓度的TEA和4-AP 与氯离子通道拮抗剂5- 硝基-2, 3- 苯酚丙胺苯甲酸盐 (5-nitro-2,3-phenypropylamino benzoate, NPPB, 30 μmol/L)、无钙 Ringer 氏液或钙离子通道拮抗剂维拉帕米(40 μmol/L)协同作用时,可分别将此外向电流抑制到最大电流幅度的(2.1±0.08)%、(2.2±0.04)% 和(3.1±0.15)%。结果表明,中华大蟾蜍卵母细胞质膜上除有钾离子电流之外,还存在钙依赖性的氯离子电流。     

Molecular phylogenetic relationship of toads distributed in the Far East and Europe inferred from the nucleotide sequences of mitochondrial DNA genes

The toads of the Bufo bufo species group are widely distributed in the Eurasian continent and Japanese Archipelago. In this study, we analyzed the mtDNA gene sequences of this species group and estimated the divergence time to clarify the evolutionary relationships and biogeography of toads distributed in the Far East and Europe. The phylogenetic tree indicated that this group produced Bufo bufo in Europe, whereas it produced B. japonicus in the Far East. B. japonicus was divided into three major clades corresponding to a group consisting of B. j. gargarizans in China, B. j. bankorensis in Taiwan, and B. j. miyakonis on Miyako Isl. and eastern and western groups of Japanese B. j. japonicus subspecies group. The eastern and western groups were divided into several subclades which tended to reflect the region-specific geographic distribution of all localities except B. j. japonicus from Hakodate. The estimated branching times of these clades suggest that geological events may have influenced the divergence of the toads distributed in the Far East and Europe.