兔隔核刺激及隔核阿片受体在镇内脏痛中的作用

本工作以电刺激内脏大神经测定清醒家兔的内脏痛阈。实验观察到,以弱电流刺激隔核对内脏痛阈有升高、降低和无明显变化三种效应;向家兔双侧隔核注入阿片受体激动剂埃托啡(etorphine)2μg/2μl,注药后 5min,内脏痛阈即升高,维持 40min;静脉注射纳洛酮O.2mg/kg或 2μg/2μl纳洛酮注入中脑导水管周围灰质(PAG)均能阻断隔核内注入埃托啡的镇痛作用;电针刺激能抑制内脏痛,静脉注射纳洛酮 0.4mg/kg 能阻断这一效应,但对电针后效应无明显影响,向隔核内注入纳洛酮 2μg/2μl亦能阻断针效,而且后效应消失。结果提示,镇内脏痛与内阿片肽活动有关,隔核的阿片受体被激活即有明显抑制内脏痛的作用,其作用的传出通路可能通过 PAG;隔核的阿片受体参与电针镇内脏痛过程。     

下丘脑室旁核加压素能神经元参与电针刺激对实验性内脏痛的抑制

本实验采用内脏痛的实验模型,探讨室旁核中的加压素在针刺抑制内脏痛中的作用。实验结果如下:(1)大鼠在在射酒石酸锑钾(0.1％,10ml/kg,i.p.)后,出现可定量的扭体反应,能作为观察内脏痛的客观指标。(2)电针对内脏痛有抑制效应,即具有镇痛作用。(3)电刺激室旁核,能加强电针对内脏痛的抑制效应,损毁室旁核,则此抑制效应基本消失。(4)脑室注射加压素抗血清(14μl)或加压素拮抗剂[d(CH_2)_5Tyr(Me)-AVP,500ng/5μl]都能明显减弱电针的抑制效应。(5)腹腔注射加压素拮抗剂(10μg/kg),不能翻转电针的抑制效应。上述实验结果表明,下丘脑室旁核的加压素能神经元参与了电针刺激对实验性内脏痛的抑制。     

硝普钠造成狗低血压时脑内注射东莨菪碱对电针升压作用的影响

于14条清醒狗静脉内匀速注射硝普钠造成急性实验性低血压时(动脉收缩压从131±6mmHg 降至94±4mmHg),在中脑中央灰质、下丘脑腹内侧核区、中脑中缝核旁网状结构微量注射东莨菪碱20μg(溶于2μl生理盐水),可以阻断电针的升压作用。如果在低血压清醒狗中于上述中枢部位微量注射乙酰胆碱(ACh)200μg(溶于2μl生理盐水),可引起血压明显回升(收缩压从94±4mmHg 升到110±6mmHg,P<0.01),持续约10min。实验结果表明:用舒血管药物造成实验性低血压时,电针引起的升压作用与中脑中央灰质、下丘脑腹内侧核区、中脑中缝核旁网状结构等部位的胆碱能 M 受体的激活有关。     

肌神经刺激和穴位电针诱发的延脑网状巨细胞核的单位放电

电刺激麻痹家兔的腓深神经,在延脑内侧网状结构记录诱发电位和单位反应。此外,还观察电针足三里-三阴交穴对后者的影响。结果如下:1.根据动作电位各成分的大小,测得:腓深神经Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类纤维的兴奋阈分别是1、2和5—10T,而最大反应阈则分别是2、4—10和15—25T。当电刺激强度达到5T 时,通常能在双侧网状巨细胞核区记录到诱发反应,并随强度增大而增大。中缝大核区的反应相似。2.分析了共81个单位对不同刺激强度的放电反应,大体划为三类:Ⅰ类有5个,Ⅱ类24个,Ⅲ类52个。在Ⅱ类单位中,有14个仅对Ⅱ类传入发生反应,另10个则对Ⅱ和Ⅲ类传入均产生反应,称作“会聚型”单位。此外,还观察到半数单位能被皮神经δ类传入所兴奋。3.5个巨细胞核单位和2个中缝大核单位对电针穴位的反应表现为:电针频率为2周/秒时,细胞放电率虽增不多,但在20分钟的电针期间能维持同样的兴奋水平;频率为80周/秒时,初期放电率明显增加,但5分钟后迅速下降至低于2周/秒时水平。这似可提示临床远节段穴位电针以低频刺激为宜。     

重度急性失血对刺激家兔中脑中央灰质诱发防御升压反应的影响

重度急性失血(30％总量)可使麻醉家兔防御性升压反应明显降低(P<0.05)。吸入低氧(含10％～14％氧气)混合气1～2min可使防御升压反应轻度增加(P<0.05)。持续低氧10～20min则使防御升压反应明显降低(P<0.01)。失血状态下侧脑室注射纳洛酮50～80μg/100μl,可使基础血压和防御升压反应明显升高(P<0.01)。提示重度失血时,防御升压反应明显降低可能与中枢缺氧及失血时脑内阿片样物质的释放抑制心血管中枢有关。     

冠状动脉狭窄程度和药物对频域心电图的影响

本实验在于阐明频域心电图(FCG)可以反映冠状动脉血流量(CBF)。狗的冠状动脉(CA)左前降支予以轻度狭窄,R_x、R_(xy)、F_(min)值都增大,说明FCG这些参数的变化比由CA左旋支狭窄引起的变化提前出现(左旋支在中度狭窄时才出现FCG的变化)。当狭窄程度达到中度或重度时,除了R_y在中度狭窄不发生明显变化外,其余指标都显著增大(p<0.05),F_(min)和R_(xy)增大程度尤其明显(p<0.01),心率(HR)和CBF显著下降,主动脉平均压(P_a)轻度下降。 在CBF减少的情况下,通过CA灌注硝酸甘油(8μg/min)10min后,HR、CBF、R_x、R_y、R_(xy),和F_(min)没有明显变化,而小冠状动脉远端平均压(P_c)降低(p<0.01),p_x、P_y也降低(p<0.05)。在相同情况下,灌注烟浪丁,HR和P_a几乎不变,P_c和CBF明显上升;除F_(min)外,FCG所有的指标都增大(p<0.05)。在CA狭窄的情况下,麦角新碱可诱发血管收缩,反映在P_a、HR和CBF轻度下降和P_c、P_x、P_y、R_x、F_(min)、R_y和R_(xy)显著上升,CA灌注麦角新碱(0.2μg/min)后,FCG的指标随着缺血程度的改变而变化。     

硫酸酯酶2型基因体内表达促进5-氟脲嘧啶诱发的小鼠骨髓抑制恢复作用研究

采用半定量RT-PCR和重组基因体内表达法观察了硫酸酯酶2基因(Sulfatase 2,Sulf2)在5-氟脲嘧啶(5-Fluorouracil, 5-Fu)诱发的小鼠骨髓抑制和再生过程中作用.结果表明:Sulf2在小鼠骨髓抑制和再生过程中呈现先上升,后下降的动态表达;电转pcDNA3.1-Sulf2基因实验组外周血白细胞数和血小板数在5-Fu注射后第7天分别为(1216.7±457.9)/μl和(8.1±5.4)万/靗,明显低于对照组[分别为(1691.7±228.9)/μl和(14.7±2.1)万/μl],实验组单条腿骨髓细胞总数在第7天为(94.2±21.1)万,显著低于对照组(173±59.9)万,但在第11天为(585±337.9)万,又显著地高于对照组(255±65.3)万,实验组第7天10000个骨髓细胞总集落形成数为(9±8.4),显著低于对照组(39±12.2),统计均有显著性差异(p<0.05).这些结果提示Sulf2可能对5-Fu诱发的小鼠骨髓抑制后的再生具有促进作用.     

一种刺激内脏大神经的慢性测痛方法

用聚四氟乙烯绝缘多股银丝作双极电极,埋置于左侧大内脏神经上,以刺激大内脏神经引起行为反应所需的最小电流强度作为内脏痛觉阈值。刺激参数为短串单相方波,串长500ms,波宽1ms,频率40Hz,强度为每隔5s递增约0.1mA,至出现行为反应时停止。30只家兔121次测试,内脏痛阈均值为1.16±0.056mA。在18只家兔中每只兔测定12次痛阈,其阈值相当稳定,波动在0.07mA 之间,用随机区组方差分析无显著意义。在14只家兔中静脉注射芬坦尼(20μg/kg),5min 后阈值升高显著,维持15min,其后渐趋恢复。作者认为,本方法可用于测定内脏痛阈的实验研究。     

猫延髓背部微量注射纳洛酮对电针增强胃运动效应的影响

利用应变规记录33只急性猫的胃窦部蠕动,同时用双极电极记录其胃电。结果发现,微量注射吗啡(10μg/2μl)于低位延髓背部或电针双侧“足三里”都能引起胃窦部蠕动增强(P<0.01)和部分动物簇状锋电位发放。如果事先向低位延髓背部微量注射纳洛酮(2μg/5μl),则电针“足三里”的增强胃窦部蠕动的效应就不再出现。这些结果提示电针“足三里”引起的胃窦部蠕动增强与脑内阿片样物质释放,及其作用于低位延髓背部的一些神经结构有关。     

电针对清醒家兔压力感受性反射的重调定

实验在22只清醒家兔上进行。分别用苯肾上腺素(20μg/kg,iv)和硝普钠(30μg/kg,iv)改变血压,同时记录心率,以血压-心率关系为指标,观察电针“足三里”穴(4mA,3Hz,0.5ms,持续20min)对压力感受性反射的重调定作用。电针时,基础血压及心率无明显改变,但血压-心率关系回归直线的斜率明显加大,表明压力感受性反射的敏感性增强。用记录神经动作电位的方法证明,电针“足三里”时主要兴奋Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类纤维。上述结果提示,电针可通过兴奋躯体传入纤维对压力感受性反射重调定,增高压力感受性反射的敏感性,故能提高压力感受性反射纠正异常血压的能力。     

海马背部微量注射埃托啡对家兔内脏大神经伤害性刺激引起回缩反应的影响

慢性实验中,电刺激清醒家兔内脏大神经模拟内脏痛刺激,以前肢回缩反应(Withdrawreaction,WR)为痛反应指标,探讨了背海马内微量注射埃托啡对WR阈值的影响。结果表明:(1)单侧海马内微量注射埃托啡2μg/2μl,可显著提高兔WR阈值,作用维持20min。(2)该效应对剂量有依从关系,并能被静脉注射0.4mg/kg纳洛酮拮抗。(3)海马内微量注射埃托啡后,WR阈值提高和呼吸频率抑制呈分离现象。提示:海马内阿片受体可能参与内脏痛的镇痛作用。     

反相高效液相色谱法测定血浆游离氨基酸

本文报告了采用高效液相色谱法反相梯度洗脱,邻苯二甲醛和β-巯基乙醇柱前衍生化,荧光检测分血浆游离氨基酸。实验采用线性洗脱,在50分钟内可同时测定18种氨基酸,血浆样品的预处理简单,衍生化反应的时间仅需1分30秒,血浆样品的实际进样量少于1μl。本测定方法的精确度高,各个氨基酸保留时间的变异系数平均为0.89%±0.45%(SD),峰面积的变异系数平均为2.06%±1.76%(SD),各个氨基酸的浓度在15—150μmol/L的范围中,线性关系的相关系数平均为0.985±0.0305(SD)。准确性好,各个氨基酸的回收率平均为97.6%±5.1%(SD)。实验还讨论了氨基酸分离时溶液pH值、柱温、离心速度等因素对分析结果的影响。     

家兔中央灰质内微量注射纳洛酮和p-氯苯丙胺对针刺镇痛的影响

本文用66只家兔进行实验。按 Sawyer 氏图谱,借定向仪将不锈钢套管插入中央灰质(P_(9.5)、L_1、H_(-0.5))和杏仁核(A_2、L_(4.5)、H_(-5))。手术4天以后进行实验。用钾离子透入法测定痛阈。观察结果如下:(1)家兔电针或静脉注射吗啡(5毫克/公斤)20分钟后痛阈明显提高。此时,于中央灰质内注射生理盐水(2微升/3分钟)并不减弱针刺镇痛和吗啡镇痛作用,而注射纳洛酮(2微克/2微升/3分钟)后,则可显著地对抗这两种镇痛作用,这种对抗作用在给药后7分钟最强,与对照组相比,差别有非常显著意义(p<0.01)。然而,等量纳洛酮注射到中脑网状结构或杏仁核却不能对抗针刺镇痛和吗啡镇痛。(2)中央灰质内注射p-氯苯丙胺(PCA,4微克/2微升/3分钟)后24、72、120小时,电针镇痛作用明显减弱,与生理盐水组(2微升/3分钟)相比,差别极为显著(p<0.01)。对 PCA 部分减弱针效的兔子,于中央灰质内注入等量纳洛酮仍可进一步对抗针刺镇痛作用。以上结果提示,家兔中央灰质的内啡肽和5-羟色胺共同参与针刺镇痛。     

在清醒家兔中电针对刺激下丘脑引起的防御反应的抑制作用

在清醒家兔中电刺激下丘脑背内侧区可引起血压升高、肾交感神经放电增加、心率减慢等一系列防御反应的表现。用低频电脉冲刺激一侧“足三里”穴20min,可明显抑制刺激下丘脑引起的防御反应。这种抑制效应在停止电针后仍能持续一段时间,但可被静脉内注射纳洛酮(0.4mg/kg)翻转。预先注射纳洛酮也能防止电针的抑制效应。损毁下丘脑基底部包括弓状核在内的局部区域后,电针对防御反应的抑制作用基本消失。在弓状核区微量注射 L-谷氨酸钠(50mM,1μl)也可抑制刺激下丘脑引起的防御反应。这种抑制效应同样可被静脉内注射纳洛酮翻转。以上实验结果表明,电针可抑制刺激下丘脑引起的防御反应,弓状核区的内啡肽神经元可能在电针对防御反应的抑制效应中起重要的作用。     

伤害性刺激和电针对大鼠中缝大核内缝-脊神经元的效应

用玻璃微电极细胞外记录大鼠中缝大核神经元放电,刺激脊髓胸段背外侧部诱发逆行动作电位,根据其潜伏期恒定性,能跟随高频刺激以及可与自发放电碰撞而消失等标准来鉴定缝-脊神经元。共记录45个缝-脊神经元,其传导速度多在15—60m/s 范围。对伤害性刺激发生兴奋性(增频)反应的31个,抑制性(减频)反应的6个。两个类型神经元的自发放电频率分别为5.74±0.96Hz 和12.03±2.68Hz。另有3个为兴奋抑制转化型,反应的转化与背景自发放电水平有关,即放电频率低时,对伤害性刺激为兴奋性反应,而当自发放电频率增高时,则转化为抑制性反应。此外还有5个神经元对伤害性刺激无明显反应。电针“足三里”对兴奋型的缝-脊神经元(n=13)能明显激活并抑制其伤害性反应,后者可能是由于下行抑制而产生的继发性效应。     

1,6-二磷酸果糖联合局部封闭Calot三角对胆囊切除术心率变异性的影响

目的:观察胆囊切除术围术期输注1,6-磷酸果糖联合术中局部封闭Calot三角对血流动力学及心率变异性的影响.方法:择期胆囊切除术惠者40例,年龄28-67 岁,ASA分级Ⅰ-Ⅱ级,分为对照组(n=20)和试验组,试验组(n=20)患者在切皮前静脉滴注1,6-二磷酸果糖,在胆囊牵拉前在Calot三角注射2%利多卡因5ml,选择全凭静脉麻醉(TIVA),气管内插管,机控通气.分别于胆囊牵拉前5分钟(TO)、牵拉时(T1)、牵拉五分钟(T2),牵拉十分钟(T3)监测两组患者心率变异性和血流动力学.结果:牵拉瞬间对照组和试验组,TP值降低(p＜0.05);牵拉五分钟时,对照组MAP、HR、HFnu较牵拉前和牵拉时降低有显著差异(p＜0.01),且LF/HF比值较其他时间点降低(p＜0.05);试验组HR牵拉前和牵拉时降低有统计学意义(p＜0.05).牵拉十分钟时,两组TP较牵拉前降低有统计学意义(p＜0.05);对照组MAP、HR较牵拉前和牵拉时降低有统计学意义(p＜0.05).结论:切皮前静脉滴注1,6-二磷酸果糖联合局部封闭Calot三角对心率变异性和血流动力学影响小,可降低胆心反射对自主神经功能的影响.     

大鼠脑室内注射ANGⅡ和ANGⅡ抗体对尿钠排出和肾皮质Na~+·K~+-ATPase的影响

在麻醉大鼠的侧脑室注射16pg血管紧张素Ⅱ(ANGⅡ),15min内出现尿钠增多的反应并持续90min,平均动脉血压保持稳定。肾皮质Na~+·K~+-ATPase活性(1.51±0.26μmolPi/mg Pro·h)显著低于侧脑室注射人工脑脊液的对照值(2.66±0.28μmol Pi/mg Pro·h,P<0.01),而侧脑室注射ANGⅡ抗体后5min内则出现尿钠减少的反应并持续135min。肾皮质Na~+·K~+-ATPase活性(3.61±0.34μmol Pi/mg Pro·h)显著高于对照值(P<0.05)。股静脉和脊髓蛛网膜下腔分别注射16pg ANGⅡ,均未出现尿钠增多的反应。结果表明,脑内的内源性ANGⅡ具有引起尿钠增多的作用;并提示这种作用可能与肾脏Na~+·K~+-ATPase活性的抑制有关。     

侧脑室注射白细胞介素-2的心血管效应

目的:探讨IL-2的中枢心血管效应及作用机制.方法:SD大鼠脲脂(1.2 g/kg)腹腔麻醉,侧脑室微量注射不同浓度白细胞介素-2(IL-2),及纳络酮、阿托品、酚妥拉明预处理后注射IL-2,观察平均动脉压(MAP)和心率(HR)的改变.结果:侧脑室微量注射IL-2 500 IU和1000 IU对血压与心率无明显影响.注射IL-2 1500 IU,MAP在给药后5min开始升高,10 min达到最高,增幅达(10±1.8)mmHg(P＜0.01),此效应持续15 min,给药25min后恢复至给药前水平;在给药后10 min,心率升高达峰值,增幅达(25±2)b/min(P＜0.05),效应持续10 min;分别用纳络酮、阿托品预处理5 min后,均能阻断IL-2的升压和增加心率的作用.酚妥拉明预处理后,不能阻断IL-2的升压及增加心率的作用.结论:侧脑室注射IL-2可引起大鼠血压增高和心率加快.脑内的阿片系统和胆碱能系统可能参与IL-2的中枢心血管效应.α-肾上腺能受体可能不参与此作用.     

红霉素对狗胃肠道电活动的影响

以移行性综合肌电(MMC)作指标,研究红霉素(EM)消化道副作用与平滑肌电活动的关系。结果发现,在狗消化间期,静脉注射EM50～400μg/kg,在3～7min内即诱发剂量依赖性早发MMCⅢ相。此早发Ⅲ相起于胃、十二指肠,向小肠尾端移行,其锋电发生率、Ⅲ相持续时间和移行速度等均与自发Ⅲ相类似。胃、十二指肠内分别注射EM500μg/kg,经24.5±7.5min和23.7±2.2min才诱发移行性Ⅲ相。双侧膈上迷走神经切除后,EM仍诱发早发Ⅲ相,但其移行速度减慢(p<0.01),阿托品能阻断EM诱发Ⅲ相的发生。EM在Ⅲ相诱发后的70～250min甚至更长时间内仍使MMC周期和Ⅲ相起始紊乱,甚至完全破坏MMG,代之以超速扩布锋电簇活动。EM不影响进食后狗的胃肠电活动。因此,EM消化道反应的发生可能与其被吸收进血液后通过内在胆碱能神经启动早发Ⅲ相及其后较长后效应有关。     

低频电针对2型糖尿病神经痛大鼠DRGP2X3受体的抑制作用

目的观察低频电针(electroacupuncture,EA)对2型糖尿病神经痛(diabetic neuropathic pain,DNP)模型大鼠的痛阈以及L5背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)的P2X3受体表达的影响。方法实验一:将50只SD大鼠随机分为对照组8只和造模组42只。造模组给予高脂高糖饮食联合小剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ,35 mg/kg)腹腔注射建立大鼠DNP模型,对照组以常规饲料喂养并给予相同剂量的柠檬酸缓冲液注射。造模组中模型成功的大鼠进一步分为模型组(DNP group)与低频电针治疗组(DNP+EA group)。电针治疗选用双侧"足三里"、"昆仑"穴,频率2 Hz,强度1 m A治疗15 min,后2 m A治疗15 min,每日1次,共治疗7次。观察大鼠高脂高糖饲养0、5周的胰岛素敏感指数(insulin sensitivity index,ISI)及0、5、7周空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)水平变化;采用动态足底触觉仪检测大鼠高脂高糖饲养0、5、7周及电针3、5、7 d 6个时间点双后足缩腿阈(paw withdrawal thresholds,PWTs)的变化;采用免疫荧光法测定L5 DRG P2X3受体表达。实验二:将DNP造模成功的大鼠分为电针组(EA+Vehicle group)和P2X3激动剂组(EA+αβ-me ATP group)。电针干预同上。EA+αβ-me ATP group于每次电针干预前在大鼠足趾下注射αβ-me ATP(0.6μmol/L,100μL)。EA+vehicle group大鼠注射等剂量的PBS缓冲液,其余干预相同。检测机械痛阈。结果 1与对照组大鼠比较,模型组大鼠高脂高糖饲养5周后ISI均明显降低(P0.01),高脂高糖饲养7周后FPG明显升高(P0.01),说明成功建立2型糖尿病模型(造模成功率为69.04%);2PWTs:与对照组比较,模型组大鼠双侧PWTs明显降低(P0.01),说明2型DNP造模成功;与模型组比较,低频电针治疗组大鼠在治疗后各时点均出现双侧PWTs的显著增加(P0.01);而与电针组比较,P2X3激动剂组双侧PWTs均明显降低(P0.01)。3免疫荧光法检测结果显示:与对照组比较,模型组大鼠L5 DRG P2X3阳性细胞表达明显增加(P0.01);与模型组比较,低频电针治疗组大鼠L5 DRG P2X3阳性细胞表达均明显减少(P0.01)。结论低频电针能通过下调L5 DRG P2X3受体有效改善2型DNP。