硫酸酯酶2型基因体内表达促进化疗药物诱发的小鼠骨髓抑制恢复作用研究

采用半定量RT-PCR和重组基因体内表达法观察了硫酸酯酶2基因（Sulfatase 2,Sulf2）在5-氟脲嘧啶（5-Fluorouracil, 5-Fu）诱发的小鼠骨髓抑制和再生过程中作用。结果表明：Sulf2在小鼠骨髓抑制和再生过程中呈现先上升,后下降的动态表达;电转pcDNA3.1-Sulf2基因实验组外周血白细胞数和血小板数在5-Fu注射后第7天分别为(1216.7±457.9)/μl和(8.1±5.4)万/μl,明显低于对照组［分别为(1691.7±228.9)/μl和(14.7±2.1)万/μl］,实验组单条腿骨髓细胞总数在第7天为(94.2±21.1)万,显著低于对照组（173±59.9）万,但在第11天为(585±337.9)万,又显著地高于对照组（255±65.3）万,实验组第7天10000个骨髓细胞总集落形成数为(9±8.4),显著低于对照组（39±12.2),统计均有显著性差异（p<0.05）。这些结果提示Sulf2可能对5 Fu诱发的小鼠骨髓抑制后的再生具有促进作用。     

口服携带人PF4基因的减毒沙门氏菌对大剂量化疗小鼠的促造血重建作用

目的:探索口服携带人PF4基因的减毒沙门氏菌对大剂量化疗小鼠造血重建作用。方法:通过在大剂量化疗前／后喂服携带PIRES2-EGFP／PF4减毒沙门氏菌,检测化疗后小鼠的生存率,小鼠在不同时间外周血血常规、骨髓细胞数、骨髓中Sca-1和C-kit细胞含量、不同时间骨髓生成各系细胞的集落数等。结果:在大剂量化疗前、后均口服携带PIRES2-EGFP／PF4减毒沙门氏菌组小鼠生存率高于只在化疗前口服携带PIRES2-EGFP／PF4减毒沙门氏菌组;两组口服携带PIRES2-EGFP／PF4减毒沙门氏菌组小鼠存活率明显高于PBS对照组及携带空载体的减毒沙门氏菌组;口服携带PIRES2-EGFP／PF4减毒沙门氏菌组小鼠在化疗后第9~12天的外周血血小板数、骨髓细胞中Sca-1和C-kit阳性细胞含量明显比对照组高,第5天、9天、12天的骨髓细胞总数、骨髓细胞形成Mix集落数明显增加。结论:口服减毒沙门氏菌SL3261为载体的PF4基因可以保护小鼠免受损伤,并促进化疗损伤小鼠的造血恢复。     

KCL22/NOD-SCID小鼠慢性粒细胞白血病移植瘤模型的建立及其鉴定

目的研究人慢性粒细胞白血病细胞株KCL22在NOD-SCID小鼠体内致白血病的能力,为慢性粒细胞白血病血液移植瘤模型鼠的建立奠定基础。方法取对数生长期的KCL22细胞2×107个,经尾静脉注射入NOD-SCID小鼠,对照组小鼠注射无菌PBS。观察小鼠一般情况,瑞氏染色监测血象和骨髓象变化,PCR检测骨髓细胞BCR-ABL基因转录水平,HE染色观察肝、脾组织肿瘤细胞浸润情况。结果实验组小鼠于注射细胞后约4周开始出现反应力下降、精神萎靡、股骨肌肿大、后肢骨节出血点等体征,外周血白细胞从第5周逐渐增多,计数较对照组显著升高(P0.05),血涂片可见幼稚粒细胞,肝、脾、骨髓组织切片可见白血病细胞浸润,骨髓细胞高表达BCR-ABL融合基因,未经治疗存活约70天,较对照组显著缩短(P0.05)。结论 KCL22细胞可成功构建NODSCID小鼠慢性粒细胞白血病移植瘤模型。     

地榆鞣质对环磷酰胺致小鼠骨髓抑制的保护作用研究

为了观察地榆鞣质对骨髓抑制的保护作用,本文采用腹腔注射环磷酰胺致小鼠骨髓抑制模型。造模成功后,将骨髓抑制小鼠按体重随机分为:模型组、集落刺激因子组、地榆鞣质20、10、5 mg/kg三个剂量组,另设正常对照组。连续灌胃10 d,每天一次,以外周血液白细胞数量、骨髓细胞DNA含量和CD34+的表达以及骨髓细胞O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)蛋白的表达为评价指标,研究地榆鞣质对CTX所致骨髓抑制的治疗作用。结果显示地榆鞣质可显著升高小鼠外周血WBC(P0.05);显著升高小鼠骨髓DNA含量(P0.05);显著促进CD34+的表达(P0.05);显著促进MGMT蛋白的表达(P0.05)。通过本研究可以看出地榆鞣质可显著拮抗CTX所致小鼠骨髓抑制。     

HAPO促进放射损伤小鼠的造血重建

目的 明确人促血液血管细胞生成素 (HAPO)对骨髓抑制小鼠的造血重建作用。方法 研究HAPO、G-CSF对骨髓抑制小鼠的促造血作用,以700 cGy 137Csγ射线全身照射的Balb/c小鼠为模型,观察照射后小鼠的生存率;检查血常规;计数内源性脾结节;计数骨髓细胞数;采用半固体培养基进行集落培养检测骨髓细胞的高增殖潜能;取小鼠骨髓细胞接种于96孔培养板,分别在照射前或照射后加HAPO、G-CSF培养72hr,MTT方法测定活细胞数;取小鼠骨髓细胞,分别在照射后加HAPO,培养3周后观察各组小鼠骨髓细胞的生长情况。结果 HAPO、G-CSF均可明显提高放射后的小鼠的生存率;使内源性的脾集落增加。照射后的各组小鼠外周血白细胞变化较为明显,HAPO组白细胞恢复快于PBS组,也可高于G-CSF组。各组小鼠骨髓细胞数虽然14天时G-CSF组最为明显,但32天时HAPO组骨髓细胞数超过G-CSF组,至42天时基本恢复正常;而G-CSF组在32天、42天时骨髓细胞数仍低于正常值。在7天、14天、32天时取各组小鼠骨髓细胞高增殖潜能检测试验,HAPO组生成的GEMM-CFU数均最多。在照射前与HAPO、G-CSF孵育的骨髓细胞,HAPO组活细胞数量比对照组明显增高,而G-CSF组与对照组无明显差异。骨髓细胞被照射后培养72hr时,MTT测定显示不同剂量HAPO、G-CSF均能促进放射后骨髓细胞的增殖。骨髓细胞被照射后继续培养3周,HAPO组均有造血岛生成,细胞sca-1、CD31呈阳性,周围CD31阳性的内皮细胞增多。而PBS组则未出现造血岛,基质细胞中极少有CD31阳性细胞的内皮细胞,未发现sca-1阳性细胞。结论 体内、外实验表明,人促血液血管细胞生成素HAPO对放射损伤的Balb/c小鼠有明显的促造血重建作用,提高小鼠的生存率,促进其造血干细胞的增殖与生长。     

Jmjd3和Ezh2拮抗调节小鼠骨折愈合

目的:探讨Jmjd3和Ezh2在小鼠骨折愈合过程中的作用。方法:以软骨细胞条件性基因敲除8-10周龄小鼠为研究对象,按基因型随机分为6组,每组5只:其中实验组基因型为Jmjd3~(fl/fl)/Col2a1-Cre ~(ERT2),Ezh2~(fl/fl)/Col2a1-Cre ~(ERT2)或Jmjd~(3fl/fl)/Ezh2~(fl/fl)/Col2a1-Cre ~(ERT2);对照组基因型为Jmjd3~(fl/fl),Ezh2~(fl/fl)或Jmjd3~(fl/fl)/Ezh2~(fl/fl)。建立骨髓腔中插入固定针的稳定性胫骨骨折模型,于骨折术后3天、5天和7天腹腔注射Tamoxifen 3 mg/次/天。各组于术后3W处死,并于骨折部位取材行X线片及组织学检查。结果:通过连续的X线影像学及HE组织切片观察,骨折术后3周是判断小鼠骨折愈合情况的最佳时间点。X线片发现骨折术后3W时软骨细胞内Jmjd3被敲除小鼠的骨折线较对照组明显且骨化骨痂大小和密度均较低,HE切片显示骨化骨痂面积显著低于对照组,而软骨骨痂面积高于对照组;相反,X线片发现Ezh2被敲除小鼠的骨痂面积明显大于对照组,且密度高于对照组,HE组织切片显示Ezh2被敲除的小鼠的骨化骨痂的钙化程度更高,骨小梁更粗更密集。最后,X线片和HE切片均没有发现软骨细胞Jmjd3和Ezh2同时被敲除的小鼠与对照小鼠之间存在明显差异。结论:以软骨细胞特异基因敲除小鼠为基础,我们首次发现Jmjd3具有促进骨折愈合的作用,而Ezh2具有抑制骨折愈合的作用;并且发现Jmjd3和Ezh2对抗调节小鼠的骨折愈合过程,这些发现为骨折愈合治疗提供了新的分子实验基础。     

红色诺卡氏菌细胞壁骨架对小鼠肝癌细胞生长的抑制效果

目的:通过构建H22荷瘤小鼠模型,观察红色诺卡氏菌细胞壁骨架(Nocardia Rubra Cell Wall Skeleton,N-CWS)对H22荷瘤小鼠肝癌细胞生长的抑制效果。方法:复苏并培养H22细胞,将H22细胞以皮下方式接种到小鼠右侧腋部,建立H22荷瘤小鼠肝癌模型,随机分为对照组(生理盐水组)、低浓度N-CWS组(400μg/m L)与高浓度N-CWS组(800μg/m L),分别灌胃1次/d,共灌胃14 d,最长接种肿瘤15 d后处死小鼠,观察肝癌细胞的大小和重量。结果:治疗组小鼠肿瘤质量明显低于对照组(1.46±0.16)g,且高浓度组小鼠肿瘤质量(0.52±0.13)g明显低于低浓度组(0.79±0.13)g,组间对比差异有统计学意义(P0.05)。在治疗第3 d起直至结束,治疗组小鼠肿瘤体积均明显低于对照组,从第5 d起直至结束,高浓度组小鼠肿瘤体积明显低于低浓度组(P0.05)。第5 d起至结束,治疗组小鼠肿瘤体积增长的变化明显缓于对照组(P0.05)。高浓度组小鼠肿瘤体积的增长在第5 d后明显缓于低浓度组(P0.05)。对照组在第9 d时,增长变化最为显著,较第7 d增加约400 mm3。低浓度组变化较稳定。高浓度组肿瘤增长明显变缓,第7 d后最为明显,后逐渐趋于缓和。结论:N-CWS可以明显抑制肿瘤生长,且高浓度N-CWS抑制肿瘤生长效果更佳。     

双炔失碳酯(抗孕-53)对家兔抗生育效应及血浆孕酮和雌激素的影响

家兔配后1天灌服抗孕-53(10.5mg/kg),第11天剖腹检查,对照组着床数为9.7±1.6(平均值±SEM),实验组为0.4±0.4;兔妊娠第7—9天连续灌服抗孕-53(每天5mg/kg),17天剖检,对照组活胎数为7.5±1.1,实验组活胎数为0.3±0.3,死胎数为7.0±0.5;兔妊娠第22天肌肉注射抗孕-53(1.25mg/kg)一针,30天剖检,对照组活胎数为12.2±0.2,实验组均为死胎11.9±0.5。说明抗孕-53有明显抗着床、抗早孕和终止中期妊娠的作用。抗孕-53对家兔抗着床时,血浆孕酮和雌激素变化不显著;抗孕-53对早孕家兔血浆孕酮水平明显下降,但对血浆雌激素水平无影响。     

地榆皂苷类成分对环磷酰胺致小鼠骨髓抑制的保护作用研究

为了观察地榆皂苷类成分对骨髓抑制的保护作用,本文采用腹腔注射环磷酰胺致小鼠骨髓抑制模型。造模成功后,将骨髓抑制小鼠按体重随机分为:模型对照组、集落刺激因子组、地榆皂苷Ⅰ5、2.5、0.5 mg/kg三个剂量组,地榆皂苷Ⅱ5、2.5、0.5 mg/kg三个剂量组,地榆皂苷元5、2.5、0.5 mg/kg三个剂量组,另设正常对照组。连续灌胃7 d,每天一次,以外周血液白细胞数量、骨髓细胞DNA含量和CD34+的表达以及骨髓细胞O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)蛋白的表达为评价指标,研究地榆皂苷类成分对CTX所致骨髓抑制的治疗作用。结果显示地榆皂苷类成分可显著升高小鼠WBC(P0.05);显著升高小鼠骨髓DNA含量(P0.05);显著促进CD34+的表达(P0.05);显著促进MGMT蛋白的表达(P0.05)。通过本研究可以看出地榆皂苷类成分可显著拮抗CTX所致小鼠骨髓抑制。     

地榆总皂苷对~(60)Co-γ射线所致骨髓抑制小鼠外周血象的保护作用及其机制

本文探讨地榆总皂苷(TSSO)对~(60)Co-γ射线所致骨髓抑制小鼠的药效及其分子机制。实验采用650 cGy~(60)Co-γ射线一次性全身照射诱导骨髓抑制小鼠模型,灌胃不同剂量TSSO(1、0.5、0.1 mg/kg),每天一次,共10d。分别于第4、7、10 d检测小鼠外周血WBC、RBC、HCT、PLT及PCT水平;次日测定肝、脾、胸腺指数,计数骨髓有核细胞数,并检测骨髓细胞中GM-CSF、IL-3、SCF及c-Kit mRNA表达。结果显示,TSSO能显著升高小鼠外周血WBC、RBC、HCT、PLT及PCT水平,提升小鼠骨髓有核细胞数目并提高骨髓细胞中GM-CSF、IL-3、SCF及c-Kit mRNA表达。提示TSSO对~(60)Co-γ射线所致骨髓抑制具有明显保护作用,其机制可能与提高GM-CSF、IL-3、SCF及c-Kit mRNA表达水平有关。