用RFLP和PCR—RFLP技术研究东北虎和华南虎线粒体DNA多态性

采用ｍｔＤＮＡＲＦＬＰ和ＰＣＲＲＦＬＰ技术研究了东北虎和华南虎的ｍｔＤＮＡ的多态性。在ｍｔＤＮＡＲＦＬＰ研究中,分离纯化了东北虎和华南虎肝、肾和心脏组织的ｍｔＤＮＡ,用２０种识别６碱基对的限制性内切酶消化,结果只有１种限制性内切酶（ＸｂａⅠ）检测到多态性片段,其余１９种限制性内切酶消化产生的限制性格局在东北虎和华南虎完全一致。在ＰＣＲＲＦＬＰ研究中,用ＰＣＲ技术分别扩增了东北虎和华南虎ｍｔＤＮＡ的控制区（ｃｏｎｔｒｏｌｒｅｇｉｏｎ）,用８种识别４碱基对的限制性内切酶分别对扩增产物进行消化,结果只有１种限制性内切酶（ＲｓａⅠ）检测到多态性片段。ｍｔＤＮＡＲＦＬＰ及ＰＣＲＲＦＬＰ的结果均提示东北虎和华南虎之间的遗传距离极小。这可能与下列因素有关：两者分布区间无天然隔离屏障;具有强扩散能力;近几百年才被相互隔离。     

盐渍条件下野大豆群体的遗传分化和生理适应：同工酶和随机扩增多态D…

黄河三角洲野大豆盐渍群体的耐盐性高于附近的正常群体。群体内个体间耐盐能力差别很大。盐渍群体有比最耐盐的栽培大豆品种耐盐能力高得多的个体,也有对盐相当敏感的植株。同工酶分析表明群体内高水平多态性,但酶谱与抗性没有相关性。盐渍与正常群体间的遗传一致性高达０．９６。用改良的随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）方法,１０个引物扩增得出群体内多态位点百分数为６８／１８８＝０．３６。看来,绝大多数位点与耐盐能力无关     

用分子生物学技术对草菇进行菌株鉴别

利用ＡＰ－ＰＣＲ和ＲＡＰＤ技术对三个草菇菌株进行鉴别,其结果与用草菇菌株Ｖ３４基因文库中的中等重复序列为探针进行限制性内切酶长度多态性分析（ＲＦＬＰ）,及对编码核糖体５．８ＳｒＲＮＡ的ＤＮＡ（ｒＤＮＡ）进行ＰＣＲ扩增后的产物进行限制性内切酶长主多态性分析（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）的结果相一致。这一结果显示出用这四种方法对草菇菌株进行鉴别具有相似的效果。同时用这四种方法构建的分子生物学标记显示出这三个菌株     

RAPD标记构建水稻分子连锁图

利用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）,在一个水稻（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ Ｌ．）的双单倍体（ＤＨ）群体中发展分子标记,仅用５２ 个ＲＡＰＤ标记建成了一个水稻ＲＡＰＤ分子连锁图。该图覆盖基因组的总长度为８９８．４ ｃＭ （ｃｅｎｔｉｍ ｏｒｇａｎ）,标记间的平均间距为１７．３ ｃＭ,它能与用同一群体构成的ＲＦＬＰ图谱互相补充     

中国大陆若干群体的黑果蝇的线粒体DNA多态性研究

本文研究了果蝇Ｄ．ｖｉｒｉｌｉｓ种群Ｄ．ｖｉｒｉｌｉｓ线粒体ＤＮＡ（ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌＤＮＡ,ｍｔＤＮＡ）的多态性。用９种限制性内切酶ＸｂａⅠ,ＥｃｏＲⅠ,ＰｓｔⅠ,ＨｉｎｄⅢ,ＢｇｌⅡ,ＳａｃⅠ,ＳｃａⅠ,ＥｃｏＲＶ和ＰｕｖⅡ,对青岛、南京、上海、宁波与泉州５个Ｄ．ｖｉｒｉｌｉｓ群体的ｍｔＤＮＡ进行了限制性片段长度多态性（ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｆｒａｇｍｅｎｔｓｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ,ＲＦＬＰ）的研究。在５群体中,发现５种不同的酶切图谱,它们彼此之间的遗传差异π为０．４６％－１．７６％,群体内遗传差异πｉｊ为０．００％－０．３３％,群体间的差异ｄｘｙ,为０．００％－０．８２％。分布于中国大陆的Ｄ．ｖｉｒｉｌｉｓ的群体间遗传差异在总遗传差异中所占比例γｓｔ值为２４．６２％。我们发现,Ｄ．ｖｉｒｉｌｉｓ的栖息环境对ｍｔＤＮＡ的遗传变异有十分明显的影响,而不同地理纬度的群体之间其遗传距离并无倾群（ｃｌｉｎｅ）表现。     

白鲢和镛鱼的扩增多态DNA分析

根据鱼类外周血细胞都有核的特点,采用从冷冻和低渗双重处理分离的细胞核的取基因组ＤＮＡ。以此法获得的白鲢和镛鱼的基因组ＤＮＡ为模板,和Ｏｐｅｒｏｎ公司生产的ＯＰＮ和ＯＰＭ两个组共４０个随机引物,对这两种鱼进行了随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分析;确定了对这两种鱼基因组相关区域可进行随机ＰＣＲ扩增的有效引物,特别是哪些可产生种群内或群体的ＲＡＰＤ遗传标记即可产生个体特异性和群体特异性ＲＡＰＤ带谱的引物     

RAPD技术及其在微生物学方面的应用

198 0年 ,Ｂｏｔｓｅｉｎ提出ＤＮＡ限制性片段长度多态性 (ＲＦＬＰ)可以作为遗传标记 ,从此开创了直接应用ＤＮＡ多态的新阶段。 80年代后 ,ＤＮＡ多聚酶链式反应 (ＰＣＲ)的发展 ,使直接扩增ＤＮＡ的多态性成为可能 ,并在此基础上产生了许多种新型分子标记 ,诸如扩增片段多态性 (ＡＬＦＲ)、串联重复序列(ＶＮＴＲ)、单链构型多态性 (ＰＣＲ ＳＳＣＰ)、序列特异扩增区域 (ＳＣＡＲ)、随机扩增多态性ＤＮＡ(ＲＡＰＤ)等。而ＲＡＰＤ是较为突出的一种。ＲＡＰＤ是由Ｗｉｌｌｉａｍｓ和Ｗｅｌｓｈ在 1 990年各自独立发现的一种ＤＮＡ多态检…     

杉木叶绿体和线粒体遗传的研究

利用ＰＣＲ技术分别以亲本杉木（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｉａｌａｎｃｅｏｌａｔａ（Ｌａｍｂ．）Ｈｏｏｋ．）、柳杉（ＣｒｙｐｔｏｍｅｒｉａｆｏｒｔｕｎｅｉＨｏｏｉｂｒｅｎｋ）和杉木×柳杉杂种的总ＤＮＡ为模板,扩增了叶绿体ｔｒｎＬｔｒｎＦ和线粒体ＣｏｘⅢ基因片段,比较了这些扩增片段的限制性内切酶ＡｌｕⅠ,ＤｄｅⅠ,ＨｉｎｆⅠ,ＭｓｅⅠ和ＲｓａⅠ的酶切片段多态性,结果表明：Ｆ１代的叶绿体ＤＮＡ为母系遗传,而线粒体ＤＮＡ为父系遗传。杉木线粒体ＤＮＡ父系遗传方式与杉科其他植物一致,而叶绿体ＤＮＡ母系遗传则为在松柏类植物中首次发现。     

红树DNA的十六烷基三甲基溴化铵法提取及其随机扩增多态DNA反应

采用ＣＴＡＢ法提取了耐盐植物红树ＤＮＡ,所得ＤＮＡ样品的紫外吸收Ａ２５８／Ａ２８０比值为１．８９,纯度能符合限制性内切酶酶切、ＰＣＲ反应以及ＤＮＡ重组克隆等分子生物学操作的要求．方法简便,容易掌握,较普通的酚－氯仿法有明显的优点．还探讨了以ＣＴＡＢ法制备的红树ＤＮＡ为模板进行ＲＡＰＤ反应参数的优化组合     

HLA－DRB1基因位点多态性的PCR－RFLP分析

设计并建立一套适合国内应用的改良ＰＣＲ－ＲＦＬＲ方法,分５组特异性扩增ＤＮＡ样品,随后进行酶切定型分析,准确检测了编码ＤＲ抗原特异性的ＨＬＡ－ＤＲＢ１基因位点的多态性,该法采用分组扩增,不发生与其它ＤＲＢ位点等位基因的交叉扩增,不仅适合纯合子的区分而且可以清楚准确地检测杂合子样品,已报道过的ＤＲＢ１位点编码的特异性组合都可以通过这个方法得到准确分析。所使用的Ⅱ类限制性内切酶均价格便宜、易购。     

大鼠RAPD标记的观察

采用随机扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）技术,分析ＳＤ和Ｗｉｓｔａｒ二种大鼠的基因多态性,探讨用ＲＡＰＤ标记鉴别二种大鼠及其血标本实验中的认证,结果表明,二种大鼠表现出了各自不同的多态性ＲＡＰＤ标记,作为大鼠的分子标记,可在基因水平区别二种大鼠,故认为是一种大鼠研究的分子依据。     

中国牦牛线粒体DNA多态性及遗传分化

用２０种限制性内切酶分析了我国５个牦牛群体９０个个体的限制性片段长度多态性,其中ＡｖａＩ,ＡｖａＩＩ、ＢｇｌＩＩ、ＥｃｏＲＩ．ＨｉｎｄＩＩＩ、ＨｐａＩ６个酶切类型具有多态性,共发现５种ｍｔＤＮＡ单倍型,每种单倍型中检出５０－５５个位点,并利用双酶切制定出其物理图谱。我国牦牛群体ｍｔＤＮＡ多样度ＨＴ为０．１０６５,群体内的平均一致性概率为０．８９６６,表明我国牦牛群体ｍｔＤＮＡ多态性较贫乏,群体间的平均净遗传距离Ｐｅｔ为０．０００２０１,群体基因分化系数Ｇｓｔ为０．０２９１,我国牦牛群体ｍｔＤＮＡ变异只有２．９１％来自群体间的差异,群体间的分化程度较低。并根据报道,比较了牦牛和其他家养牛种的ｍｔＤＮＡ遗传分化,估计出牦牛和普通牛、瘤牛的分化时间大约分别在１．１－２．２百万年和１．０１－１．０２百万年之间。     

烟草黑胫病菌株亲缘关系的RAPD分析

从２２０个ＲＡＰＤ（Ｒａｎｄｏｍ Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ＤＮＡｓ）随机引物中所选出的多态扩增性强的２１个引物对来源不同的３３个烟草黑胫病菌株进行全基因组ＤＮＡ遗传多样性分析和指纹构建。选用引物对受试菌株进行ＲＡＰＤ－ＰＣＲ扩增,共产生２４３条ＤＮＡ标记图带,其中１９１条为多态性图带,多态检测率为７８．６％。利用ＵＰＧＭＡ（Ｕｎｗｅｉｇｔｈｔｅｄ Ｐａｉｒ－ｇｒｏｕｐ Ｍｅｔｈ     

植物病原真菌中DNA分子鉴定技术

就基因组ＤＮＡ中Ｇ＋Ｃ含量、分子杂交、聚合酶链式反应（ＰＣＲ）、限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）、随机扩增多态性（ＲＡＰＤ）,以及扩增片段长度多态性（ＡＦＬＰ）等分子标记技术,在植物病原真菌鉴定工作中的应用情况和发展趋势作了介绍。     

大豆灰斑病菌生理小种的RAPD标记

运用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲａｎｄｏｍａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ,ＲＡＰＤ）技术对发生于中国东北的大豆灰斑病菌（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍｓｏｊｉｍｕｍ）的１０个生理小种进行基因组ＤＮＡ多态性分析,用１３个１０－核苷酸随机引物获得了１１１个ＲＡＰＤ标记,其中８６．５％具有多态性,通过聚类分析确定了供试小种间的亲缘关系,试验证明,ＲＡＰＤ技术分析大豆灰斑病菌遗传传变异可提供大量     

从普通野生稻硅胶干燥的小量叶片中制备DNA用于RAPD分析和总DNA库的建立(英文)

普通野生稻（ Ｏｒｙｚａｒｕｆｉｐｏｇｏｎ Ｇｒｉｆｆ．）的基因资源对水稻的育种起着至关重要的作用。报道了从其硅胶干燥的小量叶片中制备ＤＮＡ的方法。用此方法制备的ＤＮＡ分子量大（４０～４５ ｋｂ） ,产率也较高（５０ ～２００ μｇ／ｇ） ,且成功地进行了ＲＡＰＤ扩增。用制备的４４ 个居群,１１６８ 个个体的总ＤＮＡ 建立了中国普通野生稻的总ＤＮＡ 库作长期冷冻保存,可用于基于ＰＣＲ 的ＤＮＡ水平上的各种目的的研究。根据实验结果,从在室温下贮存１ 周、３ 个月、６ 个月、１ 年的硅胶干燥的叶片中提取的ＤＮＡ 用于ＲＡＰＤ扩增所得的扩增产物没有差异;模板ＤＮＡ浓度在３ ．１ ～５０ ｎｇ 的范围内均得到很好的ＲＡＰＤ扩增结果。这说明了从硅胶干燥的叶片中提取的普通野生稻的ＤＮＡ 用于ＲＡＰＤ扩增的产物很稳定,将其用于群体遗传分析具有很好的可比性和可靠性。同时也讨论了模板ＤＮＡ的纯度和浓度对ＲＡＰＤ扩增的影响     

海南黄牛和徐闻黄牛线粒体DNA的多态性及其品种分化关系

本文以ＡｐａⅠ、ＡｖａⅠ、ＢａｍＨⅠ、ＢｇｌⅠ、ＢｇｌⅡ、ＤｒａⅠ、ＥｃｏＲⅠ、ＥｃｏＲⅤ、ＨｉｎｄⅢ、ＨｐａⅠ、ＰｓｔⅠ、ＳａｌⅠ、ＳｃａⅠ和ＸｈｏⅠ等１４种限制性内切酶分析来自海南岛的海南黄牛和雷州半岛的徐闻黄牛的线粒体ＤＮＡ限制性片段长度多态性（ｍｔＤＮＡＡＲＦＬＰ）。结果只有一种限制性内切酶（ＳａｌⅠ）在海南黄牛中检测到多态性,并且其中的Ｃ型（１５．０,１．３）尚未见报道。我们的结果还显示,两个品种６个个体的ｍｔＤＮＡ基因单倍型全部表现为Ａ型,即瘤牛的血统。徐闻黄牛和海南黄牛ｍｔＤＮＡ极低的遗传变异度表明两个品种的亲缘关系很近,从而在分子生物学水平为其合称为雷琼黄牛提供了佐证。     

板齿鼠线粒体DNA的研究

本文应用ＡｐａＩ、ＢａｍＨＩ、ＢｃｌＩ、ＢｇｌＩ、ＣｌａＩ、ＥｃｏＲＩ、ＥｃｏＲＶ、ＨｉｎｄＩＩ、ＰｓｔＩ、ＰｖｕＩＩ、ＳａｃＩ、ＳｃａＩ和ＸｂａＩ等１３种限制性内切酶对板齿鼠线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）进行限制性片段长度多态（ＲＦＬＰ）分析,并用双酶解法构建其限制性内切酶图谱。结果表明板齿鼠存在３种ｍｔＤＮＡ单倍型,可通过限制酶ＰｖｕＩＩ、ＨｉｎｄＩＩ和ＡｐａＩ区分,呈现ＤＮＡ多态性和种内遗传变异。与小家鼠、褐家鼠ｍｔＤＮＡ限制性片段的数据相比较,板齿鼠和这两种鼠ｍｔＤＮＡ存在明显差异。板齿鼠ｍｔＤＮＡ限制性内切酶图谱的建立,为进一步系统研究鼠科动物的遗传分化提供了依据。     

巴马小型猪群体遗传结构的随机扩增多态DNA分析

目的分析巴马小型猪的群体遗传结构。方法应用经过筛选的 ３１条引物对巴马小型猪个体基因组ＤＮＡ进行ＲＡＰＤ扩增,利用从ｉｎｔｅｒｎｅｔ网上下载的软件ＲＡＰＤ ｉｓｔａｎｃｅ Ｐａｃｋａｇｅ ｖｅｒ－ｓｉｏｎ１．０４软件对实验结果进行分析,计算不同个体间的相似系数。结果经ＲＡＰＤ反应,共扩增出２７５条带,其中多态性带８５条,多态性带频率在０～６６．７％之间,平均为２７．７％。不同个体猪拥有的ＲＡＰＤ条带具有差异,但拥有相同条带个体猪比率较高。该群体猪的相似系数（Ｆ）为０．９２８（０．７８～０．９７）,平均等位基因频率（ｑ）为０．７３２,最低平均杂合率（Ｈ）为０．２８６。结论巴马小型猪个体具有较好的遗传一致性和遗传稳定性。     

用RAPD方法分析水稻光敏核不育基因

本文以农垦５８Ｓ与Ｆ２杂交所得的Ｆ２分离群体为材料,按其育性分为不育和可育两大群体,分别以混合的可育群体核ＤＮＡ和不育体核ＤＮＡ为模板,进行ＲＡＰＤ分析,从检测过的３００个引物中发现有２个引物在不育群体和可育群体中扩增出多态性产物。就其中一个引物对杂交亲本和Ｆ２个体的ＲＡＰＤ分析进一步证明了这种多态可靠性。转移杂交实验表明这个多态性产物是一种重复顺序。