降钙素的基因结构与表达调控

降钙素与降钙素基因相关肽（ＣＴ／ＣＧＲＰ）基因编码一组多肽,即降钙素（ＣＴ）、降钙素的Ｎ端肽和Ｃ端肽、降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）及淀粉不溶素（Ａｍｙｌｉｎ）。ＣＴ／ＣＧＲＰ基因转录而成的ｍＲＮＡ前体,在不同组分中通过选择性加工形成ＣＴ ｍＲＮＡ或ＣＧＲＰｍＲＮＡ,再通过翻译及蛋白质加工,最后形成成熟的降钙素或降钙素基因相关肽。本简单介绍一下降钙素的基因结构及表达调控方面的研究进展。     

降钙素基因相关肽（CGRP）受体的纯化和鉴定

降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）为３７肽,它在体内主要分布于神经系统和心血管系统,是较强的扩张血管物质。人们已认识到脑部的ＣＧＲＰ最多,由于新鲜猪脑来源丰富,故我们选用猪脑为材料来纯化ＣＧＲＰ受体。以期为该受体的深入研究提供足够的材料和奠定基础,纯化的受体将用于制备抗ＣＧＲＰ受体的单克隆抗体,为了从猪脑中纯化ＣＲＲＰ受体,首先用含有胆盐的磷酸盐缓冲液将该受体从猪脑细胞膜上解离下来,解离下来的受体量较多,而杂蛋白较少,且受体活性可保持较长时间不降低。以离子交换柱层析（ＱＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ａ－２５）进行初步分离纯化,再用化学合成的ＣＧＲＰ与活化的琼脂糖（Ａｆｆｉ－Ｇｅｌ－１０,Ｂｉｏ－Ｒａｄ公司产品）制备的亲和层析柱进行亲和层析,取得的纯化受体保留了与１２５Ｉ－ＣａＧＲＰ结合的能力,而与降钙素（Ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ）神经肽Ｙ（ＮｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅＹ）和Ｋａｔａｃａｌｃｉｎ等无交叉反应,但与有４６％氨基酸序列同源性的Ａｍｙｌｉｎ有一定交叉反应。纯化的受体经ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳和高压液相色谱（ＨＰＬＣ）鉴定呈现单一蛋白条带或蛋白峰,其位置对应分子量为６６ｋＤ。     

小鼠颌下腺降钙素基因相关肽的免疫组织化学定位

本文用免疫组织化学ＡＢＣ法,对小鼠颌下腺中降钙素基因相关肽（ＣａｌｃｉｔｏｎｉｃＧｅｎｅ－ＲｅｌａｔｅｄＰｅｐｔｉｄｅ,ＣＧＲＰ）的分布进行了观察。结果表明：小鼠颌小腔内有降钙素基因相关肽免疫反应神经的分布,它们主要分布于小叶间结缔组织中。此外,颗粒由管细胞也呈降钙素基因相关肽免疫反应阳性。提示降钙素基因相关肽可能参与颌下腺的分泌活动及血液循环等生理调节。     

降钙素基因相关肽的研究进展

降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）是由３７个氨基酸残基构成的生物活性多肽,与降钙素（ＣＴ）源子一个共同的基因。ＣＧＲＰ分布广泛,具有很强的血管扩张、降低血压以及心肌正性肌力作用等,并参与心血管系统稳态的调节。目前,ＣＧＲＰ已能人工合成,将为某些心血管疾病如高血压、心肌缺血、痉挛性或闭塞性周围血管疾病等的治疗提供一条崭新的途径。     

脑室内注射降钙素基因相关肽对压力感受性反射的抑制

脑室内注射降钙素基因相关肽对压力感受性反射的抑制张继峰唐朝枢１（廊坊师范专科学校生物系,廊坊１０２８４９;１北京医科大学心血管研究所）降钙素基因相关肽（Ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎｇｅｎｅｒｅｌａｔｅｄｐｅｐｔｉｄｅ,ＣＧＲＰ）是１９８３年Ｒｏｓｅｎｆｅｌ...     

降钙素基因相关肽和心房肽对犬冠脉的舒张作用

本实验利用冠脉内给药和离体血管灌流等方法观察比较了降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）和心房肽（ＡＮＰ）对犬冠脉循环的影响及其对犬大小冠状动脉的舒张作用。结果显示,ＣＧＲＰ和ＡＮＰ均能明显增加冠脉血流量、降低大小冠脉阻力,两者均呈剂量依赖性舒张大小脉冠脉血管。ＡＮＰ的作用显著小于ＣＧＲＰ,其中大冠脉对两者的反应性显著小于小冠脉,ＣＧＲＰ和ＡＮＰ对冠脉的舒张作用均无内皮依赖性。结果提示,ＣＧＲＰ和ＡＮＰ直接     

降钙素基因相关肽的心肌电生理作用

应用浮置微电极技术,记录和观察降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）对家兔正常及缺血心肌电生理反应的影响。实验表明,ＣＧＲＰ能够显著增加心室肌细胞静息电位,提高动作电位幅度。心肌缺血后,ＣＧＲＰ除有上述作用外,尚能明显延长复极化至３０％和５０％（ＡＰＤ＿(３０),ＡＰＤ＿(５０)）的时程,而缩短复极化至１００％（ＡＰＤ＿(１００)）的时程,从而逆转了心肌缺血的ＡＰＤ异常变化。结果表明,ＣＧＲＰ对心肌电活动具有调节作用,对缺血心肌的电生理具有稳定和保护作用。     

降钙素基因相关肽对不同程度冠脉狭窄时的心脏功能的影响

本实验观察了冠脉内注射降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ０．３μｇ／ｋｇ）对正常及不同程度冠脉狭窄犬的心功能的影响。结果表明正常犬冠脉内注射ＣＧＲＰ后,平均动脉压（ＭＡＰ）下降１．２ｋＰａ（Ｐ＜０．０５）,同时,心率（ＨＲ）、心输出量（ＣＯ）、左室收缩压峰值（ＬＶＳＰ）均不同程度增加;左室舒张末压（ＬＶＥＤＰ）轻度降低。在中度狭窄３０ｍｉｎ后,冠脉内注射ＣＧＲＰ对ＨＲ、ＭＡＰ无明显影响;而重度狭窄后注射ＣＧＲＰ,ＭＡＰ由狭窄时降低逐渐增高,ＨＲ由增快而变慢。ＣＯ、ＬＶＳＰ均显著增高,ＬＶＥＤＰ降低,此作用较冠脉狭窄前更为明显。提示ＣＧＲＰ扩张冠脉动脉,增加冠脉血流量和心排血量,增强心肌收缩力,对缺血心脏功能有保护作用。     

大鼠鼻粘膜肽能神经末梢分布的研究

用免疫组化技术（ＡＢＣ法）系统研究了大鼠鼻粘膜９种肽能神经末梢分布的特征,这９种神经肽分别是Ｐ物质（ｓｕｂｓｔａｎｃｅＰ,ＳＰ）,神经激肽Ａ（ｎｅｕｒｏｋｉｎｉｎＡ,ＮＫＡ）,神经激肽Ｂ（ｎｅｕｒｏｋｉｎｉｎＢ,ＮＫＢ）,降钙素基因相关肽（ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎｇｅｎｅ－ｒｅｌａｔｅｄｐｅｐｔｉｄｅ,ＣＧＲＰ）,血管活性肠多肽（ｖａｓｏａｃｔｉｖｅｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ,ＶＩＰ）,神经肽Ｙ（ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅＹ,ＮＰＹ）,甘丙肽（ｇａｌａｎｉｎ,ＧＡＬ）,生长抑素（ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎ,ＳＯＭ）及神经降压素（ｎｅｕｒｏｔｅｎｓｉｎ,ＮＴ）,同时选择与鼻粘膜神经肽（ＮＰ）作用密切相关的三叉神经节（ＴＧ）细胞进行上述ＮＰ的定位。用重组ＰＳＰ６５质粒（４００ＳＯＭｃＤＮＡ）制备ＳＯＭｍＲＮＡ单链探针,以地高辛精标记,在鼻粘膜及ＴＧ细胞进行ＳＯＭｍＲＮＡ的原位杂交组化研究。结果提示大鼠鼻粘膜有丰富的肽能神经末梢;ＴＧ细胞含有多种ＮＰ并且可以合成ＳＯＭ。该研究结果对重新认识鼻粘膜神经分布规律有一定意义。     

降钙素基因相关肽(CGRP)mRNA在大鼠淋巴细胞中的表达

最近,我们研究发现大鼠胸腺和淋巴结淋巴细胞中存在降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）样免疫反应活性。应用人工合成的可特异扩增降钙素／降钙素基因相关肽基因部分片断的寡核苷酸引物,通过逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）,检测在大鼠脊髓背根神经节、胸腺细胞及肠系膜淋巴结淋巴细胞中是否存在ＣＧＲＰ ｍＲＮＡ,进一步研究大鼠淋巴细胞能否合成ＣＧＲＰ。结果显示,通过ＲＴ－ＰＣＲ从脊髓背根神经节（阳性对照）、胸腺和淋     

降钙素基因相关肽肽段的抗原性和免疫原性

用固相合成法合成了有关降钙素基因相关肽ＣＧＲＰ五个肽段。它们的氨基酸顺序分别为：ＣＧＲＰ－１（２４－３７）;ＣＧＲＰ－２（１４－３７）;ＣＧＲＰ－３（９－２３）;ＣＧＲＰ－４（１－２３）和ＣＧＲＰ－５（１－１３）。用酶标方法测定了它们的抗原性,发现ＣＧＲＰ－２和ＣＧＲＰ－１能够很好地与抗ＣＧＲＰ抗血清结合。将ＣＧＲＰ－１;ＣＧＲＰ－３和ＣＧＲＰ－５分别免疫兔子,获得的抗血清分别与ＣＧＲＰ进行反应,     

降钙素基因相关肽（CGRP）受体的纯化和鉴定

降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）为３７肽,它在体内主要分布于神经系统和心血管系统,是较强的扩张血管物质,人们已认识到脑部的ＣＧＲＰ最多,由于鹇猪脑来源丰富,故我们选用猪脑为材料来纯化ＣＧＲＰ受体。以期为该受体的深入研究提供足够的材料和奠定基础,纯化的受体将用于制备抗ＣＧＲＰ受体的单克隆抗体。为了从猪脑中纯化ＣＲＲＰ受体,首先用含有胆盐的磷酸盐缓冲液将该受体从猪脑细胞膜上解离下来,解离下来的受体量较多,     

降钙素基因相关肽肽段的抗原性和免疫原性

用固相合成法合成了有关降钙素基因相关肽ＣＧＲＰ五个肽段。它们的氨基酸顺序分别为：ＣＧＲＰ－１（２４－３７）;ＣＧＲＰ－２（１４－３７）;ＣＧＲＰ－３（９－２３）;ＣＧＲＰ－４（１－２３）和ＣＧＲＰ－５（１－１３）。用酶标方法测定了它们的抗原性,发现ＣＧＲＰ－２和ＣＧＲＰ－１能够很好地与抗ＣＧＲＰ抗血清结合。将ＣＧＲＰ－１;ＣＧＲＰ－３和ＣＧＲＰ－５分别免疫兔子,获得的抗血清分别与ＣＧＲＰ进行反应,发现只有抗ＣＧＲＰ－１的抗血清能够与ＣＧＲＰ很好地结合。因此,可以推测ＣＧＲＰ的羧端部分是其免疫活性部位。     

一氧化氮和前列腺素在内毒素引起降钙素基因相关肽释放中的作用

本实验在离体灌流大鼠肠系膜动脉床研究内毒素引起降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）释放的机制。内毒素（５０μｇ／ｍｌ）使ＣＧＲＰ释放增加１６倍,一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）底物Ｌ－精氨酸（Ｌ－Ａｒｇ）能促进内毒素引起的ＣＧＲＰ释放（４１％）。ＮＯＳ抑制剂Ｎ￣Ｇ－硝基－Ｌ－精氨酸（Ｌ－ＮＮＡ）及鸟苷酸环化酶抑制剂甲基蓝（ＭＢ）能使内毒素的上述作用分别降低３５％与３６％,Ｌ－精氨酸（ｔ－Ａｒｇ）能逆转Ｌ－ＮＮＡ的作用。提示内毒素的作用机制中部分是通过一氧化氮引起细胞内ｃＧＭＰ升高而介导的。用化学方法破坏血管内皮细胞,Ｌ－ＮＮＡ与Ｌ－Ａｒｇ的上述作用依然存在。提示内毒素主要是激活血管周围感觉神经末梢的神经源ＮＯＳ,而非内皮源ＮＯＳ。环氧化酶抑制剂消炎痛（Ｉｎｄｏ）与布洛芬（Ｉｂｕ）也能使内毒素引起ＣＧＲＰ释放的作用分别降低３４％与３９％,但与Ｌ－ＮＮＡ的作用不能迭加。提示内毒素可能通过激活神经源ＮＯＳ进而引起环氧化酶活化而起作用。     

糖尿病大鼠肠系膜动脉降钙素基因相关肽释放减少以及一氧化氮的作用

我们以前的工作已表明,内毒素可引起降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）从大鼠肠系膜动脉床释放,此作用部分是通过一氧化氮介导的。我们在离体肠系膜动脉床研究了内毒素引起糖尿病大鼠ＣＣＲＰ释放的改变以及一氧化氮所起的作用。采用ＣＣＲＰ放射免疫分析法测定灌流液中ＣＣＲＰ含量,ＲＴ－ＰＣＲ法测定背根神经节ＣＧＲＰｍＲＮＡ水平。结果显示：内毒素累积灌流引起ＣＧＲＰ浓度依赖性地释放增多,此作用在糖尿病大鼠系膜动脉术明显     

微循环研究常用部位的肽能和胺能神经支配

以逆行追踪与免疫细胞化学相结合法,探讨了大鼠提睾肌、盲肠系膜和耳廓等微循环研究常用部位的神经肽Ｙ（ＮＰＹ）、降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）、甲啡吠（Ｍ－ＥＮＤ）和５－羟色胺（５－ＨＴ）等肽能和胺能神经的支配。结果表明：支配提睾肌的运动和感觉神经元分别含有５－ＨＴ和ＣＧＲＰ。支配提睾肌血管、盲肠系膜及其血管的交感神经元,一部分含有ＮＰＹ,一部分含有Ｍ－ＥＮＫ;支配耳廓局部的运动和感觉神经元均含有ＣＧＲ     

降钙素基因相关肽对家兔离体窦房结电生理活动的影响

用常规微电极方法研究了降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）对家兔窦房结起搏细胞的电生理作用,并进一步探讨这种作用与钙电流的关系。结果：⑴低浓度ＣＧＲＰ（１ｎｍｏｌ／Ｌ）对窦房结动作电位各参数无显著影响;中等浓度ＣＧＲＰ（１０ｎｍｏｌ／Ｌ）可增加最大舒张期电位、动作电位幅度、０期最大除极化速率和４期自动除极速率,缩短窦性周期、动作电位复极化５０％和９０％时间,这些作用经２０ｍｉｎ达到高峰;高浓度ＣＧＲＰ（２     

降钙素基因相关肽对低氧下海马脑片突触功能的保护作用

本文采用大鼠海马脑薄片的诱发电位,观察低氧下突触功能的变化,并于一侧脑片灌流降钙素基因相关肽,另侧作对照,比较双孔脑片诱发电位的异同,结果显示,电刺激ＣＡ３区的ｃｈａｆｆｅｒ侧支,可在ＣＡ１区锥体细胞发突触前排放和突触后群峰电位。低氧时ＰＳ迅速减小并逐渐消失,部分脑片出现低氧损伤电位。经ＣＧＲＰ灌流的脑片低氧后电拉开始减小与完全消失的时间均向后推迟,ＨＩＰ出现减少或延迟,恢复给氧后,ＣＧＲＰ组脑片     

钙超载和血小板激活因子对肺组织释放降钙素基因相关肽的影响

在肠缺血／再灌注（Ｉ／Ｒ）损伤的大鼠模型中,用放射免疫法分析血管和离体肺灌洗液中降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）。结果发现Ｉ／Ｒ损伤后血浆ＣＧＲＰ水平较自身伤前增高１６１．３％（Ｐ〈０．０１）,伤前预先用血小板激活因子受阻断剂（ＳＲ２７４１Ａ）,血浆ＣＧＲＰ仍然高于自身伤前１１７．８％（Ｐ〈０．０１）。而假手术组没有明显变化。另外,Ｉ／Ｒ损伤组大鼠离体肺灌洗液同正常对照相比,ＣＧＲＰ还下降了１７．４％     

降钙素基因相关肽对小鼠肠道集合淋巴结T细胞及腹腔巨噬细…

本工作观察了降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）对小鼠肠集合淋巴小结（ＰＰ结）Ｔ细胞和小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响。结果表明：ＣＧＲＰ能明显抑制ＰＰ结Ｔ淋巴细胞的转化,并且这种作用与Ｔ细胞的分化增殖状态有明显关系。此外ＣＧＲＰ对腹腔巨噬细胞ＤＮＡ和蛋白质的合成也有明显的抑制作用。以上结果提示ＣＧＲＰ可能作为一种抑制型的神经内分泌免疫调节肽而对肠道免疫功能发挥着重要的调节作用。