丹皮酚对NG108—15细胞电压门控K^＋,Na^＋,Ca^2＋流的抑制

利用克隆系ＮＧ１０８－１５细胞在膜片箝全细胞记录下,观察了丹皮酚对钾,钠和钙流的作用,结果表明,ＰＡ对延迟整流钾电流、钠电流、Ｔ型和Ｌ型钙电流均有明显的抑制效应,作用迅速,呈量－效关系,有相当好的可逆性。     

9—蒽羧酸对豚鼠心室动作电位和L型Ca电流的影响

目的：研究９－蒽羧酶（９－ＡＣ）对豚鼠以肌动作电位（ＡＰ）和Ｌ型Ｃａ电流（Ｌｃａ）的影响。方法：电流钳配合制霉菌素膜等孔方法记录心室肌动作电位,用全细胞式膜片钳（Ｗｈｏｌｅ ｃｅｌｌ ｒｅｃｏｒｄｉｎｇ）技术记录Ｌｃａ。结果：在低ＣＩ＾－状态下,β肾上腺素能受体激动剂异丙肾上腺素（ＩＳＯ）可使动作电位时程（ＡＰＤ）明显延长。９－ＡＣ单独使用时对ＡＰ无作用,但在ＩＳＯ的作用下,蛋白磷酸酶抑制剂９－Ａ     

PAF对肺内小动脉平滑肌细胞TXA_2，PGI_2乃Ca~（2＋）－ATPase的影响

本工作采用分离培养家兔肺内小动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣｓ），观察了外源性血小板活化因子（ｐｌａｔｅｌｅｔａｃｔｉｖａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ，ＰＡＦ）、ＢＮ５２０２１（ＰＡＦ受体拮抗剂）、吲哚美辛、维拉帕米对ＰＡＳＭＣｓ产生血栓素Ａ_２（ＴｘＡ_２）、前列环素（ＰＧＩ_２）及对细胞膜Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰａｓｅ活力的影响。结果表明：（１）基础状态下ＰＡＳＭＣｓ存在花生四烯酸（ＡＡ）代谢。（２）外源性ＰＡＦ通过受体后途径激活环加氧酶促进ＡＡ代谢致ＴＸＡ_２及ＰＧＩ－２增加，ＴＸＡ_２／ＰＧＩ_２比值无明显变化。（３）外源性ＰＡＦ能直接抑制Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰａｓｅ活力。（４）维拉帕米可逆转ＰＡＦ抑制ＰＡＳＭＣｓ膜Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰａｓｅ活力的效应。     

TFP刺激裂殖酵母细胞钙离子内流的质膜效应

ＴＦＰ（１０－１００μｍｏｌ／Ｌ）可引起裂殖酵母（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ）细胞Ｃａ＾２＋内流,ＴＦＰ浓度不同,促进Ｃａ＾２＋内流程度也不一样,５０μｍｏｌ／Ｌ ＴＦＰ的促进作用最大。并且ＴＦＰ浓度越大,Ｃａ＾２＋内流出现峰值也越早,１０、２０、５０、１００μｍｏｌ／Ｌ ＴＦＰ处理后,胞内总钙出现峰值时间分别为４５、４５、３０、１５分钟。胞外Ｈ＾＋浓度也会对ＴＦＰ引起的     

血管平滑肌细胞上的自发内向阳离子通道

采用膜片箝技术的细胞贴附式（ｃｅｌ－ａｔａｃｈｅｄ）,在酶法分离的大鼠尾动脉平滑肌细胞上记录到一种自发的内向阳离子通道。结果发现：１、在实验条件下（池子液：Ｋｒｅｂｓ,电极液：高钾）,该通道电导为２６．５±４．１ｐＳ,且具有明显的电压依赖、时间依赖和Ｃａ２＋依赖的特性;２、该电流具有极显著的内向整流特性;３、离子替换实验表明,该通道对Ｎａ＋和Ｋ＋具有很好的通透性,对Ｃｌ－的通透则很差;４、胞外加入４－ＡＰ（２ｍｍｏｌ／Ｌ或５ｍｍｏｌ／Ｌ）,ＢａＣｌ２（１ｍｍｏｌ／Ｌ）和ＣｓＣｌ（２０ｍｍｏｌ／Ｌ）均不能抑制该电流;５、内向阳离子电流可与Ｃａ２＋－激活Ｋ＋电流在同一细胞上交替活动,提示这两种电流可能在调控平滑肌细胞的基本活动方面起关键作用。     

ET—1,NO和缺氧对肺动脉平滑肌细胞钙内流及胶原合成的影响

肺血管平滑肌细胞是肺血管收缩反应的主要执行者,也是肺血管结构重建的重要参与者。本研究观察了内皮素－１（ＥＴ－１）一氧化氮（ＮＯ）和缺氧对培养的新生小牛肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）钙内流以及胶原合成的影响,结果表明ＥＴ－１和缺氧可促进ＰＡＳＭＣ的钙内流;ＮＯ供应剂硝普钠（ＳＭＰ）可抑制ＥＴ－１诱导的钙内流,其作用呈剂量依赖性,ＳＮＰ还可以剂量依赖地抑制了ＰＡＳＭＣ的胶原合成,而缺氧可促进ＰＡＳＭＣ     

多巴胺对血管平滑肌细胞钙激活钾通道的影响及其机制

目的：研究多巴胺对血管平滑肌细胞大电流、钙激活钾（ＢＫｃａ）通道的影响及其信息传递机制。方法用膜片钳细胞贴附式技术,记录细胞能液内灌流多巴胺受体激动剂、阻断剂以及第二信使及相关蛋白激酶拮机剂对猪冠状动脉血管平滑肌细胞ＢＫｃａ 爱道活动的影响。结果：多巴胺增加ＢＫｃａ通道活性（Ｐ〈０．０１）,并可被ＣＡ－１受体阻断剂ＳＣＨ２３３９０完全阻断,但不受β２受体阻断剂普藉洛尔的影响。腺苷酸环化酶抑制剂ＳＯ     

睫状神经营养因子对NO引起海马神经元毒性反应的影响

本研究采用原代培养大鼠海马神经元,观察睫状神经营养因子（ｃｉｌｉａｒｙ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ,ＣＮＴＦ）对ＮＯ引起细胞毒性反应的影响。ＮＯ供体硝普钠与Ｓ－亚硝基－乙酰青霉胺,ＮＯＳ底物Ｌ－Ａｒｇ及钙载体ｉｏｎｏｍｙｃｉｎ,均可引起海马神经元存活率下降,ＬＤＨ漏出增加;提前２４ｈ给予不同浓度ＣＮＴＦ,均能提高神经元的存活率,减少ＬＤＨ漏出,其作用呈剂量依赖性。     

4-PA对BEL-7402细胞的生长调控和诱导凋亡作用的研究

应用ＭＴＴ、流式细胞术研究了新型肿瘤诱导分化剂４－ ＰＡ 对人肝癌细胞系ＢＥＬ－ ７４０２ 细胞的生长调控、诱导凋亡作用。结果表明： ４ － ＰＡ 对ＢＥＬ－ ７４０２ 细胞增殖抑制的ＩＣ５０ 为４ －９ｍ ｍｏｌ／Ｌ,随着作用时间的增加,ＩＣ５０ 增加。作用效果迅速,在０ ．５ 小时就有效地抑制了细胞增殖,抑制率随４－ ＰＡ 浓度的增加和作用时间的延长而增加,在达到最大抑制率后出现饱和。流式细胞仪对细胞周期和细胞凋亡的分析发现：４ － ＰＡ 对细胞增殖期（Ｓ期、Ｇ２ 期） 有较强的抑制和逆转作用,使细胞群截止在Ｇ１ 期。随着作用时间的延长和４ － ＰＡ 浓度的增加,细胞凋亡的比例增加,凋亡细胞多来自于细胞增殖期（Ｓ 期、Ｇ２ 期） 。诱导凋亡和使细胞截止于细胞静息期是４ － ＰＡ 抑制细胞增殖的主要途径。     

神经节苷脂（Gangliosides）对人红细胞膜Ca~（2＋）－Mg~（2＋）ATPase的影响

神经节苷脂（Ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅｓ）是红细胞膜Ｃａ~（２＋）－Ｍｇ~（２＋）ＡＴＰａｓｅ的一种激活剂,这种激活作用也是依赖于Ｃａ~（２＋）存在。在２００μｍｏｌ／ＬＣａ~（２＋）存在的反应体系中,１００μｇ／ｍＬＧａｎｇｌｉｏｓｉｄｅｓ对Ｃａ~（２＋）－Ｍｇ~（２＋）ＡＴＰａｓｅ的激活作用最大,为基本酶活性的１５０％以上。实验还发现ＣａＭ拮抗剂三氟拉嗪（ＴＦＰ）、粉防已碱（Ｔｅｔ）等也同样抑制Ｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅｓ的这种激活作用。其抑制的ＩＣ_（５０）值为２５μｍｏｌ／Ｌ和３０μｍｏ１／Ｌ;而此浓度下抑制剂存在的反应体系中,对Ｃａ~（２＋）－Ｍｇ~（２＋）ＡＴＰａｓｅ的基本活性影响不大。     

雌二醇对豚鼠心室肌细胞L型钙通道的抑制作用

目的和方法：采用全细胞膜片钳技术,研究不同浓度（１μｍｏｌ／Ｌ、１０μｍｏｌ／Ｌ、１００μｍｏｌ／Ｌ）雌二醇（ｅｓｔｒａｄｉｏｌ,ＥＳＴ）对豚鼠心室肌细胞Ｌ型钙电流（ＩＣａ．Ｌ）的影响。结果：①ＥＳＴ明显抑制ＩＣａ．Ｌ,１μｍｏｌ／Ｌ、１０μｍｏｌ／Ｌ、１００μｍｏｌ／ＬＥＳＴ分别使峰值ＩＣａ．Ｌ降低３０．５％,５０．０％（Ｐ〈０．０１）和６８％（Ｐ〈０．０１）,该作用具有浓度依赖性;②ＥＳＴ对Ｉ     

可溶性CD40配体的表达及其对树突状细胞和恶性B？…

ＣＤ４０配体（ＣＤ４０Ｌ）是ＴＮＦ超家族成员,表达于人活化的ＣＤ４＾＋Ｔ细胞表面,与存在于Ｂ细胞、抗原递呈细胞表面的相就受体ＣＤ４０分子相互作用,促发并调节机体的体液免疫和细胞免疫应答。用ＰＣＲ法从ＣＤ４０Ｌ全长ｃＤＮＡ质粒中扩增ＣＤ４０Ｌ胞外段编码ｃＤＮＡ,即可溶性ＣＤ４０Ｌ（ｓＣＤ４０Ｌ）编码ｃＤＮＡ,并克隆入ｐＳＫ质粒;ｃＤＮＡ序列经测序证实后与ｐＰＩＣＺαＡ质粒重组构建成ｐＰＩＣＺαＡ－ｓ     

ET－1，NO和缺氧对肺动脉平滑肌细胞钙内流及胶原合成的影响

肺血管平滑肌细胞是肺血管收缩反应的主要执行者,也是肺血管结构重建的重要参与者。本研究观察了内皮素１（ＥＴ１）,一氧化氮（ＮＯ）和缺氧对培养的新生小牛肺动肺平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）钙内流以及胶原合成的影响。结果表明ＥＴ１和缺氧可促进ＰＡＳＭＣ的钙内流,ＮＯ供应剂硝普钠（ＳＭＰ）可抑制ＥＴＩ诱导的钙内流,其作用呈剂量依赖性,ＳＮＰ还可以剂量依赖地抑制ＰＡＳＭＣ的胶原合成,而缺氧可促进ＰＡＳＭＣ的胶原合成。     

天然和氧化修饰型LDL、VLDL及HDL对培养人动脉平滑肌细胞原癌基因fos及myc表达的影响

动脉平滑肌细胞（ＳＭＣ）是动脉粥样硬化（ＡＳ）斑块中的主要细胞,它的增殖在ＡＳ形成过程中极其重要。脂蛋白和氧化修饰型脂蛋白对ＳＭＣ增殖的影响以及ＳＭＣ增殖与原癌基因异常表达的关系是当前ＡＳ发病机制研究的热点之一。我们在建立人主动脉ＳＭＣ体外培养方法的基础上,观察了ＬＤＬ,ＶＬＤＬ及ＨＤＬ和相应的氧化修饰型脂蛋白对培养人ＳＭＣｆｏｓ,ｍｙｃ,ｅｒｂ－Ｂ原癌基因转录表达的影响。结果表明：①ＨＤＬ对ＳＭＣｆｏｓ,ｍｙｃ基因表达无影响;②ＬＤＬ和ＶＬＤＬ有使这些基因表达增加的趋势,但与对照比较差异不显著（Ｐ＞０．０５）;③ＯＸ－ＶＬＤＬ,ＯＸ－ＶＬＤＬ和ＯＸ－ＨＤＬ有使ＳＭＣｆｏｓ,ｍｙｃ基因表达显著增强的作用（Ｐ＜０．０１）,且其作用较相应的天然脂蛋白大（Ｐ＜０．０１）．上述结果说明：ＬＤＬ,ＶＬＤＬ,ＯＸ－ＬＤＬ,ＯＸ－ＶＬＤＬ和０Ｘ－ＨＤＬ的致ＡＳ作用可能与刺激ＳＭＣｆｏｓ和ｍｙｃ癌基因表达增加有关。     

细胞分裂素基因（T—cyt）启动子驱动下的GUS基因在烟草和马铃薯中的表达

构建了来自根癌农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍ ｅｆａｃｉｅｎｓ） Ｔ－ＤＮＡ 的细胞分裂素基因（Ｔ－ｃｙｔ）启动子驱动下的ＧＵＳ基因的表达质粒,并用以转化烟草（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ ｃｖ． Ｗ ３８）和马铃薯（Ｓｏｌａｎｕｍ ｔｕｂｅｒｏ－ｓｕｍ Ｌ． ｃｖ． Ｄｅｓｉｒｅｅ）,研究其在转基因植物中表达的定位。结果表明,Ｔ－ｃｙｔ启动子在转基因植株的根、茎、叶、块茎和萌发的种子中均可表达。其中在茎和块茎中的表达是不均一的：在维管束部分表达较强,在侧芽或叶柄的生长点及块茎的芽生长点表达活性较高。此外,在培养基中加入０．１ ｍ ｇ／ＬＢＡＰ,转基因烟草茎中ＧＵＳ基因的表达活性增强,而对ＮＡＡ 没有明显的反应。看来某些外源植物激素对Ｔ－ｃｙｔ启动子的活性有一定的诱导作用     

血管钠素肽对大鼠心室肌细胞L—型钙通道电流的影响

目的和方法：采用膜片钳全细胞记录方式观察血管钠素肽（ＶＮＰ）对大鼠单个心室肌细胞Ｌ型钙通道电流（ＩＣａ，Ｌ）的影响。结果：当心室肌细胞由保持电压４０ｍＶ除极到０ｍＶ时，０．１，０．２和０．４μｍｏｌ／Ｌ的ＶＮＰ分别使ＩＣａ，Ｌ内向电流峰值降低３１．０５％，４６．９５％和６０．７５％。该抑制作用与ＩＣａ，Ｌ的ｒｕｎｄｏｗｎ现象无关，且对ＩＣａ，Ｌ的最大激活电位无明显影响。当ＩＣａ，Ｌ被异丙肾上腺素（１０－７ｍｏｌ／Ｌ）预先激活后，ＶＮＰ（０．２μｍｏｌ／Ｌ）仍可使ＩＣａ，Ｌ电流峰值下降１８．２３％。结论：ＶＮＰ对大鼠心室肌细胞ＩＣａ，Ｌ具有明确的抑制作用，该作用可能是ＶＮＰ发挥其心血管效应的离子通道机制之一。     

慢性低氧性肺动脉高压鼠原代培养肺动脉平滑肌细胞内钙的检定

用共聚焦激光扫描显微镜观察经Ｆｌｕｏ－３／ＡＭ负荷的慢性低氧性肺动脉高压（ＨＰＨ）大鼠原代培养的肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣ）的形态与内游离Ｃａ２＋浓度的动态变化。结果表明：原代培养的（ＨＰＨ）大鼠的ＰＡＳＭＣ与正常大鼠相比,①细胞内游离Ｃａ２＋浓度增加,但其收缩性减弱;②随培养日数增加,咖啡因（Ｃａｆｅｉｎ）所致的细胞内储钙池－肌浆网的Ｃａ２＋释放作用逐渐减弱,直至消失;③血管紧张素Ⅱ（ＡＴ－Ⅱ）升高细胞内钙作用明显增强;④部分呈大红色细胞对多种缩血管物质敏感性增强。结果提示,ＨＰＨ大鼠的ＰＡＳＭＣ的内钙明显增加,其调节机制处于紊乱状态。     

PIC-BE诱导K562/ADM细胞凋亡及逆转其MDR的研究

β榄香烯吗素（ＰＩＣ－ＢＥ）是抗癌新药β榄香烯的水溶性衍生物．采用人红白血病的多药耐药性（ＭＤＲ）细胞株Ｋ５６２／ＡＤＭ作为实验模型,观察ＰＩＣ－ＢＥ对Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞的生长抑制和凋亡诱导作用,并进而研究其对该细胞ＭＤＲ的可能影响．结果显示：（１）Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞对ＡＤＭ具有明显的抗性,与Ｋ５６２细胞相比,抗性倍数约为４０倍,而两者对ＰＩＣ－ＢＥ的ＩＣ５０接近,无显著差异;（２）ＰＩＣ－ＢＥ（１０．０～３０．０μｇ／ｍｌ）对Ｋ５６２／ＡＤＭ细胞具有明显的生长抑制和凋亡诱导作用,两种作用的强度在一定的范围内均具药物浓度和作用时间依赖性;（３）低毒剂量ＰＩＣ－ＢＥ（１０．０μｇ／ｍｌ）与ＡＤＭ（４．０μｇ／ｍｌ）联合应用,可显著增强ＡＤＭ对该细胞的生长抑制和凋亡诱导作用,升高细胞内ＡＤＭ的浓度,降低该细胞对ＡＤＭ的ＩＣ５０,使该细胞对ＡＤＭ的抗性有数倍逆转．上述结果提示,ＰＩＣ－ＢＥ不仅是一种有效的广谱抗肿瘤剂,而且也是一种有效的ＭＤＲ逆转剂     

高及低转移潜能小鼠肝癌细胞株糖蛋白凝集素结合特征的研究

为探讨肿瘤转移与细胞表面的糖结构的关系,对小鼠肝癌细胞的高、低淋巴道转移株Ｈｃａ－Ｆ和Ｈｃａ－Ｐ进行了蛋白质电泳及经蛋白质印迹术后的５种凝集素（ＣｏｎＡ、ＷＧＡ、ＵＥＡ、ＳＢＡ、ＰＮＡ）结合糖蛋白谱的对比分析．结果表明：高、低转移两株细胞的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ谱基本相同;ＣｏｎＡ特异结合糖蛋白共有５种（～７２,８０～９０,～１０４,～１５０,～２００ｋＤ）;其中较明显的差异为～７２ｋＤＣｏｎＡ特异结合糖蛋白,它在Ｈｃａ－Ｐ细胞的表达明显高于Ｈｃａ－Ｆ细胞．ＷＧＡ特异结合糖蛋白１种（～１５０ｋＤ）,在Ｈｃａ－Ｐ细胞的表达略高于Ｈｃａ－Ｆ细胞．此外,实验发现两种性质未明的蛋白质（～７９,～１３０ｋＤ）,后者在Ｈｃａ－Ｐ细胞的含量明显高于Ｈｃａ－Ｐ细胞．结果提示Ｈｃａ－Ｆ和Ｈｃａ－Ｐ细胞不同的转移表型可能与其糖蛋白的表达有一定的关联．     

荧光指示剂法测定植物细胞胞质游离Ca^2＋浓度

利用钙离子荧光指示剂Ｉｎｄｏ－１ ＡＭ 建立了测定植物细胞胞质游离Ｃａ２＋ 浓度的技术。应用此技术测出,ＢＭＳ（ｂｌａｃｋ Ｍｅｘｉｃｏ ｓｗ ｅａｔ）玉米悬浮细胞原生质体静息水平下的胞质游离Ｃａ２＋ 浓度是１２７±５６ ｎｍ ｏｌ·Ｌ－ １;Ｃａ２＋ 螯合剂ＥＧＴＡ 可使胞质游离Ｃａ２＋ 浓度由７８ ｎｍ ｏｌ·Ｌ－ １降至１２．５ ｎｍ ｏｌ·Ｌ－ １,而Ｃａ２＋ 载体Ａ２３１８７ 则可使胞质游离Ｃａ２＋ 浓度升至接近介质Ｃａ２＋ 水平。同时,证明ＡＢＡ 处理可使ＢＭＳ玉米悬浮细胞原生质体Ｃａ２＋ 浓度在１—１．５ 分钟内迅速升高,由７５ ｎｍ ｏｌ·Ｌ－ １升至７９０ ｎｍ ｏｌ·Ｌ－ １