茄科劳尔氏菌单克隆抗体的制备及其特性鉴定

茄科劳尔氏菌(Ralstonia solanacearum,RS)是番茄、茄子、辣椒、马铃薯等茄科蔬菜青枯病害的致病菌。为实现对RS的快速高效检测,以茄科劳尔氏菌株1.76免疫BALB/c小鼠,经细胞融合后利用间接酶联免疫吸附分析(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)筛选出3株能稳定分泌抗茄科劳尔氏菌株1.76的单克隆杂交瘤细胞株1C1、1B3和9D7。然后利用小鼠体内诱生腹水,1C1、1B3和9D7效价分别为1:1 024 000、1:64 000、1:256 000。采用饱和硫酸铵沉淀及Protein-G亲和层析法纯化腹水,经SDS-PAGE鉴定显示纯化后的单克隆抗体(Monoclonal Antibodies,mAb)纯度较高。纯化后单克隆抗体(2 mg/mL)效价分别为1:17 529、1:35 819、1:50 000,抗体亚型均为IgG1。对3株抗体进行特异性检测结果显示,1C1和9D7均不能与RS-5结合,1B3不能结合1.74和RS-5。此外,检测结果还表明3株单克隆抗体与桑肠杆菌JX-6、苏云金芽胞杆菌SYJ及实验室现有11株燕麦嗜酸菌卡特莱兰亚种、燕麦嗜酸菌西瓜亚种、玉米细菌性条斑菌、嗜酸菌魔芋亚种,梨火疫病菌QB0809、 XL-4,玉米细菌性枯萎病菌QB0241、QB0242,水稻细菌性谷枯病菌QB0017、QB0753、QB0755均无交叉情况。此次茄科劳尔氏菌抗体的制备,为后期青枯病菌的快速检测提供参考。     

丹皮酚对NG108—15细胞电压门控K^＋,Na^＋,Ca^2＋流的抑制

利用克隆系ＮＧ１０８－１５细胞在膜片箝全细胞记录下,观察了丹皮酚对钾,钠和钙流的作用,结果表明,ＰＡ对延迟整流钾电流、钠电流、Ｔ型和Ｌ型钙电流均有明显的抑制效应,作用迅速,呈量－效关系,有相当好的可逆性。     

致病性嗜水气单胞菌单克隆抗体的制备及特性鉴定

嗜水气单胞菌是一种人-兽-鱼共患的条件致病菌,本研究旨在利用单克隆抗体技术,制备抗致病性嗜水气单胞菌抗体。以嗜水气单胞菌CCTCC M2014157野生型菌株免疫BALB/c小鼠,利用间接酶联免疫吸附测定技术筛选,获得能够稳定分泌抗嗜水气单胞菌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。制备的腹水依次采用饱和硫酸铵沉淀和Protein-G柱亲和层析纯化,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析抗体纯度。制备的腹水抗体效价达16 000,纯化后(4 mg/mL)效价达8 000,亚型鉴定为IgG2a。特异性分析显示,纯化后抗体能与嗜水气单胞菌结合,与11株常见的致病菌均无交叉反应。本研究为快速检测致病性嗜水气单胞菌提供参考。     

白芍总苷联合甲氨蝶呤治疗类风湿关节炎的药物作用研究

本研究通过大鼠试验探究白芍总苷联合甲氨蝶呤治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的药物作用。将60只类风湿关节炎的大鼠模型随机均分为3组,每组20只,分为对照组、治疗组以及联合组。对照组大鼠不进行任何治疗,治疗组大鼠采用甲氨蝶呤治疗,联合组采用白芍总苷联合甲氨蝶呤治疗。分别比较3组大鼠治疗前、治疗1周、2周、4周后的关节肿胀程度以及疼痛程度。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组治疗4周后TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-6、IL-10等细胞因子的水平,并进行比较。下丘脑β-END、L-ENK以及血清Ig G、血浆SP采用放射免疫法测定。治疗1周、2周、4周后治疗组、联合组疼痛症状显著均低于对照组,治疗2周、4周后联合组与治疗组差异显著,有统计学意义(p0.05);治疗1周、2周、4周后治疗组、联合组足肿胀指数与对照组差异显著,治疗4周后联合组与治疗组差异显著,有统计学意义(p0.05);治疗组、联合组治疗4周后TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-6、IL-10水平与对照组差异显著,治疗组与联合组差异显著,有统计学意义(p0.05);治疗组、联合组治疗4周后β-END、L-ENK、SP、IgG水平与对照组差异显著,治疗组与联合组差异显著,有统计学意义(p0.05)。通过大鼠试验证明在RA的治疗中,运用白芍总苷联合甲氨蝶呤治疗相较于单独使用甲氨蝶呤治疗具有更好的疗效。     

国产河豚毒素（TTX）单克隆抗体8A5有效地拮抗TTX对钠流的抑制

利用克隆系ＮＧ１０８－１５细胞在膜片箝全细胞记录下,观察了国产ＴＴＸ单克隆抗体８Ａ５拮抗ＴＴＸ对跨膜钠电流的作用。结果表明,８Ａ５有效地抑制ＴＴＸ的作用：（１）在标准灌流液中加入１μｍｏｌ／ＬＴＴＸ,Ｎａ＾＋流立即被完全阻断,复加１μｍｏｌ／Ｌ８Ａ５于灌流液,可使Ｎａ＾＋流迅速恢复至对照水平;（２）若先以含１μｍｏｌ／Ｌ８Ａ５的溶液灌流细胞,再更置为含１μｍｏｌ／ＬＴＴＸ的标准液,Ｎａ＾＋流只有部     

肉毒杆菌二元毒素和细胞外酶

对肉毒中毒和肉毒毒蛋白的研究已有近百年历史,肉毒杆菌神经毒素（ＢｏＮＴ）作用机制研究的进展已使它成分为分析神经递质释放的胞吐分子机制和用于临床治疗的有用工具。近年发现,肉毒梭状芽胞杆菌Ｃ和Ｄ型菌株除分泌ＢｏＮＴ外,尚合成另外两类与ＢｏＮＴ结构和生物活必完全不同的蛋白质,肉毒二元毒素和肉毒细胞外酶,它们分别影响细胞骨架和细胞的生长发育,也成为分析相关生命过程的有效工具药,本文综述了这两类蛋白质的有关     

肉毒杆菌神经毒素作用机制的研究进展

肉毒杆菌神经毒素(BoNT)作用机制的研究近年取得的主要进展是：a.证明BoNT是通过降低神经递质释放系统对Ca²⁺的敏感性阻遏突触传递;直接将BoNT导入胞内不显示胆碱能专一性.b.BoNT与细胞表面的结合包括低亲和与高亲和相继两步,有不同的受体.c.BoNT的作用包括毒素与受体的结合,内吞和导入,变构、易位以及毒素作为酶在胞内酶裂与胞吐有关的蛋白质等过程.毒素重链的C端半段、N端半段及轻链分别是与上述过程有关的功能域.     

丹皮酚对NG108－15细胞电压门控K~＋，Na~＋，Ca~（2＋）流的抑制

利用克隆系ＮＧ１０８－１５细胞在膜片箝全细胞记录（ｗｈｏｌｅ－ｃｅｌｌｒｅｃｏｒｄｉｎｇ）下，观察了丹皮酚（Ｐａｅｏｎｏｌ，ＰＡ）对钾、钠和钙流的作用。结果表明，ＰＡ对延迟整流钾电流（ＩＫ）、钠电流（ＩＮａ）、Ｔ型和Ｌ型钙电流（ＩＣａ，Ｔ；ＩＣａ，Ｌ）均有明显的抑制效应，作用迅速（１ｍｉｎ起效），呈量一效关系，有相当好的可逆性。