不同预处理方法对大麦花药-花粉培养的影响

研究了甘露醇预处理的适应性以及pH值对甘露醇预处理效果的影响;并首次将山梨醇预处理应用到大麦花药培养中,获得理想的实验结果。第一,采用甘露醇预处理, 17种材料平均愈伤组织诱导率为20.67块/花药,绿苗产量为2.46株/花药。第二,甘露醇预处理溶液的pH值不同,其预处理的效果也不同。其中,愈伤组织诱导率和绿苗产量均以pH5.6最高。第三,不同浓度(0.1-0.5mol/L)的山梨醇预处理3天绿苗产量差异不显著;但同一浓度(0.3mol/L)山梨醇预处理不同天数(1-7天)绿苗产量差异极显著,以3天处理效果最好,绿苗产量是对照的51.2倍。     

陆地棉胚性愈伤组织原生质体的制备,培养及植株再生

以陆地棉栽培品种“鲁棉６号”下胚轴的胚性愈伤组织为材料,制备并培养原生质体。采用继代培养７￣９ｄ、活力旺盛的胚性愈伤组织,在１％纤维素酶、１％果胶酶、０．７ｍｍｏｌ／Ｌ ＫＨ２ＰＯ４、２．５ｍｍｏｌ／Ｌ Ｃａ＾２＋、０．５ｍｏｌ／Ｌ甘露醇、ｐＨ５．８、３０℃的条件下,具活力的原生质体得率最高。经分离纯化后,原生质体在含有０．４５ｍｏｌ／Ｌ葡萄糖的Ｋ３无机盐、ＮＴ有机物并附加０．１ｍｇ／Ｌ,２,４－     

杏愈伤组织的超低温保存

杏茎段在附加１．０ｍｇ／Ｌ ２,４－Ｄ和０．１ｍｇ／Ｌ ＢＡ的改良ＭＳ培养基中诱导出愈伤组织,放入１０％ＤＭＳＯ＋０．５ｍｏｌ／Ｌ山梨醇或葡萄糖的冰冻保护剂中,以１Ｃ／ｍｉｎ的降温速度降至－４０℃,停留２ｈ后投入液氮保存,在４０℃水浴中化冻。继代培养８次生长１５－２０ｄ的愈伤组织保存后的相对存活率最高,不同品种基因型保存效果差异很大,保存后的愈伤组织生长量比对照减少,但经过２次继代培养后不再表现差     

紫菀花序芽培养及植株再生

１植物名称紫菀（Ａｓｔｅｒｔａｔａｒｉｃｕｓ）。２材料类别花序芽。３培养条件愈伤组织、不定芽诱导及增殖培养基：（１）ＭＳ＋６－ＢＡ０．５～２．０ｍｇ·Ｌ－１（单位下同）;生根培养基：（２）ＭＳ＋ＮＡＡ０．５～２．０＋６－ＢＡ０．２,（３）１／２ＭＳ（大量元素减半）＋ＮＡＡ０．５～２．０＋６－ＢＡ０．２。上述培养基均加０．８％琼脂和３％蔗糖,高温高压灭菌前ｐＨ值调至５．８。培养温度为（２３１２）℃,每天光照１２ｈ,光照度为１５００～２０００ｌｘ４生长与分化情况４．１愈伤组织及不定芽的诱导剪取长约０…     

高寒藏药—抱茎獐牙菜组织培养研究及其愈伤组织有效成分的测定

从抱茎獐牙菜的胚轴、幼叶及未成熟种子诱导出愈伤组织并再生植株,试验选用ＭＳ、Ｂ５和Ｎ６三种培养基,其中以附加２．４－Ｄ３．０ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ的ＭＳ培养基诱导率最高;以附加６－ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ的ＭＳ培养基分化苗频率最高;以附加２．４－Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ的ＭＳ培养基愈伤组织的生长最好。结果表明,外植体,培养基,激素等对愈伤组织诱导、继代和分化均有明显影响。采用高压液相色谱法（ＨＰＬＣ）测定抱茎獐牙菜愈伤组织中齐墩果酸含量的结果表明,愈伤组织中齐果墩酸含量因培养基、继代培养时间的不同而有所差异     

土人参原生质体培养再生植株

分别由土人参（Ｔａｌｉｎｕｍ ｐａｎｉｃｕｌａｔｕｍ （Ｊａｅｑ．） Ｇａｅｒｔｎ．）组织培养再生苗的叶片和幼茎诱导的愈伤组织游离出原生质体．叶肉原生质体在培养中未能进行正常分裂,存活不过１ 周．愈伤组织原生质体在Ｐ４ 培养基中（Ｋ８ｐ＋ ２,４－Ｄ ０．２ ｍ ｇ／Ｌ＋ ＮＡＡ １．０ ｍ ｇ／Ｌ＋ ＺＴ ０．５ ｍ ｇ／Ｌ＋椰乳５０ ｍ Ｌ／Ｌ＋ 葡萄糖０．５ ｍ ｏｌ／Ｌ）培养３ ｄ 开始第一次分裂,培养７ ｄ 时分裂频率为３６．７％ ． 愈伤组织再生率在液体培养中为０．３１％ ,在双层培养中为０．３４％ ． 愈伤组织在含有较低浓度的６－ＢＡ 的分化培养基上分化出不定芽． 幼苗生根后移栽到花盆中继续生长,２～３个月后开花结实,长出粗壮的肉质根． 再生小植株在试管中继代培养２～３ 个月开花结实． 研究结果还表明∶（１）愈伤组织在液体培养基或增殖培养基中培养时间过长,或继代次数过多均不利于分化．（２）较低浓度的６－ＢＡ （０．５～０．７ ｍ ｇ／Ｌ）对愈伤组织的分化是合适的．（３）ＧＡ３ 对幼苗的发育有促进作用． （４）多效唑（ＭＥＴ）对土人参试管苗有明显的壮苗和壮根作用     

不同预处理对大麦花药3种内源激素含量和过氧化物酶活性的影响

研究了大麦（Ｈｏｒｄｅｕｍ ｖｕｌｇａｒｅ Ｌ．）花药－花粉培养中不同预处理对花药内源激素（ＡＢＡ,ＩＡＡ,ＩＰＡ）含量和过氧化物酶活性的影响。结果表明：１． 经甘露醇预处理不同天数,同一种基因型的３种内源激素的变化和不同基因型的同一种内源激素的变化规律十分相似,均是在预处理初期含量急剧增加,最高值在０．５或１ ｄ 处。以后开始逐渐下降;最后,保持在一定的水平上。２． 在甘露醇预处理过程中,两种基因型花药过氧化物酶活性的变化规律也十分相似。在预处理前期（从开始到第３天）活性呈直线上升,第３天达到最大值。从第３天到第５天活性减弱。最后,活性又开始增强。３． 在低温预处理过程的初期（２～５ ｄ） 两种基因型花药过氧化物酶活性都出现第一个小峰。在第１４天（“Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ”）或第２１天（“Ｉｇｒｉ”）又出现第二个峰值,但后者较高。在预处理的后期（从第２８天到第３５天）两种基因型花药过氧化物酶的活性又呈现上升的趋势。同甘露醇预处理后期变化一致     

蝴蝶兰根段的组织培养

１　植物名称　蝴蝶兰（ＰｈａｌａｅｎｏｐｓｉｓＭｅｌｌｅｒＧｏｌｄ“ＮＦＳ”）。２　材料类别　根段。３　培养条件　（１）愈伤组织的诱导及分化培养基：Ｂ５＋ＮＡＡ１．５ｍｇ·Ｌ－１（单位下同）＋ＫＴ０．２＋ＣＭ１５０ｍｌ·Ｌ－１＋３％蔗糖;（２）原球茎增殖培养基：Ｂ５＋ＧＡ０．０５＋ＣＨ１２０＋３％蔗糖;（３）小苗生长培养基：１／２ＭＳ＋２０％香蕉泥＋２％蔗糖;（４）诱导生根培养基：１／２ＭＳ＋ＩＢＡ０．３＋２％蔗糖。上述培养基均加０．２％活性炭,０．５８％琼脂粉,ｐＨ为５．５;培养基在１２１℃高…     

党参原生质体再生植株

党参下胚轴愈伤组织原生质体在附加１．２ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ,０．２ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ,０．２ｍｇ／Ｌ ＢＡＰ和０．１ｍｇ／Ｌ ＺＴ的ＭＳ,Ｃ８１Ｖ,ＤＰＤ及ＫＭ８ｐ培养基中进行液体体层培养。在ＫＭ８ｐ中获得了最高的分裂频率。葡萄糖作渗透剂优于甘露醇,两结合使用效果更好。在合适的条件下,原生质体培养３天出现第１次分裂,４周内形成大细胞团,培养６周后形成０．５－１．０ｍｍ大小的小愈伤组织。在附加２％蔗糖     

大叶紫花苜蓿愈伤组织原生质体再生植株

大叶紫花苜蓿下胚轴诱导的愈伤组织在继代培养基上生长快速,易于分散。继代第１２ｄ的愈伤组织原生质体的得率为６．５×１０７／ｇ鲜重。原生质体培养基为ＳＨ基本培养基,含有１．０ｍｇ／Ｌ２,４－０、０．５ｍｇ／ＬＢＡ、２．０ｇ／ＬＣＨ、２％蔗糖、６％葡萄糖、５ｍｍｏｌ／ＬＭＥＳ,培养密度为１．０×１０５／ｍＬ。培养至第１２ｄ时的原生质体再生细胞植板率为３．７％。由原生质体形成的小愈伤组织在含２．０ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ的ＭＳ固体培养基上大量增殖。增殖的愈伤组织转移至２．０ｍｇ／Ｌ２－ｉｐ＋０．１ｍｇ／ＬＮＡＡ的Ｂ５培养基上,形成体细胞胚并发育成完整植株。     

沙葱的组织培养和植株再生

１植物名称沙葱（Ａｌｌｉｕｍｍｏｎｇｏｌｉｃｕｍ），又名蒙古韭。种子来源于中国科学院沙漠研究所宁夏沙坡头沙漠试验站。２材料类别幼苗的叶片。３培养条件（１）愈伤组织诱导培养基：ＭＳ＋２，４－Ｄ２．０ｍｇ·Ｌ－１（单位下同）＋ＫＴ０．２＋ＣＨ（水解酪蛋白）５００＋蔗糖３％；（２）分化培养基同（１），但２，４－Ｄ为０．５；（３）生根培养基：１／２ＭＳ＋１ＢＡ１．０＋蔗糖３％。上述培养基均加０．７％琼脂粉固化，ｐＨ调至５．８～６．２。培养温度（２５±２）℃。愈伤组织诱导阶段为暗培养，分化阶段每日光照１２…     

无花果曲霉原生质体形成与再生条件的探讨

根据正交试验得出无花果曲霉原生质体形成的最佳条件,用１％的混合酶液（０．５％纤维素酶＋０．２５％蜗牛酶＋０．２５％溶菌酶）作用无花果曲霉菌体细胞,原生质体产量达３．２×１０７个·ｍｌ－１,渗透压稳定剂为０．６ｍｏｌ·Ｌ－１ＫＣｌ于０．２ｍｏｌ·Ｌ－１ＰＯ３＋４（ｐＨ５．８）中,酶解时间和酶解温度分别为３．０ｈ、３０℃．比较不同酶解时间、再生稳定剂和碳源等因素对原生质体再生的影响,可确定最佳再生条件,再生率达３０％以上．     

发根农杆菌A4菌株转化苜蓿悬浮培养物

将苜蓿无菌苗下胚轴切割后,在附加２ｍｇ／Ｌ２,４Ｄ的ＭＳ培养基上诱导愈伤组织。愈伤组织在附加０５ｍｇ／Ｌ２,４Ｄ的ＳＨ培养基中悬浮培养。悬浮培养物在用于转化之前,用０４５ｍｏｌ／Ｌ甘露醇处理１ｈ,然后用０１６ｍｏｌ／ＬＣａＣｌ２·２Ｈ２Ｏ洗涤两次。预处理后的悬浮培养物用ＳＨ培养基悬浮（１０ｍｌ／ｇ悬浮培养物）,再加０２ｍｌ农杆菌悬浮液,于２５±２℃共培养２ｄ。共培养的悬浮培养物洗涤后在附加０５ｍｇ／Ｌ羧苄青霉素的无激素培养基上选择培养。悬浮培养天数、悬浮培养基激素组成和选择培养基种类明显影响转化频率。纸电泳分析表明７０％的转化体可以合成农杆碱和甘露碱。染色体观察显示转化组织细胞存在严重的数目和结构变异     

SNP抑制5-HT诱导的胞内游离钙浓度升高和内钙释放

用Ｆｕｒａ － ２／ＡＭ 荧光测量技术研究了５ － 羟色胺（５－ ＨＴ） 诱导的大鼠尾动脉平滑肌细胞胞内钙升高和一氧化氮（ＮＯ） 的抑制效应。实验表明, 胞外０ｍ ｍｏｌ／ Ｌ Ｃａ２ ＋ 时胞内静息［Ｃａ２ ＋ ］ ｉ 为２０ ．２±８ ．６ｎｍｏｌ／Ｌ（ｎ ＝ ８） 。１０μｍｏｌ／Ｌ ５－ ＨＴ 可诱导出胞内钙库释放引起的瞬态［Ｃａ２ ＋］ｉ 升高,其峰值达２４５ ．７ ±７１．６ｎｍｏｌ／ Ｌ（ｎ ＝ ６） 。１０ － ７ ｍｏｌ／Ｌ 硝普钠（ＳＮＰ） 可抑制５－ ＨＴ 诱导的［Ｃａ２ ＋］ｉ 升高,其峰值浓度降为７５．１±３５ ．９ｎｍｏｌ／Ｌ（ｎ ＝ ５） 。当细胞浴液含２．５ｍ ｍｏｌ／Ｌ Ｃａ２ ＋ 时,静息［Ｃａ２ ＋］ｉ为１１２ ．８ ±１０ ．３ｎｍｏｌ／ Ｌ（ｎ ＝ ５） , 这时１０μｍｏｌ／ Ｌ ５ － ＨＴ 可诱导［Ｃａ２ ＋ ］ ｉ 的峰值为２５２ ．３ ±８０ ．６ｎｍｏｌ／Ｌ（ｎ ＝ ４） ,以及其后平台浓度为１４３ ．０ ±３７ ．６ｎｍｏｌ／Ｌ（ｎ ＝ ４） ,略大于［Ｃａ２ ＋］ｉ 为１１２．８ ±１０ ．３ｎｍｏｌ／Ｌ 的静息浓度,为外钙内流引起。１０ － ７ ｍｏｌ／Ｌ ＳＮＰ 也可抑制５－ ＨＴ 诱导［Ｃａ２ ＋ ］ｉ 平台相浓度。平台浓度由１４３ ±４７     

细毛樟愈伤组织培养

从富含香叶醇的细毛樟（ＣｉｎｎａｍｏｍｕｍｔｅｎｕｉｐｉｌｕｍＫｏｓｔｅｒｍ）叶片外植体诱导出愈伤组织。愈伤组织生长较合适的培养基为ｐＨ５．８附加ＩＡＡ２ｍｇ／Ｌ和ＫＴ０１ｍｇ／Ｌ的ＭＳ培养基,在２５℃下暗培养。愈伤组织无性系继代培养到第６代后芳香成分初步分析结果表明主成分仍为香叶醇。     

大蒜分生组织培养脱病毒和快速繁殖技术

采用茎尖分生组织培养技术,获得了大蒜（Ａｌｌｉｕｍ ｓａｔｉｖｕｍ Ｌ．）的无病毒试管苗。通过基本培养基和激素配比试验,筛选出最佳的培养基组成,进行脱病毒苗的快速繁殖。结果表明：诱导愈伤组织的最适培养基为：ＭＳ＋ＢＡ０．２ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ,月生长率达１２．７０倍;诱导丛生芽的最适培养基为：Ｂ５＋ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ,丛生芽繁殖系数高达２５．５倍,技术上达到了快速繁     

杜仲愈伤组织超低温保存的研究

采用单因子比较、正交设计和均匀设计法,分别考察影响杜仲愈伤组织诱导、生长及其超低温保存的因素。试验表明：Ｂ５＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋６—ＢＡ１ｍｇ／Ｌ有利于意伤组织诱导。ＭＳ＋２．４—Ｄ３ｍｇ／Ｌ＋６—ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ则有利于愈伤组织快速生长。超低温保存的最佳材料是２周龄的愈伤组织。愈伤组织超低温保存的较好冷冻保护剂是１２．５％Ｇｌｙ＋７．５％ＰＥＧ＋２．５ｇ／ＬＬＨ。     

胡杨离体器官发生及试管无性系的建立

研究了离体条件下胡杨（Ｐｏｐｕｌｕｓ　ｅｕｐｈｒａｔｉｃａ　Ｏｌｉｖｅｒ）茎段、叶片及愈伤组织的器官发生和植株再生技术。离体培养以ＭＳ为基本培养基并附加４０ｍｇ／Ｌ腺嘌呤和５００ｍｇ／Ｌ水解乳蛋白。离体叶片和茎段在ＢＡ为０．５ｍｇ／Ｌ和ＮＡＡ为０．５ｍｇ／Ｌ的培养基上诱导产生愈伤组织,并在含０．２５ｍｇ／ＬＢＡ和０．５ｍｇ／ＬＮＡＡ的培养基上继代增殖。ＢＡ为０．５ｍｇ／Ｌ和ＮＡＡ为０．１ｍｇ／Ｌ可诱导叶片和愈伤组织发生不定芽,诱导频率分别为１００％和８２．９％,对于茎段,ＢＡ和ＮＡＡ分别为０．１ｍｇ／Ｌ和０．０１ｍｇ／Ｌ时诱导不定芽频率可达８３％。试管苗在大量元素减半并附加０．０１５ｍｇ／ＬＮＡＡ的ＭＳ培养基上诱导生根,生根率达８６．２％。     

藏红花愈伤组织诱导及其细胞培养的研究

藏红花幼叶愈伤组织的诱导频率在ＭＳ,Ｂ５和Ｗｈｉｔｅ三种培养基上均高达９８％;幼叶和芽的诱导率差异不大,高达９９％;不同时期的叶片差异较大,以幼叶诱导为佳;球茎诱导率为近８０％;激素配比以２．４－Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ,ＢＡＰ０．１～０．５ｍｌ／Ｌ为宜。在继代培养阶段,ＭＳ比Ｂ５和Ｗｈｉｔｅ更适合细胞的快速生长繁殖;并且以叶片的愈伤组织生长较快,芽次之,球茎最慢,适合于细胞生长的激素配比为ＮＡＡ２．０～３．０ｍｇ／Ｌ,ＢＡＰ０．５～１．０ｍｇ／Ｌ为宜。     

粉叶小檗愈伤组织的培养及小檗碱的含量

由粉叶小檗（Ｂｅｒｂｅｒｉｓ ｐｒｕｉｎｏｓａ）的茎、腋芽、叶、实生苗的子叶及胚轴均可诱导出愈伤组织。Ｂ５＋２,４－Ｄ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．２ｍｇ／Ｌ培养基对诱导较好,而Ｂ５＋２,４－Ｄ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．５ｍｇ／Ｌ对愈伤组织生长较适宜。接种量在０．４－０．８ｇ（２０ｍｌ培养基）之间较为适宜。经薄层层析－分光光度法、薄层扫描法是鉴定,证明愈伤组织具有合成小檗碱的能力,含量高达１．８１４８％。