发酵液中曲酸的提取方法比较

1907年斋滕在蒸米发酵物中发现曲酸(Kojic acid).1 92 4年,薮田测定了曲酸的结构[1,2],化学名称为5-羟基--2-羟甲基-1,4吡喃酮,相对分子质量142.1.曲酸具有抑菌能力、抗氧化性、与金属离子螯合作用等性质, 因此在食品中可作为防腐剂、保鲜剂、护色剂;曲酸具有抑制黑色素生成酶--酪氨酸酶活性的功能,有显著的增白作用,现已在美白化妆品、浴剂及牙膏等日化工业中应用[2, 3];它还可作为香料合成的中间体,故此国内外近来对曲酸开展了广泛的研究.目前, 采用发酵法生产曲酸的方法较多,对发酵液中曲酸的提取方法有萃取法、沉淀法、吸附法、浓缩结晶法等[1,2]. 本文采用萃取法、直接浓缩结晶法、沉淀法提取方法,分别研究了这几种方法对曲酸发酵液中曲酸的提取率、提取产品纯度等几方面的影响,结果表明直接浓缩结晶法是一种较好的曲酸提取方法.     

三氯化铁比色法测定曲酸含量方法的改进

曲酸(Ｋｏｊｉｃａｃｉｄ)又名5-羟基-2-羟甲基-4-吡喃酮,1907年斋滕在蒸米发酵物中发现曲酸,1924年,薮田测定了曲酸的结构[1]。曲酸在食品中可作为防腐剂、保鲜剂、护色剂,由于其特殊的性质和结构能抑制熏肉中亚硝酸钠转化为致癌的亚硝胺;曲酸具有抑制黑色素生成酶-酪氨酸酶活性的功能,有显著的增白作用,现已在美白化妆品、浴剂及牙膏等日化工业中应用[2];它还可作为香料合成的中间体,故此国内外近来对曲酸开展了广泛研究。目前,发酵法生产曲酸的方法有:表面静态培养法、通风发酵法、半连续微孔薄膜表面液态培养技术、固定化细胞技术等[3]…     

曲酸的发酵生产及其应用的研究

筛选了１１８株曲霉、获得一株黄曲霉８００４。采用葡萄糖与蛋白胨为主要原料,８００４菌株发酵产曲酸４％以上。发酵液通过过滤、浓缩可直接结晶。利用发酵方法制得的曲酸与硬脂酸进行酯化反应,生成曲酸硬脂酸双酯、收率达８０％以上。化妆品试验表明曲酸及曲酸硬脂酸酯具有增白与防晒作用。曲酸（ｋｏｊｉｃ ａｃｉｄ）化学名称５－羟基,２－羟甲基ｒ－吡喃酮,１９０７年斋滕在米曲抽提液中发现（１）。１９９２年确定其结构     

发酵液中曲酸的提取方法比较

190 7年斋滕在蒸米发酵物中发现曲酸(Ｋｏｊｉｃａｃｉｄ)。 1 92 4年 ,薮田测定了曲酸的结构[1,2 ] ,化学名称为 5 -羟基——— 2 -羟甲基- 1 ,4吡喃酮 ,相对分子质量 1 42 .1。曲酸具有抑菌能力、抗氧化性、与金属离子螯合作用等性质 ,因此在食品中可作为防腐剂、保鲜剂、护色剂 ;曲酸具有抑制黑色素生成酶———酪氨酸酶活性的功能 ,有显著的增白作用 ,现已在美白化妆品、浴剂及牙膏等日化工业中应用[2 ,3] ;它还可作为香料合成的中间体 ,故此国内外近来对曲酸开展了广泛的研究。目前 ,采用发酵法生产曲酸的方法较多 ,对发酵液中曲酸的提…     

曲酸对飞蝗酚氧化酶以及其他生化酶活性的影响

酚氧化酶(Phenoloxidase)可以催化黑色素中间体多巴胺的形成,是昆虫黑化作用中的关键酶,在昆虫细胞免疫和体液免疫过程中发挥着重要的作用。"近年来,酚氧化酶成为新型杀虫剂靶标的研究对象之一,而酚氧化酶的抑制剂曲酸(Kojic acid)对昆虫解毒酶和保护酶的影响的研究却很少。为了探索酚氧化酶与昆虫其他解毒酶或保护酶类的关系,本文利用含不同剂量曲酸的麦麸饲喂飞蝗,检测飞蝗存活率以及虫体酚氧化酶(PO)、乙酰胆碱酯酶(AChE)、解毒酶(ESTs和GSTs)和保护酶(POD、SOD和CAT)的活性。结果发现,曲酸对飞蝗无明显毒力;在曲酸处理1 d和3 d后,曲酸处理组飞蝗PO二酚酶活性显著低于对照,5 d和7 d后飞蝗PO活性与对照相比差异不大;处理3 d后,飞蝗AChE活性显著低于对照,而5 d后AChE相比于对照显著升高;偏高浓度的曲酸在1 d和3 d后对飞蝗ESTS和GSTs有显著的抑制,5 d和7 d后飞蝗ESTs和GSTs活性上升;曲酸在1 d和3 d后引起了飞蝗保护酶的升高,5 d后飞蝗保护酶有一定的下降。以上结果表明,曲酸对飞蝗PO有明显抑制作用,同时也干扰了昆虫其它生化酶的活性。由此推测,曲酸可以作为杀虫剂或者杀虫真菌的增效剂。     

曲酸对斑玉蕈子实体形成过程中木质纤维素酶的影响研究

为了探究曲酸增加子实体产量的机制,首先考察了搔菌后外源添加曲酸对不同菌丝培养时间出菇的影响。研究发现当菌丝培养时间过短或者过长添加曲酸都得不到很好的增产效果,菌丝培养时间在60-80d之间增产效率最高,并且后熟期60d的增产效率大于80d的增产效率。进一步研究发现添加曲酸可以提高菌丝利用基质中木质纤维素的利用率。更深入地研究发现,基质中的漆酶和纤维素酶活性在斑玉蕈的不同发育时期受到曲酸调控。漆酶活性在最初的菌丝恢复期和转色期酶活性低于对照组,但是在原基期、钉头期和子实体期酶活性显著地高于对照组;纤维素酶活性在整个发育周期中曲酸组都高于对照组,在子实体发育后期酶活性被提高3.16倍。最后,从分子水平上分析了漆酶基因和纤维素酶基因的表达量,研究显示添加曲酸后漆酶基因和纤维素酶基因在不同程度上被上调,这个结果与酶活的结果相一致。这些结果说明外源添加曲酸通过提高生殖生长阶段的菌丝利用培养基质中的漆酶和纤维素酶活性,进而提高菌丝利用木质纤维素,为斑玉蕈子实体生长发育提供更多的能源,实现增加子实体产量的目的。     

曲酸的研究和应用

长期以来人们都知道食品酿造业操作工人的双手总是显得白嫩这一现象,生物化学家受此现象启发并进行研究,发现豆酱、酱、酒、醋等的酿造过程中发酵菌曲霉菌（Ａｓｐｅｒｇｉｌｕｓｓｐ．）产生了一种天然产物,经分离、纯化和化学结构分析,确定是一种５羟基２羟甲基γ吡喃酮化合物,定名为曲酸（ＫｏｊｉｃＡｃｉｄ）。随后又进行了一系列研究,证明曲酸是皮肤细胞合成黑色素（Ｍｅｌａｎｉｎ）关键酶酪氨酸氧化酶的专特性抑制剂,抑制黑色素的合成,肯定了曲酸祛斑、阻滞色素沉着、使皮肤美白的独特功效。曲酸的应用,使美白祛斑化妆品更新换代,在国外各种牌号的含曲酸高档化妆品已相继投入市场。本研究生产的生物高技术新产品—曲酸制剂,为我国化妆品生产厂家开发高级曲酸化妆品提供优质廉价的原料。     

Aspergillus flavus F52菌株鉴定及不同碳源对曲酸产量的影响

【目的】探明豇豆内生真菌F52的分类地位及不同碳源对曲酸产量的影响。【方法】采用形态观察及ITS序列分析对豇豆内生真菌F52进行分类鉴定;通过重结晶获得曲酸高纯度产物,采用核磁共振波谱、高分辨质谱及红外光谱对其进行结构鉴定;采用高效液相色谱检测不同碳源对曲酸产量的影响。【结果】该曲酸产生菌为黄曲霉Aspergillus flavus F52;葡萄糖与蔗糖组成的复合碳源曲酸产量最高,乳糖的存在不利于曲酸的生成;该菌株发酵液中曲酸含量可达24.44 g/L。【结论】Aspergillus flavus F52是一株具有产业化开发价值的曲酸高产菌株。     

曲酸生产菌的诱变选育

Aspergillusoryzae2336经两次紫外诱变后筛选出突变菌株UV21012-1。该菌株曲酸产量比出发菌株提高了1．68倍;遗传性状稳定,传代5次曲酸产量基本不下降,而且发酵周期也比出发菌株明显缩短。     

甘薯原料发酵柠檬酸的菌种选育及发酵条件的研究

从腐烂水果上分离池一株柠檬酸产生菌——黑曲毒,经两次不同能源的γ-射线照射获得一株变异株,产酸能力比原菌株提高50％以上,编号为γ-144。Aspergillus niger γ-144能够利用甘薯粉做为唯一营养源进行柠檬酸发酵,在12％甘薯粉培养基上振荡培养5天,总酸产量达到9％,对总糖转化率达90％。     

曲酸对台湾乳白蚁纤维素酶活的抑制与应用研究

为了探究有害白蚁的安全防控新技术,本文研究了生物源活性物质曲酸对建筑结构主要害虫台湾乳白蚁纤维素酶活性的抑制效果。在室内条件下选择1%曲酸溶液滤纸饲喂白蚁,分别于饲喂6 h、12 h、1 d、3 d、5 d、7 d时收集白蚁消化道,采用还原糖法测定了白蚁消化道的滤纸酶活性(FPA)及内切β-1,4-葡聚糖酶(EG)、β-葡萄糖苷酶(BG)和纤维二糖水解酶(CBH)的比活力,并观测记录供试白蚁的体重与死亡率变化。结果显示,除6 h处理样的FPA和CBH活性影响不显著外,其余处理对白蚁纤维素酶活性均有显著的抑制作用,且随处理时间的延长曲酸对台湾乳白蚁纤维素酶活抑制率增强,抑制率显示FPAEG≥BGCBH。曲酸处理7d后,白蚁活动能力明显减弱,工蚁体重显著降低且死亡率显著升高。曲酸与氟虫脲联合喂食处理对台湾乳白蚁FPA和EG活性的抑制效果高于氟虫脲单独饲喂台湾乳白蚁,而且白蚁死亡率也显著提高。研究表明曲酸对于白蚁纤维素酶活性具有抑制效果,对于氟虫脲具增效作用,可为白蚁治理新技术的研究提供参考。     

一株嗜酸兼性异养菌的分离和系统发育分析

从广东大宝山矿区硫化矿酸性矿坑水中分离获得一株嗜酸兼性异养菌DBS4-1,对该菌株进行了形态、生理生化特性研究及16S rRNA序列分析。分析结果显示:该菌株为革兰氏阴性细菌,球状,菌体直径约为4.0±0.5μm;该菌株兼性异养,具有广泛的底物利用特性,可以利用有机物进行异养生长,同时在自养环境中,还可以利用三价铁、单质硫获得能量进行生长,最适生长温度为30℃左右,最适生长pH约为3.5;该菌16S rRNA序列与Thiobacillus acidophilus(D86511)同源性高达99%。结果表明DBS4-1属于嗜酸硫杆菌属(Acidiphilium sp.),嗜酸种(acidophilum)。     

“微生物酶法拆分制备手性中间体D-泛解酸内酯”中试项目通过鉴定

由江南大学 (原无锡轻工大学 )和浙江鑫富生化股份有限公司合作研究完成的《微生物酶法拆分制备Ｄ -泛解酸内酯》中试项目 ,于 2 0 0 1年 3月通过了国家石油与化学工业局主持、组织的专家鉴定。Ｄ -泛解酸内酯是生产Ｄ -泛酸和Ｄ -泛醇的关键手性中间体。泛酸、泛醇是一种重要的药物、食品添加剂和饲料添加剂。Ｄ -泛酸与其他Ｂ族维生素一起用于补充营养 ,临床上也一直用于治疗一些疾病。特别是Ｄ -泛酸钙作为一种重要的维生素饲料添加剂 ,在畜禽养殖中具有重要的作用 ,大量用于饲料工业。该成果采用了“微生物酶法水解Ｄ -泛解酸内酯”进行…     

稻曲球脂溶性成分及其抗细菌和抗氧化活性

采用水蒸气蒸馏法从稻曲球甲醇提取物的石油醚萃取部分制备出油状物,得率为稻曲球干重的0.36%。用GC-MS鉴定出14个成分,主要成分为10,13-十八碳二烯酸甲酯(37.31%)、14-甲基十五烷酸甲酯(30.09%)、(Z,Z)-9,12-十八碳二烯酸(15.63%)、棕榈酸(10.52%)和十八烷酸甲酯(5.54%)。从石油醚萃取部分还分离到3个化合物,经理化和波谱分析鉴定为油酸(1)、正四十烷(2)和麦角甾-5,7,22-三烯-3-醇(3)。化合物3对黄瓜角斑病菌等4种供试细菌表现出较强的抑制活性,化合物1和2以及油状物表现出一定的抗氧化活性。这是首次对稻曲球中脂溶性成分及其抗细菌和抗氧化活性的报道。     

曲酸高产菌株的诱变选育

以紫外线和氮离子注入作为诱变手段对曲酸产生菌黄曲霉CICC2242进行诱变处理,筛选出一株高产菌株N83。曲酸产量由初始的12．4g／L提高到19．4g／L,提高了56．5％;遗传稳定性实验结果表明,N83遗传性状稳定良好。该结果表明氮离子注入诱变是获得高产曲酸的有效途径。     

米曲霉Aspergillus oryzae发酵生产曲梭的研究

分离到Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｏｒｙｚａｅ１３个菌株,其曲酸产量变化幅度１６．６－４８．６ｍｇ／ｍｌ,从中选出４个高产菌株。在１％酵母提取物和１５％蔗糖培养液中３０℃发酵培养,８￣１０天菌体生长量和曲酸产量达到最大值,随后曲酸产量迅速下降。蔗糖浓度对菌体生长和曲酸产量影响甚大,最适蔗糖浓度为１５％。天冬氨酸、甘氨酸、赖氨酸、谷氨酸、吡哆醇、叶酸和抗坏血酸有利于菌体生长并显著提高曲酸产量。将在ＹＥＳ     

酵纤曲的生产及饲养试验小结

在伟大领袖毛主席无产阶级革命路线指引下,我国养猪事业有了很大发展。为了提高粗饲料的利用价值,支援养猪业的大发展,我们在公司党委领导下,学习各地制做饲料发酵曲的先进经验,并结合工厂生产的特点,于1973年开始试制酵纤曲。两年来,通过反复试验,巳取得初步成果,粗饲料经酵纤曲发酵后蛋白质、脂肪含量都有所提高,并具酸、甜、软、熟、香等发酵饲料的特点,经过饲养试验,能提高增重率和降低精饲料的消耗。为适应养猪事业发展的需要,我厂已建成年产500吨酵纤曲的生产车间。     

米曲霉Aspergilus oryzae发酵生产曲酸的研究

分离到Ａｓｐｅｒｇｉｌｕｓｏｒｙｚａｅ１３个菌株,其曲酸产量变化幅度１６６—４８６ｍｇ／ｍｌ,从中选出４个高产菌株。在１％酵母提取物和１５％蔗糖培养液中３０℃发酵培养,８—１０天菌体生长量和曲酸产量达到最大值,随后曲酸产量迅速下降。蔗糖浓度对菌体生长和曲酸产量影响甚大,最适蔗糖浓度为１５％。天冬氨酸、甘氨酸、赖氨酸、谷氨酸、吡哆醇、叶酸和抗坏血酸有利于菌体生长并显著提高曲酸产量。将在ＹＥＳ培养液中培养１０天的菌体重新悬浮于含１５％蔗糖的ＹＥＳ培养液或０２Ｍ磷酸缓冲液（ｐＨ６５）中８—１０天曲酸产量仍可达到４５ｍｇ／ｍｌ以上。低温条件下制备的培养８—１０天的Ａｏｒｙｚａｅ菌体匀浆反应系统仅有痕量曲酸形成。     

2-卤代酸脱卤酶研究进展

2-卤代酸脱卤酶(EC 3.8.1.X)催化2-卤代酸脱卤水解形成相应的2-羟基酸。该类酶不仅能够降解环境中的卤代污染物,而且具有宽广底物谱和高效手性拆分特性,因而在环保和手性中间体的绿色合成中具有广阔应用前景。目前已经对多种2-卤代酸脱卤酶进行生化特性表征,并对酶分子三维结构及催化机制进行了深入研究。文中从2-卤代酸脱卤酶的来源、蛋白质结构与催化反应机制、催化特性及应用方面等研究取得的新进展进行综述,并展望了2-卤代酸脱卤酶的进一步研究方向。     

崇明八二酒曲中根霉的鉴定及其特性

从酿造崇明老白酒的八二酒曲中分离纯化得到2株根霉,结合形态学和分子生物学方法对2株根霉菌进行鉴定,并对其制成的纯种根霉曲的糖化效果、总酸和酒精产量等进行了比较。从形态及其发酵特性,可确定气生菌丝为灰黑色的R1和气生菌丝为白色的R2均为米根霉种(Rhizopus oryzae)日本根霉个种(Rhizopus japonicus Vuill.),r DNA ITS鉴定这2株菌株均为米根霉(Rhizopus oryzae)。糖化前2天,R2曲的糖化速率极显著高于R1曲,但糖化3 d~4 d时两者还原糖产量无明显差异,为28.9 g/100 m L~30.6 g/100 m L,在0.1%~0.5%的添加范围内,曲的添加量对还原糖产率和产量无显著影响。糖化2天内总酸上升迅速,且随糖化时间的延长而持续上升。R1、R2曲糖化液的总酸产量分别为3.6 g/L~5.6 g/L、8.9 g/L~10.8 g/L,其中R2曲的总酸产量超出崇明老白酒地方标准DB 31/384-2007中总酸2.5 g/L~7.5 g/L的要求范围。从总酸产量和口感方面考虑,R1曲更适合用于酿造崇明老白酒。