离子胁迫诱导洋葱鳞茎内表皮细胞凋亡

通过不同浓度离子胁迫诱导剂(NaCl、CaCl2)对洋葱鳞茎内表皮细胞进行不同时间的处理,发现0.1M、0.5M的NaCl和CaCl2处理2小时即可诱导出细胞凋亡现象,随处理时间延长直至10小时,细胞核凋亡的形态学变化和凋亡小体更加明显,基因组DNA降解更加梯状条带化。本实验对离子诱导的洋葱鳞茎内表皮细胞凋亡现象做了较系统的描述,为植物细胞凋亡的研究及细胞凋亡实验教学提供了经济、快捷、有效的诱导方法。     

8-羟基喹琳和对苯二酚对几种常用植物材料根尖细胞有丝分裂中期指数的影响

为了了解8-羟基喹啉（8-Hydroxyquinoline）和对苯二酚（P-hydroquinone）对蚕豆、洋葱和大蒜几种实验室常用植物有丝分裂材料根尖细胞中期分裂指数的效应．应用不同浓度的8-羟基喹啉和对苯二酚（0.002mol／L、0.004mol／L、0.006mol／L、0.008mol／L）分别处理3种植物根尖细胞．结果表明,8-羟基喹啉在0.004mol／L时处理洋葱和大蒜根尖,中期分裂指数较高：对苯二酚在0．004mol／L时处理蚕豆根尖,中期分裂指数较高;而对苯二酚处理洋葱和大蒜根尖时最佳浓度是0.008mol／L．该浓度根尖细胞有丝分裂指数达到最大值。     

农杆菌介导的MpASR蛋白在洋葱表皮细胞的定位研究

通过比较不同侵染液浓度、侵染时间、取材部位、预处理等条件下的转化效果,优化了农杆菌介导的洋葱鳞茎内表皮细胞转化系统,并且成功检测到大蕉ASR蛋白(MpASR)与GFP的融合蛋白在洋葱表皮细胞中的分布.     

秋水仙素对洋葱根尖细胞染色体结构变异的影响

用0.05%和0.1%秋水仙素溶液对洋葱Allium cepa根尖进行控时处理,研究不同秋水仙素浓度和不同处理时间对洋葱根尖细胞有丝分裂畸变的影响。结果显示,秋水仙素有促进细胞有丝分裂染色体停滞在中期的能力;不同固定时间对洋葱根尖细胞有丝分裂有影响;秋水仙素对洋葱根尖细胞染色体有畸变效应,诱导产生畸变的能力受溶液浓度和处理时间的影响。     

Cameleon测钙系统在H202诱导的A549细胞凋亡过程中的应用

观察Cameleon测钙系统在H202诱导的A549细胞凋亡过程中的应用,实时测定胞浆Ca2＋浓度（[Ca2＋]i）,并探讨[Ca2＋]I－与细胞凋亡和Pyk2磷酸化的关系。采用ca2＋指示器CameleonYC3．6转染A549细胞,24h后用50mmol／LH202刺激细胞。激光扫描共聚集显微镜实时测定选取细胞的[ca2＋]i变化。采用Westernblot检测H202刺激的细胞中Pyk2－tyr402磷酸化水平。采用DAPI染色试剂盒观察H2O2刺激后细胞凋亡情况。结果发现,在H2O2作用下,A549细胞胞浆内游离[Ca2＋]迅速升高,同时Pyk2－tyr402磷酸化水平显著升高俨〈O．05）,凋亡细胞百分比显著增加（Ｐ〈0．01）。因此,H202促进A549细胞内Ca02＋释放,可能通过活化Pvk2诱导细胞凋亡。     

一种崂山百合的离体快速繁殖技术

以崂山百合的鳞茎为外植体,通过植物组织培养技术成功获得了再生植株,建立了该植物的快速无性繁殖体系。整个组织培养过程分为芽的诱导、根的诱导和移栽三个阶段。适合芽诱导的最佳外植体是：鳞茎基部,最适培养基是：1／2MS＋0．5mg／LNAA＋0．8mg,LKT＋3％蔗糖。用于生根的最佳培养基是：1／2MS＋0．4mg/LIBA＋3％蔗糖。最适培养温度为25℃．不同基质对组培苗移栽的成活率有一定影响,其中在珍珠岩上的移栽成活率为98％。     

二苯乙烯苷抑制过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡

目的：研究二苯乙烯苷（TSG）对过氧化氢（H2O2）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）凋亡的保护作用。方法：运用四甲基偶氮唑盐还原法（MTT法）和流式细胞术筛选建立细胞凋亡模型的H2O2合适浓度以及检测不同浓度TSG对H2O2诱导HUVECs的增殖率和凋亡率;Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态。结果：MTT及流式法筛选300μmol/L为H2O2作用于细胞的最适凋亡浓度。MTT和流式结果显示,与H2O（2300μmol/L）损伤组比较,10μmol/L与100μmol/LTSG预处理组细胞的增殖率增加（P〈0.05）,凋亡率显著降低（P〈0.01）;Hoechst33258染色观察TSG能降低H2O2诱导的细胞凋亡,使细胞凋亡数减少。结论：TSG能抑制H2O2诱导的HUVECs凋亡,从而起到保护血管内皮细胞的作用。     

二甲戊灵对离体大蒜染色体的加倍研究

在MS分化培养基中分别添加不同浓度的秋水仙素和二甲戊灵,以 "改良蒜" 的蒜瓣基部为外植体诱导愈伤组织染色体变异并再生植株,观察根尖细胞染色体数和叶片下表皮保卫细胞特征检测诱变效果.结果表明:大蒜染色体数变异受诱变剂浓度和处理持续时间的影响,诱变剂高浓度和短时间处理均有利于大蒜愈伤组织的分化;添加0.1%秋水仙素处理5 d,愈伤组织存活率为80.7%,分化率为78.1%,四倍体的诱导率为4%;添加 100 μmol/L二甲戊灵处理5 d,愈伤组织存活率为100%,四倍体的诱导率为6%.对根尖细胞染色体和叶片下表皮气孔数目和大小观察显示,诱变株具有四倍体的基本特征.说明二甲戊灵能在离体条件下有效诱导大蒜产生四倍体,可替代秋水仙素对大蒜染色体的加倍作用.     

植物细胞凋亡的ELISA检测

本文利用TUNEL方法在单个细胞水平上对苯胺灵诱导的玉米根尖细胞死亡进行了检测。结果表明,一定浓度的苯胺灵能诱导玉米根尖细胞发生主动性的细胞凋亡,具有细胞凋亡典型的形态和生化特征即细胞核浓缩并形成核碎片、染色质边缘化及DNA特异片段化等（Fig.1)。首次利用ELISA方法在群体水平上对这种细胞凋亡进行了进一步检测。结果表明：动物细胞研究常用的ELISA方法同样也适合用于植物细胞凋亡的检测。在凋亡前期,随着凋亡过程的进行,细胞质中的OD值逐渐上升（Fig.2)。剂量实验表明,0．2mg/mL苯胺灵最适合于诱导细胞凋亡（Fig.3)。     

洋葱鳞茎内表皮细胞中的微管

用超薄切片和原生质体负染的方法,在电镜下观察到洋葱鳞茎内表皮细胞周质微管的存在。其出现时间、分布状况以及排列形态,基本上与考马斯亮蓝染色法观察到的网状结构物相一致。讨论了包被囊泡和微管组织中心可能的作用。     

藏红花素诱导人胶质瘤U251细胞内质网应激性凋亡的研究

目的：研究藏红花素对人胶质瘤U251细胞的促凋亡作用和可能的机制。方法：不同浓度藏红花素处理U251细胞后,MTT法检测细胞活力,TUNEL染色观察细胞凋亡情况。结果：①藏红花素显著抑制U251细胞的增殖,并诱导其发生凋亡。②藏红花素增加了U251细胞胞浆内钙离子的含量,并上调了内质网分子伴侣GRP78的表达。③藏红花素处理后的U251细胞内质网相关凋亡分子CHOP,Caspase-4,JNK活性明显增高。结论：藏红花素通过诱导内质网应激性凋亡抑制人胶质瘤U251细胞的增殖。     

杨梅黄酮减弱MPP^＋诱导的MES23．5细胞的细胞毒性

目的：探讨杨梅黄酮对MPP＋处理的MES23．5细胞的保护作用。方法：实验分为空白对照组,MPP^＋ 处理组,MPP^＋ 和杨梅黄酮共处理组,分别处理MES23．5细胞24h后,应用Hoechst 33258染色观察各组细胞细胞核形态的改变,应用RT-PCR技术观察Bcl-2和BaxmRNA表达的改变。结果：杨梅黄酮能明显抑制MPP’引起的MES23．5细胞核固缩,核碎裂等形态学的改变,杨梅黄酮还可以对抗MPP’处理造成的MES23．5细胞的Bcl-2／Bax比率的降低。结论：杨梅黄酮对MPP^＋ 处理的MES23．5细胞具有保护作用。     

Simultaneous quantification of nucleoproteins and comparison of methyl green-pyronin Y and Feulgen staining in sections of oral squamous cell carcinoma,dysplastic lesions and normal mucosa

A fundamental difference between normal cells and tumor cells is the proliferative activity of the nucleus and nucleolus, which increases progressively from normal to oral dysplastic mucosa to oral squamous cell carcinoma (OSCC). This activity is evaluated routinely using hematoxylin and eosin (H & E) staining, but in some cases, inter-observer variability occurs among pathologists. We evaluated cellular proliferation by staining sections with the methyl green-pyronin Y procedure and the Feulgen reaction. We also compared the efficacy of methyl green-pyronin Y and Feulgen staining for studying nuclear and nucleolar features in oral dysplastic mucosa and in different grades of OSCC. Sections cut from formalin fixed, paraffin embedded blocks of five normal mucosa, 15 dysplastic mucosa, 10 well-differentiated OSCC, 10 moderately differentiated OSCC and five poorly differentiated OSCC cases were stained with Hematoxylin and Eosin, methyl green-pyronin Y and the Feulgen reaction. The mean diameters of the nuclei and number of nucleoli showed significant differences. A progressive increase in diameter of the nucleus and number of nucleoli was observed from normal mucosa through poorly differentiated OSCC. We observed that methyl green-pyronin Y stain is more useful than Feulgen and hematoxylin and eosin for simultaneous quantitative assessment of both RNA and DNA. The simplicity of this technique makes it a valuable tool even for daily routine examination.     

二苯乙烯苷通过抑制NF-κB的激活减轻MPP＋诱导的PC12细胞凋亡

目的：探讨2,3,5,4＇-四羟基二苯乙烯-2-o-β-D-葡萄糖苷（2,3,5,4＇-tetrahydroxystibene-2-o-β-D-glucoside,TSG）对1-甲基-4-苯基吡啶离子（1-methy-4-phenylpyridinium,MPP＋）诱导PC12细胞凋亡的影响及其可能机制。方法：四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色试验检测PC12细胞活性;Hoechst33258染色法测定细胞凋亡;Westernblotting检测NF-κB（P65）和IκBα蛋白的表达。结果：MPP＋（300μmol/L）作用于PC12细胞24h后,与正常对照组比较,细胞存活率降低（53.3±3.4%）（P〈0.01）;细胞染色质固缩,细胞核呈致密浓染。TSG（1,5,10μmol/L）预处理24h后,细胞存活率增加（60.8±1.9%）,（70.1±1.8%）（P〈0.01）,（81.2±1.9%）（P〈0.01）;细胞核凝聚明显减少,且具有量一效关系。另外,MPP＋可使PC12细胞核中NF-κB（P65）蛋白表达升高,细胞浆中IκBα蛋白表达降低;与MPP＋处理组细胞相比,TSG预处理后,PC12细胞核中高表达的NF-κB（P65）蛋白水平明显降低,细胞浆中低表达的IκBα蛋白水平升高。结论：TSG对MPP＋诱导的PC12细胞凋亡具有浓度依赖性的抑制作用,其作用机制可能与抑制NF-κB的激活有关。     

In vitro bulb production fromAllium spp.

Summary A procedure for bulb formation from onion, garlic, and shallot explants is described. Explants from cut stem bases were cultured in shoot induction medium composed of Murashige and Skoog (MS) medium with or without N⁶-benzyladenine. Shoots produced were then transferred to bulb induction medium composed of MS medium containing 5 g/liter activated charcoal and 120 g/liter sucrose under a long-day photoperiod and 28° C. Bulbs were also produced from onion and garlic directly, without passing through shoot formation, when explants were cultured in the bulb induction medium described above. Bulbs were transferred to soil without acclimatization and produced viable plants.     

The use of methyl green-pyronin staining after glutaraldehyde fixation and paraffin or araldite embedding.

Methyl green-pyronin staining has been used for localization of RNA and DNA in chick and mouse embryonic tissues and in insect larval salivary glands. Glutaraldehyde or tricholoracetic acid-lanthanum acetate (TCA-LA) was used as fixative and paraffin wax or Araldite was used as embedding medium. For good results the following are specially desirable: fixation with 2.5% glutaraldehyde, dehydration in alcohols for short time, and the use of fresh staining solutions. After TCA-LA fixation the final results are much less specific. The digestion with RNAse appears essential for the detection of RNA because pyronin does not seem to be entirely specific to RNA. The results show that glutaraldehyde a common fixative for electron microscopic work, is particularly suitable fixative for light microscopic cytochemical investigations if followed by methyl green-pyronin staining; furthermore, methyl green-pyronin staining after glutaraldehyde fixation can be carried out on Araldite sections.     

抑制c-FLIP基因促进TRAIL诱导的乳腺癌细胞凋亡

目的：探讨抑制c-FLIP的表达对TRAIL诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响。方法：重组腺病毒Ad-c-FLIP-siRNA和Ad-sTRAIL单独及联合感染对TRAIL耐药的乳腺癌细胞MCF-7,应用实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测病毒感染后各组细胞内c-FLIP和TRAIL的mRNA表达变化;MTT法和结晶紫染色法检测MCF-7细胞活性,Hoechst 33258荧光染色检测各组细胞的凋亡情况。结果：与阴性对照组比较,c-FLIP-siRNA组和c-FLIP-siRNA＋TRAIL组c-FLIP的mRNA相对表达量分别是（0.32±0.16）和（0.39±0.48）倍;TRAIL组和c-FLIP-siRNA＋TRAIL组TRAIL的mRNA相对表达量分别是（96.21±1.54）和（87.33±1.66）倍;TRAIL组、c-FLIP-siRNA组及c-FLIP-siRNA＋TRAIL组的抑制率（%）分别为（60.27±1.25）、（11.34±1.74）及（74.91±2.12）。对比阴性对照组的凋亡率（3.12±1.54）,TRAIL组（12.79±2.46）和c-FLIP-siRNA＋TRAIL组（25.50±3.17）组的凋亡率明显增高（P〈0.05）,c-FLIP-siRNA组（6.85±2.82）的凋亡率变化不明显,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：siRNA抑制c-FLIP基因的表达能显著促进TRAIL对乳腺癌细胞MCF-7凋亡的诱导作用。     

黄原胶降解菌BIT-BJ001培养条件的优化

黄原胶在采油工程中有重要的应用,但其难降解性质给采油工程带来很多问题。从塔里木油田胡杨木根部样品中分离得到1株黄原胶降解菌BIT-BJ001,对其发酵条件的研究表明,此黄原胶降解菌最适培养条件为:黄原胶0.3%,酵母粉0.5%,Na+浓度0.8%,Mg2+浓度0.8%,初始pH值为10,温度60℃。菌种BIT-BJ001降解黄原胶的能力与发酵时间、发酵液中还原糖浓度有关,发酵96 h,黄原胶降粘率达到最高,发酵液中还原糖浓度过高,将抑制菌株对黄原胶的降解。     

pH值及金属离子对樟树果实红色素吸收光谱的影响

以樟树果实为材料,运用800～400 nm光谱扫描分析了pH值、金属离子、加热时间及温度、光照等稳定性因子对樟树果实红色素吸收光谱的影响。结果表明:最大吸收波长是517 nm,酸性条件对色素吸收光谱无明显影响,当pH为8.6的强碱性环境,红色素结构变化,最大吸收峰漂移至402 nm;100℃内,色素性质稳定,当加热时间延长至120 min,最大吸收峰在512.5 nm;红色素耐光性较好,但避光更利于保存;金属离子对红色素吸收光谱的影响强弱为:Fe3+>Al3+>Mg2+>Ca2+>Na+>K+,Fe3+短时内引起色素变色、发生沉淀,最大吸收峰漂移,浓度越高影响越大,Na+、K+对红色素吸收光谱无明显影响。