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将已构建好的表达载体pGEX-4T-2SAK 转化大肠杆菌E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达融合的沙蚕激酶蛋白,通过GST树脂亲和吸附和凝血酶酶切及冷冻干燥等步骤进行分离纯化,用SDS-PAGE分析要重组的目的蛋白及纯化后的蛋白.纯化后的沙蚕激酶经纤维平板法测定具有溶栓活性.冷冻干燥品经SDS-PAGE分析表明达到电泳纯. 相似文献
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筛选鉴定一株产生抑菌活性物质的海洋放线菌 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:分离筛选能够产生抑菌活性物质的海洋放线茵,并进行生理生化和16SrDNA鉴定。方法:用分离培养基培养海洋放线菌,并筛选出能够产生抑菌活性物质的菌株,对所筛选菌株的形态特征、生理生化特性进行鉴定分析;采用通用引物27F、1492R扩增该菌株的16SrDNA,对测序结果进行分析;采用Neighbor—Joining(N—J)法构建系统发育进化树。结果:筛选到一株对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌具有较强抗性的海洋放线菌F1,该菌株好氧,中度嗜盐,在高氏I号培养基上呈白色绒粉状,16SrDNA序列比对表明该菌株与田无链霉菌(Streptomyces tanashiensis)NR043369的相似度为99%。结论:筛选到的菌株F1是一株海洋来源的放线菌,与田无链霉菌NR043369的同源性较高,可能属海洋链霉菌属,对金黄色葡萄球菌等病原菌具有较强的抑菌活性。 相似文献
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目的:有机磷农药和杀虫剂广泛应用于众多国内和国外生产的,其数量已超过100种。大量使用的有机磷农药会增加农业生产,而且还造成了不可估量的环境污染。研究降解敌敌畏的微生物,为微生物以降低产品敌敌畏农药残留,恢复敌敌畏污染土壤中的研究奠定基础。方法:本文从种植蔬菜的温室大棚的土壤中分离了一株降解O,O-二甲基-O-(2,2-二氯乙烯基)磷酸酯(敌敌畏)的细菌,根据该菌的形态学、生理生化特征及16S rDNA序列比对。结果:该菌鉴定为荧光假单胞菌(菌株P)。该菌的最适生长温度为27℃,其培养基的最适初始pH为7.0,4天内该菌可将培养液中61.24%的降解。结论:本实验从蔬菜大棚的土样中筛选出一株能降解敌敌畏的菌株,并鉴定为荧光假单胞菌。本研究将为基于微生物以降低产品敌敌畏农药残留,恢复敌敌畏污染土壤中的研究打下基础。 相似文献
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用PCR的方法克隆出了编码蓝细菌Synechococcussp.PCC7002FNR中FNR区的基因petHL,克隆到达载体pET3a上,转化大肠杆菌BL21(DE3)后实现了大量表达。重组FNR区(rFNRD)经DEAESephdexA50离子交换层析及SephadexG100凝胶层析得到大量的电泳均一的rFNRD。N末端氨基酸序列分析表明,表达产物确为petHL所编码。且起始Met翻译后未被除去。rFNRD与rFNR的吸收光谱相同,其黄递酶活性的最适pH和最适温度也相同。rFNRD能在体外催化电子从P700到NADP+的传递 相似文献
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铁氧还原白-NADP^+氧还酶(FNR)是光合电子传递中的关键酶之一。蓝细菌Synechococcus sp.PCC7002中编码FNR的petH基因被克隆到表达载体pET-3d上,在大肠杆菌中得到了高效表达,其表达量占大肠杆菌总蛋白的505%以上。高效表达的产物以可溶性和包含体两种形式存在。可溶性部分具有FNR的酶活性,在经过离子交换和凝胶层析后产生了电泳纯的FNR。包含体形式的部分经6.7mo 相似文献
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冬瓜的果肉中发现了丰富的蛋白水解酶.用硫酸铵将冬瓜果肉汁分级盐析,得到粗酶液.再经DEAE-Sepharose FF离子交换层析和Superdex-75柱层析等步骤得到一种电泳纯的冬瓜蛋白酶.SDS-PAGE测得其分子量为64 kDa.以酪蛋白做底物时,该酶的最适反应温度为70℃,最适作用pH为6.5,在pH 4.5~10.5,40~70℃范围内较稳定.PMSF强烈抑制该蛋白酶的活性.另外,Hg~(2+)对该酶有强烈的抑制作用,Mn~(2+)离子对其有保护作用,Zn~(2+)、Ca~(2+)和Cu~(2+)等离子对其活性没有影响. 相似文献
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目的:在大肠杆菌中分泌表达重组纤维蛋白的C-末端序列,并检测其抗原性。方法:采用PCR技术扩增了减蛋综合症病毒(EDSV)纤维蛋白C-末端的编码基因,并将其克隆到组成型分泌表达载体pUC18ompAcat上构建pUC18ompA-EDS。将该重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株构建工程菌,培养工程菌以表达目的蛋白。结果:SDS-PAGE分析表明,纤维蛋白C-末端在大肠杆菌中成功实现了表达,且部分重组蛋白分泌到了周质空间和胞外的培养基中,Ni2+-NTA树脂分离纯化后,Western blotting对其免疫原性的分析表明,重组蛋白可与鸡抗EDSV血清发生特异反应。结论:说明获得的纤维蛋白的C-末端具有明显的抗原性,该研究对于开发预防EDSV的基因工程疫苗的研究具有一定参考作用。 相似文献