洋葱鳞茎内表皮细胞中的微管

用超薄切片和原生质体负染的方法,在电镜下观察到洋葱鳞茎内表皮细胞周质微管的存在。其出现时间、分布状况以及排列形态,基本上与考马斯亮蓝染色法观察到的网状结构物相一致。讨论了包被囊泡和微管组织中心可能的作用。     

低温胁迫诱导玉米根尖细胞凋亡的形态和生化证据

近来体外培养细胞体系研究的结果表明,一定条件的低温胁迫可导致植物细胞凋亡。本文利用ＤＮＡ梯状图谱（ＤＮＡｌａｄｄｅｒｉｎｇ）以及染色体涂片的ＴＵＮＥＬ（ｔｅｒｍｉｎｄａｌ ｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｙｌ ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｄＵＴＰｎｉｃｋ ｅｎｄ－ｌａｂｅｌｉｎｇ）原位检测,从原位以及生化水平和对低温胁迫下的玉米根尖细胞死亡作了研究,形态和生化方面的语气表明,同体外一样,     

快速诱导细胞凋亡及检测方法研究

目的：探讨Ca2＋和Na＋诱导细胞凋亡的最佳浓度及时间,并用甲基绿一派诺宁染色法检测凋亡细胞的形态变化。方法：分别用不同浓度梯度及时间梯度的Ca2＋和Na＋胁迫处理洋葱鳞茎内表皮细胞,得诱导的最佳浓度及时间;用甲基绿一派诺宁染色法检测诱导凋亡的洋葱鳞茎内表皮细胞、大蒜根尖细胞和鸡血红细胞的形态特征变化。结果：诱导处理的最佳Ca2＋和Na＋浓度为0．4mol／L,最适时间约为8h,且CaCl2的诱导效果较NaCl好;经甲基绿一派诺宁染色,洋葱鳞茎内表皮细胞、大蒜根尖细胞、鸡血红细胞凋亡细胞的细胞核均呈蓝紫色,细胞质呈红色。结论：找出了诱导细胞凋亡的最适Ca2＋和Na＋浓度和时间,并检测到细胞凋亡。     

洋葱内表皮细胞中的网状结构物

使用 Triton 抽提和卡马氏亮蓝染色方法,在洋葱鳞茎内表皮细胞中观察到网状结构物的存在。秋水仙素和细胞松弛素 B 的处理,进一步区分出两种不同的网状结构:近质膜较细的网状结构能被秋水仙素破坏;核周围与核成切线状结合的较粗的网状结构,经细胞松弛素 B 处理后,其形象更为突出。本文讨论了卡马氏亮蓝方法所揭示的带壁细胞的网状结构物。     

观察洋葱表皮细胞实验的改进

在实验过程中,教师可以想办法培养学生的竞争意识与创新意识。竞争意识的培养可以通过组间或个人间进行比赛的形式获得,如比比谁先观察到玻片标本上的东西。创新意识的培养主要体现在实验的设计方面,不拘泥于书本上的方案,根据现有条件重新设计方案。在此过程中,通过评选最佳方案又可以培养学生的竞争意识。诸如此类的情感教育,完全可以让学生全面体会到实验教学的功效,在情感的指引下唤起学生内部的学习动机,巩固实验的浓厚兴趣。     

洋葱鳞茎表皮Actin细胞骨架的Rh—Ph荧光和光学显微镜观察

洋葱鳞茎内表皮细胞经Triton X-100处理和多聚甲醛固定之后用Rh-Ph(Rhodamine-Phalloidin)染色,细胞质内可见较丰富的、直径为100—300nm的F-actin束。较粗的F-actin束沿细胞的长轴平行排列,并纵裂成较细的“分枝”,纵裂成的分枝又纵裂成更细的“分枝”。各种大小的F-actin束相互交织在一起构成一个三维的纤丝网络,并且与细胞膜、细胞核和其它细胞器相连。经同样方法处理和固定的细胞用考马斯亮兰R_(250)(Coomassie brilliant blue R_(250))染色之后,细胞质内可见直径为200—300nm的纤丝,形态特征和排列方式和上述在荧光显微镜下看到的F-actin束相同。本研究结果表明洋葱鳞茎内表皮的细胞骨架包含较丰富的F-actin系统;Pena的考马斯亮兰染色法(1980)所显示的结构主要代表F-actin束。     

盐胁迫诱导的植物细胞凋亡--植物抗盐的可能生理机制

近来的研究表明,一定条件的盐胁迫可导致植物细胞程序性死亡。本文利用DNALaddering、石蜡切片原位检测以及染色体涂片原位检测,从组织、细胞以及DNA等多个方面对盐胁迫下的玉米、水稻和烟草根尖细胞死亡作了研究,形态特别是生化方面的证据表明盐胁迫诱导的植物细胞凋亡可能在植物界具有一定的普遍性。但各个物种之间有一定差异。本实验结果对盐胁迫下的植物生理机制提供了新的研究思路。同时,我们还对基于染色体制片和石蜡切片的原位检测方法进行了比较和讨论。我们认为,基于染色体制片的原位标记技术适合于定性和定量检测单个细胞的凋亡,具有一些石蜡切片所不可及的优点。     

低温胁迫诱导玉米根尖细胞凋亡的形态和生化证据

近来体外培养细胞体系研究的结果表明 ,一定条件的低温胁迫可导致植物细胞凋亡。本文利用DNA梯状图谱 (DNAladdering)以及染色体涂片的TUNEL(terminaldeoxynucleotidyltransferase mediateddUTPnickend labeling)原位检测 ,从原位以及生化水平对低温胁迫下的玉米根尖细胞死亡作了研究 ,形态和生化方面的证据表明 ,同体外一样 ,低温胁迫也能诱导体内植物细胞凋亡。同时对低温胁迫下植物细胞凋亡的形态及生化变化特征和变化次序做了初步观察。实验结果对植物抗低温的生理机制提供了新的研究思路     

镉离子诱导BA/F3β细胞发生奇特的细胞凋亡

细胞凋亡一般都伴随有ＤＮＡ 片段化, 活性氧含量增加, 并能被过量的Ｂｃｌ２ 所抑制。以ＢＡ／Ｆ３β细胞为模型, 利用ＭＴＴ 检测、Ｈｏｃｈｅｓｔ 染色以及透射电镜检测等技术却发现, 镉离子虽然可以诱导该细胞凋亡, 但是这种凋亡没有ＤＮＡ 片段化, 也没有活性氧含量增加。此外, 过量Ｂｃｌ２ 对这种凋亡也没有保护作用。因此, 可以确认镉离子诱导ＢＡ／Ｆ３β细胞发生了奇特的细胞凋亡。     

活性氧诱导细胞凋亡

细胞凋亡是细胞主动的衰老和死亡方式。细胞凋亡过程极其复杂,其生化机制还不十分清楚。用活性氧如H_2O_2、ONOO及脂质过氧化物等可直接诱导某些细胞发生凋亡,抗氧化剂对细胞凋亡有抑制作用。细胞内产生活性氧的部位主要是线粒体电子传递链、黄嘌呤—黄嘌呤氧化酶途径、磷脂酶A_2激活的花生四烯酸代谢途径及精氨酸-NO合成酶途径。外源性活性氧或通过内源性活性氧的生成,导致细胞内氧化还原状态的失衡,诱导某些基因的表达,引起凋亡。     

顺铂诱导非洲绿猴肾细胞凋亡模型的建立

目的：建立常见凋亡诱导剂顺铂（Cisplatin）诱导非洲绿猴肾细胞（Vero）凋亡的模型,为进一步研究抗凋亡基因在细胞凋亡中的分子机理打下基础。方法：分别以不同浓度的顺铂处理Veto细胞48h,用噻唑蓝（MTT）比色法、Gimesa染色、流式细胞术检测,观察处理后细胞的生长活力和凋亡情况。结果：以未处理的细胞作为对照组,1、2、3、4,5μg／mL的顺铂处理的Vero细胞生存率分别为（79．02±6．10）％、（68．84±4．42）％、（56．66±4．07）％、（46．83±3．76）％、（29．04±5．93）％（P〈0．01）;经顺铂诱导后细胞形态学发生明显改变,出现膜小泡和凋亡小体形成等凋亡细胞特征;流式细胞仪检测,0、1、2、3、4、5μg／mL的顺铂处理的Vero细胞后凋亡率分别为1．66％±0．19％、16．65％±1．26％、24．82％±1．03％、36．22％±1．04％、48．49％±1．24％、43．34％±1．17％（P〈0．01）。结论：本实验成功建立顺铂诱导非洲绿猴肾细胞凋亡模型,将有助于进一步探讨目的基因在Vero细胞凋亡作用的的分子机制。     

顺铂诱导非洲绿猴肾细胞凋亡模型的建立

目的:建立常见凋亡诱导剂顺铂(Cisplatin)诱导非洲绿猴肾细胞(Vero)凋亡的模型,为进一步研究抗凋亡基因在细胞凋亡中的分子机理打下基础。方法:分别以不同浓度的顺铂处理Vero细胞48h,用噻唑蓝(MTT)比色法、Gimesa染色、流式细胞术检测,观察处理后细胞的生长活力和凋亡情况。结果:以未处理的细胞作为对照组,1、2、3、4、5μg/mL的顺铂处理的Vero细胞生存率分别为(79.02±6.10)%、(68.84±4.42)%、(56.66±4.07)%、(46.83±3.76)%、(29.04±5.93)%(P<0.01);经顺铂诱导后细胞形态学发生明显改变,出现膜小泡和凋亡小体形成等凋亡细胞特征;流式细胞仪检测,0、1、2、3、4、5μg/mL的顺铂处理的Vero细胞后凋亡率分别为1.66%±0.19%、16.65%±1.26%、24.82%±1.03%、36.22%±1.04%、48.49%±1.24%、43.34%±1.17%(P<0.01)。结论:本实验成功建立顺铂诱导非洲绿猴肾细胞凋亡模型,将有助于进一步探讨目的基因在Vero细胞凋亡作用的的分子机制。     

口蹄疫病毒诱导宿主细胞凋亡的研究

本文报道了口蹄疫病毒（Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV）在体外诱导PK－15细胞凋亡的研究结果,采用Hoechst33258荧光探针、DNA凝胶电泳、脱氧核糖核酸转移酶介导的制品末端标记（TUNEL）技术均检测到了典型的细胞凋亡,结果显示：使用感染性滴度为4.8lgTCID50/mL的口蹄疫病毒感染PK－15细胞,在培养32h后,荧光探针检测呈现典型的凋亡细胞核固缩和梅花状碎裂核,并伴随有凋亡小体出现,调亡率约为20％;DNA凝胶电泳显示ladder梯带;末端标记检测到强绿色荧光标记物结合于凋亡细胞核上。研究结果提示：口蹄疫病毒可以在体外诱导宿主细胞凋亡,细胞凋亡是其致细胞病变死亡的重要途径之一。     

Methylprednisolone and Indomethacin Inhibit Oxidative Stress Mediated Apoptosis in Rat C6 Glioblastoma Cells

Glioblastoma patients receive anti-inflammatory agent for alleviation of vasogenic edema and pain prior to surgery, radiotherapy, and chemotherapy. Oxidative stress is an important mechanism of action of some chemotherapeutic agents in the treatment of glioblastoma. So, we examined the modulatory effects of methylprednisolone (MP, a steroidal anti-inflammatory agent) and indomethacin (IM, a non-steroidal anti-inflammatory agent) on apoptosis in rat C6 glioblastoma cells following oxidative stress with hydrogen peroxide (H₂O₂). Exposure of C6 cells to 1 mM H₂O₂ for 24 h caused significant amounts of morphological and biochemical features of apoptosis. Expressions of Bax and Bcl-2 at mRNA and protein levels were altered resulting in an increase in Bax : Bcl-2 ratio in apoptotic cells, which also exhibited overexpression of 80 kDa calpain and an increase in calpain-cleaved 145 kDa α-spectrin breakdown product. Immunofluorescent and propidium iodide labeling detected caspase-3-p20 fragment in apoptotic cells, indicating activation of caspase-3 as well. Treatment of cells with 1 μM MP or 10 μM IM alone did not induce apoptosis. Pretreatment (1 h) with either 1 μM MP or 10 μM IM significantly inhibited H₂O₂ mediated apoptosis in C6 cells. Thus, pretreatment of glioblastoma with an anti-inflammatory agent, either steroidal or non-steroidal, may compromise the action of a chemotherapeutic agent that mediates therapeutic action via oxidative stress.     

Neuronal Apoptosis Induced by Endoplasmic Reticulum Stress

Apoptosis is a conserved active cellular mechanism occurring under a range of physiological and pathological conditions. In the nervous system, apoptosis plays crucial roles in normal development and neuronal degenerating diseases. Various deleterious conditions, including accumulation of the mutant proteins in the endoplasmic reticulum (ER) and inhibition of ER to Golgi transport of proteins, may result in apoptosis. In this study, we examined the downstream events of apoptosis in differentiated PC 12 cells under ER stress induced by brefeldin A, an inhibitor of ER to Golgi protein transport. Activation of NF-B and degradation of I-B were observed within 2 hours, followed by up-regulation of GRP78 protein level in treated cells. Caspase-12 only appeared around 24 hours after brefeldin A treatment, coincident with cell nuclei fragmentation. These results suggest that neuronal apoptosis may be induced by ER stress through a NF-B and caspase related pathway.     

砷暴露诱导人肝细胞氧化应激过程中NADPH氧化酶作用机制

目的：探讨砷暴露诱导细胞氧化应激的分子机制。方法：采用人正常肝细胞进行亚砷酸钠和砷酸钠的暴露处理,并设相应对照组,采用SOD模拟物MnTMPyP和还原型谷胱甘肽（reducedglutathione,GSH）预处理,检测细胞超氧阴离子（02。）和细胞整体ROS的水平。WestemBlot方法检测细胞氧化／抗氧化重要酶微粒体谷胱甘肽硫转移酶（microsomalglutathioneS-transferase-l,Mgst．1）、半胱氨酸双加氧酶l（cysteinedioxygenasel,Cd01）和NADPH氧化酶的催化亚基NOX4的表达。针对NADPH氧化酶,采用特异性抑制剂（diphenyleneiodoniumchloride,DPI）进行预处理,观察对砷暴露引起的细胞ROS水平及细胞凋亡的影响。结果：砷暴露能够显著诱导细胞超氧阴离子的产生,提高细胞整体ROS水平,其中三价砷（亚砷酸钠,A矿）诱导氧化应激作用显著强于五价砷（砷酸钠,As5＋）。亚砷酸钠能够显著提高NOX4的表达。针对NADPH氧化酶的抑制剂DPI能够显著抑制砷暴露引起的细胞ROS水平升高以及细胞凋亡的增加。结论：NADPH氧化酶是砷暴露诱导人肝细胞的作用靶点,砷能够通过NADPH氧化酶产生大量超氧阴离子,提高ROS水平,造成氧化应激,诱导人正常肝细胞凋亡。     

九节龙皂苷诱导胶质瘤SHG-44细胞凋亡的实验观察

目的：探讨九节龙皂苷对胶质瘤SHG-44细胞潜在的治疗作用及其机制。方法：用四基偶唑蓝（MTT）法检测5、7．5、10、12．5、15、20、40、80mg／L九节龙皂苷作用6、12、24、72h对人胶质瘤SHG-44细胞活性的影响和细胞流式术检测SGH-44细胞调亡情况;Hoeehst33258荧光染色法观察细胞形态的变化;琼脂糖凝胶电泳检测SHG-44细胞DNA的完整性。结果：九节龙皂苷明显抑制SHG-44细胞生长活性呈浓度-时间依赖性,并诱导细胞发生明显的凋亡,细胞核发生浓聚边集,DNA呈凋亡特异性“梯状”分布。结论：九节龙皂苷明显抑制SHG-44细胞的生长活性,能引起胶质瘤细胞大量凋亡,具有显著的抗肿瘤作用。     

HSV—2阴道感染并诱导小鼠阴道粘膜上皮细胞凋亡

最近的报道指出,某些病毒有诱导体外细胞凋亡的作用,借以限制病毒的扩散。为探讨ＨＳＶ－２在体内诱导细胞凋亡的效果及其形态学特点,用 ＨＳＶ－２ ３３３株感染小鼠阴道,于感染后不同天数处死动物,取其阴道,固定于１０％中性福尔马林,ＴＵＮＥＬ末端标记染色显示凋亡的细胞,光镜下进行原位观察。结果显示：感染后的第１天粘膜上皮内即出现大量的凋亡细胞,第２天至１１天凋亡细胞的数量及在上皮内的分布范围达最高水平。早期的凋亡细胞见于感染后所有标本,其核染色质形态及分布似正常细胞,但它被ＴＵＮＥＬ标记染成棕黄色;晚期的凋亡细胞亦见于所有标本,其胞核缩小,染色质浓缩并在核周边集聚,核中心空化。载有凋亡细胞的上皮在阴道粘膜上分布很广,最广的可占全阴道上皮的２／３。同时可见ＨＳＶ．２引起的上皮细胞坏死及疱疹形成,二者均由凋亡细胞包围。凋亡细胞不断地由上皮表面脱落至阴道,未见凋亡小体及吞噬现象。结果提示,ＨＳＶ－２ ３３３株阴道感染可同时诱导细胞坏死及凋亡,细胞凋亡可能在限制病毒产生子代及限制感染区域扩展起重要作用。     

黑色素抑制流感病毒诱导宿主细胞凋亡

报道了流感病毒体外诱导狗肾细胞系（ＭＤＣＫ）细胞凋亡的检测结果,对黑色素选择性抑制流感病毒诱导细胞凋亡的可能性进行了探讨,同时与临床上常用的抗病毒药物病毒唑的效果进行比较。结果显示：病毒感染６ｈ后,即可观测到宿主细胞核固缩现象、ＤＮＡ凝胶电泳出现特征性的梯状图谱,感染１２ｈ后,细胞核可见明显的裂解;并且流感病毒株Ａ１／京防８６１诱导细胞凋亡能力强于Ｂ沪防／９３－１;在２０～１２５μｇ／ｍＬ浓度范围内,黑色素可有效抑制６４个血凝单位（ＨＵ）的流感病毒感染诱导的细胞凋亡而无细胞毒性作用,其抑制效率类似病毒唑。初步研究结果表明：黑色素抗流感病毒诱导细胞凋亡机理与其阻断病毒吸附侵入宿主细胞有关     

Hyaluronan Synthase 2 Protects Skin Fibroblasts against Apoptosis Induced by Environmental Stress

A balanced turnover of dermal fibroblasts is crucial for structural integrity and normal function of the skin. During recovery from environmental injury (such as UV exposure and physical wounding), apoptosis is an important mechanism regulating fibroblast turnover. We are interested in the role that hyaluronan (HA), an extracellular matrix molecule synthesized by HA synthase enzymes (Has), plays in regulating apoptosis in fibroblasts. We previously reported that Has1 and Has3 double knock-out (Has1/3 null) mice show accelerated wound closure and increased numbers of fibroblasts in the dermis. In the present study, we report that HA levels and Has2 mRNA expression are higher in cultured Has1/3 null primary skin fibroblasts than in wild type (WT) cells. Apoptosis induced by two different environmental stressors, UV exposure and serum starvation (SS), was reduced in the Has1/3 null cells. Hyaluronidase, added to cultures to remove extracellular HA, surprisingly had no effect upon apoptotic susceptibility to UVB or SS. However, cells treated with 4-methylumbelliferone to inhibit HA synthesis were sensitized to apoptosis induced by SS or UVB. When fibroblasts were transfected with Has2-specific siRNA that lowered Has2 mRNA and HA levels by 90%, both Has1/3 null and WT cells became significantly more sensitive to apoptosis. The exogenous addition of high molecular weight HA failed to reverse this effect. We conclude that Has1/3 null skin fibroblasts (which have higher levels of Has2 gene expression) are resistant to stress-induced apoptosis.