流行性出血热地鼠肾细胞灭活疫苗人体试用细胞免疫反应观察

观察了20位志愿者在接种试验性流行性出血热(EHF)地鼠肾细胞(GHKC)双价灭活疫苗后的细胞免疫反应,并以其体液免疫反应作对照观察。用淋巴细胞转化试验测定细胞免疫水平。结果首针疫苗接种后42天和56天,特异性刺激指数(SSI)和非特异性刺激指数(NSI)均较免疫前显著增高(P_(SSI)<0.001;P_(NSI)<0.02),免疫后SSI累计阳转率为100％,NSI累计阳转率为60％,免疫后6个月二者均降低至正常水平。免疫后56天测定抗体,荧光抗体阳转率为100％;微量感染性中和试验表明,针对家鼠型病毒L99株中和抗体阳转率为95％,而针对野鼠型病毒JR株阳转率为65％。     

EHF灭活疫苗扩大人体试用的效果观察

流行性出血热(EHF)沙鼠肾细胞灭活疫苗,经75名自愿者扩大试用,未发现不良反应。中和抗体阳转率达70.6～96.7％,4℃保存14个月的疫苗,仍有较高的中和抗体阳转率,再一次证明此疫苗是安全有效的,且有良好的稳定性。接种程序为0、7、28天内三次免疫与0、28、60天内三次免疫无明显差别。皮下接种佐剂苗产生的中和抗体滴度高于肌肉接种的佐剂苗和疫苗。     

流行性出血热病毒沙鼠肾细胞培养灭活疫苗免疫家兔的抗体反应及保护试验

利用自流行性出血热(EHF)病人血液中分离的EHF病毒浙10株,感染长爪沙鼠肾单层细胞,经培养后,按流行性乙型脑炎的生物制品法规要求研制成灭活疫苗。取1ml经肌肉免疫家兔,6天后即可在血液中检出荧光抗体,至第14～21天为最高峰,荧光抗体效价可达320～2560。经活EHF病毒攻击,有明显的保护作用,保护率达90％以上。疫苗经1:10或1:30稀释后免疫家兔,荧光抗体阳转率仍达100％,但抗体滴度明显降低。肌肉接种优于皮下接种。本研究证明,甲醛灭活EHF病毒可破坏血凝素活性,从而影响疫苗血凝抑制抗体的产生,可能也会影响中和病毒的能力。     

流行性出血热灭活疫苗人体试验的反应观察

由流行性出血热(EHF)病毒浙_(10)株感染沙鼠肾细胞,经0.05％β-丙内酯灭活研制成的EHF灭活疫苗,于4℃放置7个月后,对10名志愿者免疫三针(0天、7天、28天各注射1ml)。结果免疫者的局部和全身均无任何副反应。首针免疫后第28天,血清用反向被动血凝抑制试验(RPHIA)、ELISA和间接免疫荧光试验(IFA)检测EHF抗体,分别有9人、9人和8人阳转,第42天,血清用三种方法检测抗体均全部阳转。空斑减少中和试验(PRNT)于第28天有4人阳转,第42天有9人阳转。上述结果表明,此疫苗对人体有较好的的安全性和免疫原性。     

流行性出血热(EHF)Ⅱ型疫苗生产中病毒株及原液的质控检测

流行性出血热Ⅱ型纯化疫苗(即亚单位疫苗)系用Ⅱ型Hautaan病毒R_(22)SM株感染乳鼠脑精制而成。为了保证疫苗生产和质量控制,我们对病毒株的繁殖量,感染度,毒力及纯毒株的中和指数作了实验性检测,依据检测的结果:用Ⅱ型EHF毒株R_(22)SM株乳鼠脑内接种感染后的第4或5天病毒在脑内开始出现,而大量繁殖则在接种感染后第7～8。其单一鼠脑内病毒繁殖量(病毒滴度)和制成单一收获原液中病毒含量基本相一致;脑内病毒滴度log LD_(50)为9.7;原悬液中病毒滴度log ID_(50)为11.2,纯毒试验的特异性中和指数为1378。如上所述,各种实验检测结果完全符合EHF疫苗生产规程指标要求。     

鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗 (DHAV-SH和DHAV-FS株) 的制备和评价

我国鸭甲型肝炎病毒(DHAV)的快速变异及广泛流行给养鸭业造成了较大的经济损失,为研究鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗(DHAV-SH和DHAV-FS株)的制备和评价方法,首先对我国多个鸭场进行血清型流行病学分析,从201株DHAV-1、38株DHAV-3中筛选出6株毒力较强的DHAV,验证了DHAV-1和DHAV-3为我国流行优势株,并对6株DHAV进行ELD50和LD50测定,筛选疫苗候选株后经传代确定疫苗毒种,选取F5代鸭胚胚体研磨液作为疫苗毒种,经甲醛灭活后制成3批水包油包水(W/O/W)型乳剂二价灭活疫苗实验室制品。通过安全性试验、抗体中和试验、攻毒保护及免疫交叉保护试验发现:疫苗安全性良好,雏鸭免疫后第7天可以检测到DHAV中和抗体,第14-21天的攻毒保护率为90%-100%,免疫持续期可达5周以上,DHAV-SH和DHAV-FS之间的交叉保护为20%-30%。研究表明本试验研制的鸭病毒性肝炎二价灭活疫苗实验室制品安全且高效,为我国DHAV预防和控制提供了一种新方法和新产品。     

肾综合征出血热Vero细胞疫苗毒种的选育及生物学特性研究

在肾综合征出血热(HFRS)疫苗Vero细胞毒种研制中,将肾综合征出血热(HFRS)病毒PS-6(Ⅰ型)、L99(Ⅱ型)在Vero细胞上连续传代,并对其病毒滴度、免疫原性、传代稳定性等进行检测。结果显示,两株病毒在Vero细胞上传代适应后,病毒滴度达8.5 lgCCID50/m l,免疫原性检查,将病毒灭活制成疫苗免疫家兔的血清中和抗体效价>1:10,其他检测符合规程要求。因此,适应的PS-6(Ⅰ型)和L99(Ⅱ型)毒种可用于制备Vero细胞出血热疫苗。     

肾综合征出血热双价灭活疫苗的研究

为研制包含Ⅰ型和Ⅱ型病毒抗原的肾综合征出血热双价灭活疫苗,以适合全国各出血热疫区使用,通过空斑克隆和终末稀释传代的方法选育了2株出血热Ⅰ型病毒PS-6和JR-C-1。用金黄地鼠肾细胞培养的L99株（Ⅱ型）病毒疫苗,PS-6株病毒疫苗和JR-C-1株病毒疫苗以2：1：1的配伍方式试制三批双价疫苗,结果试制的三批双价疫苗自检和中国药品生物制品检定所复检,各项指标全部合格,疫苗于室温放置3周,37℃放置2周和4℃放置1年、1.5年和2年,效力试验均合格,研制的三批出血热双价疫苗,符合《肾综合征出血热灭活疫苗（双价）试行规程》的要求,疫苗稳定性良好。     

流行性出血热(EHF)双价纯化灭活疫苗——I 期临床观察

根据卫生部药审(91)特申体第02号文件,本品纯化灭活双价疫苗92年完成了Ⅰ期人体反应及血清学效果观察。91001批双价疫苗以0,1,2月和0,14,35天程序免疫,91002批以0,1,2月程序免疫,各接种15人。接种后未出现任何不良反应,与Ⅰ型,Ⅱ型单价疫苗相同,是安全可靠的。两种免疫程序,二针次免疫后皆能产生较高免疫抗体,接种后半年仍保持一定抗体水平。中和抗体(PRNT)均在1∶10～1∶20,ELISA1∶478～1∶549(GMT),阳转率100％,再次证明本型纯化疫苗安全有效,并具有较高免疫活性,本型疫苗也可采用二针次(0,1月),总量2ml免疫。     

各种类型流行性出血热灭活疫苗的免疫性比较研究

本文对三种不同类型的出血热疫苗的免疫性进行了比较研究,其中沙鼠肾细胞疫苗由β—丙内酯灭活不加任何佐剂,地鼠肾细胞和鼠脑提纯疫苗由福尔马林灭活加氢氧化铝佐剂。三种疫苗经抗原量测定结果只有沙鼠肾细胞疫苗能测出较高的血凝素。家兔经三种疫苗免疫二针后只有沙鼠肾细胞疫苗能测出血抑抗体。中和抗体测定的结果亦以该疫苗的抗体反应最好,全部阳转,滴度也最高(1:20—≥320)。对家兔和长爪沙鼠免疫后用野鼠型病毒攻击结果,三种疫苗均有一定的保护作用,但仍以沙鼠肾细胞疫苗的保护力最强。     

流行性出血热灭活疫苗加强免疫效果观察

流行性出血热(EHF)灭活疫苗对初免一年或一年半后的25名志愿者加强免疫1针,未发现局部和全身副反应,可使初免后中和抗体阴性者或初免后阳性转阴者,中和抗体全部阳转,且中和抗体几何平均滴度与初免相比有成倍的增长。表明此疫苗的初免是有效的,即使初免后未检出中和抗体,但对EHF病毒抗原仍具有强烈的回亿反应,因而EHF灭活疫苗加强免疫是十分必要的。     

鸽副黏病毒Ⅰ型(川沙株)攻毒剂量研究

为了确定鸽副黏病毒Ⅰ型灭活疫苗(S-1株)攻毒试验的攻毒剂量。本研究采用SPF鸡胚测定鸽副黏病毒Ⅰ型强毒株(川沙株)E5代的病毒含量,并以不同剂量病毒液分别接种30日龄低抗体幼龄鸽(HI抗体≤2)和120日龄低抗体青年鸽(HI抗体≤2),对试验鸽进行临床症状和病理学检查。结果显示,该病毒株对低抗体鸽有致死作用,最小致死量为102.5 ELD50。因此,为了确保攻毒效果,在鸽副黏病毒Ⅰ型灭活疫苗(S-1株)制造及检验规程中规定:以1 000倍的最小致死量(即105.5 ELD50)作为疫苗免疫效力检验的攻毒剂量。     

地鼠肾原代细胞双价肾综合征出血热疫苗免疫效果的研究

对新近研制成功的地鼠肾原代细胞肾综合征出血热双价疫苗（汉滩型＋汉城型）进行了Ⅱ期临床扩大观察,考核其对人体的安全性和中和抗体反应。将观察人群分别选择在中国南方和北方两个点,每个点接种589人和600人,观察其接种对象的副反应程度和采集血清样品测定其光抗体并以蚀斑减少中和法测定中和抗体,考核疫苗效果。观察结果显示,在观察的253人中分别有6人呈现轻度局部副反应和1人37．5℃以下的低热全身反应,总反应率分别为2．77％（7／253）。IFAT抗体阳转率对I型病毒为94．85％（184／194）,对Ⅱ型病毒为89．69％（174／194）,ELISA抗体阳转率为99．44％（179／180）,GMT1325。PRNT抗体阳转率I型为92．55％（87／94）,GMT10．17,Ⅱ型为93．62％（88／94）,GMT11．08。经过Ⅱ期临床人体观察结果显示,该双价疫苗仅有轻度局部反应和良好的中和抗体应答。证明该疫苗对人体安全,具有较好的免疫原性。     

肾综合征出血热Ⅱ型疫苗(L99株)免疫效果及对Ⅰ型病毒攻击的保护作用

为探讨Ⅱ型肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）疫苗的实际流行病学免疫效果及对姬鼠型ＨＦＲＳ的交叉保护作用,我们选择混合型疫区为研究现场,应用Ⅱ型ＨＦＲＳ疫苗（Ｌ９９株）进行人群接种观察,研究结果表明,该疫苗对以家鼠型为主的混合型疫区具有明显的保护效果,保护率为１００％,接种组家鼠型和姬鼠型ＨＦＲＳ的理论发病数和实际发病数间均具有显著性差异（Ｐ值分别为Ｐ＜０．０５,Ｐ＜０．０１）,由此可见,Ⅱ型ＨＦＲＳ苗（Ｌ９９株）除适合家鼠型疫区外,还可在混合型疫区和姬鼠型疫区推广使用     

流行性出血热病毒在各种鼠类巨噬细胞和人外周血白细胞培养中的增殖

本文证实了流行性出血热病毒(EHF)在体外培养的长爪沙鼠、金黄地鼠、Balb/c小鼠腹腔巨噬细胞和人外周血白细胞及单核细胞中的增殖。沙鼠和地鼠腹腔巨噬细胞对EHF病毒的敏感性要高于Vero-E_6细胞,而Balb/c小鼠腹腔巨噬细胞的敏感性却低于其他三种培养的细胞。野鼠型EHF病毒(A_9株)和家鼠型EHF病毒(R_(22)株)在三种鼠腹腔巨噬细胞中的繁殖能力未见明显差异。在人外周血白细胞中,其单核细胞对EHF病毒(A_9株)的敏感性高于淋巴细胞。病毒感染单核细胞后4天的病毒滴度可达10~(-3.0)。以上结果说明EHF病毒在单核巨噬细胞中能繁殖和释放感染性病毒,这表明单核巨噬细胞在鼠、人体内EHF病毒感染的建立及病毒在体内扩散至各器官过程中可能起很重要的作用,即起其靶细胞和扩散媒介的作用。     

流行性出血热病毒(EHFV)山东地方株特性的研究

本文介绍应用Vero-E_(?)细胞直接从EHF抗原阳性的褐家鼠肺中分离出EHFV-R_(36)株。形态学鉴定符合EHFV,并见到典型的颗粒性EHFV包涵体和大小形态类似的EHFV样颗粒。分离毒株经EHFV单克隆抗体分析,R_(36)株EHFV的抗原谱不同于我国的R_(22)株,它既带有家鼠型R_(22)株相似的抗原决定簇,同时又具有野鼠型抗原决定簇。     

流行性出血热病毒感染金黄地鼠的实验研究

本文证明金黄地鼠对于流行性出血热病毒包括家鼠型和野鼠型毒株均敏感。除口饲外,多途径接种均可使地鼠感染。流行性出血热病毒浙5株10001D_(50)接种3周龄地鼠,五天后即可在肺、脾、肠、肝等多种组织中检出病害抗原,至8—10天达最峰,其中肺最强,抗原持续时间至少50天。接种病毒后10天左右,可在血中检出抗体,后缓慢上升,至第50天达1:1280—1:5120。乳鼠感染EHF病毒后可引起全身播散性感染,病毒抗原可在全身软组织中找到。乳鼠感染强毒株可发病致死,但幼鼠和成鼠不表现症状为健康带毒者。     

两种方法检测接种流行性出血热沙鼠肾细胞灭活疫苗后人体的中和抗体

本文应用空斑减少中和试验(PRNT)和细胞病变中和试验(cPENT)两种方法对出血热沙鼠肾细胞灭活疫苗扩大人体免疫后的血清进行中和抗体水平检测。根据两种方法对总计74人份的免疫后血清检测比较结果,两种方法检测的抗体阳转率和抗体水平(GMT)。CPENT法均高于PRNT法,经统计学处理均有显著性差异。不同免疫组的中和抗体水平比较结果,注射三针的阳转率(n=10,100％)高于两针组(n=10,20—30％);接种加氢氧化铝佐剂疫苗(n=13)较接种不加佐剂的两种疫苗(n=26)的抗体水平高,阳转率为92％—100％GMT为22—69;皮下途径(n=15)和肌肉途径(n=13)注射无明显差别,阳转率分别为87—93％和92—100％,GMT分别为29—46和22—61。以上结果进一步肯定沙鼠肾细胞疫苗的人体免疫性     

森林脑炎中和抗体蚀斑减少试验方法的建立及疫苗免疫人体后抗体检测

为评价森林脑炎疫苗的免疫效果,采用森林脑炎病毒的BHK细胞适应株,以BHK细胞为培养基质,建立了检测森林脑炎中和抗体的蚀斑减少试验方法,并用蚀斑减少法、小鼠法及ELISA法检测了原制森林脑炎灭活疫苗免疫人体后的中和抗体水平;免疫血清为按疫苗免疫程序免疫健康志愿者采血分离而制备。结果表明蚀斑减少法与小鼠法的特异性相近且敏感性较好、简便快速,缩短检测周期,为疫苗流行病学调查及新型疫苗的研究提供了快速的检测方法;原制灭活疫苗人体二针免疫后,人体血清中和抗体阳转率仅30％左右,急需提高现用原制灭活疫苗的质量。     

肾综合征出血热Ⅱ型疫苗（L99株）免疫效果及Ⅰ型病毒攻击的？…

为探讨Ⅱ型肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）疫苗的实际流行病学免疫效果及对姬鼠型ＨＦＲＳ的交叉保护作用，，我们选择混合型疫区为研究现场，应用Ⅱ型ＨＦＲＳ疫苗（Ｌ９９株）进行人群接种观察，研究结果表明，该疫苗对以家鼠型为主的混合型疫区具有明显的保护效果，保护率为１００％，接种组家鼠型和姬鼠型ＨＦＲＳ的理论发病娄笔实际发病数间均具有显著性差异，由此可见，Ⅱ型ＨＦＲＳ苗（Ｌ９９株）除适合有鼠型疫区外，还可在混合