基于酶生物传感器法检测果蔬中毒死蜱残留的提取工艺研究

使用自主研制的酶生物传感器型农残检测仪进行农药残留检测,通过筛选可测果蔬种类、调整优化样品处理大小、样品加标后静置时间、样品与提取液比例和振荡提取速度,提高检测用酶对农药的抑制敏感性,从而达到降低农药检出限、提高回收率的目的。主要设置的参数如下:样品处理方式分为打碎、切碎(切成1 cm×1 cm和1. 5 cm×3 cm大小);加标后静置时间为5 min、15min、30 min、60 min和90 min;料液比为1∶1、1∶2. 5、1∶5、1∶7. 5和1∶10;振荡提取速度为0 r/min、110 r/min、190 r/min和225 r/min;主要测定的农药为毒死蜱。结果发现,不同果蔬品种对固定化酶的抑制率影响小,样品大小为1 cm×1 cm、加标后静置时间为5 min、料液比为1∶1、加入提取剂后的振荡速度为190 r/min为最佳前处理方式组合。酶生物传感器农残检测仪能够满足快速检测果蔬中有机磷农药残留的需要。     

碎米荠及富硒产品中无机硒提取方法的建立

采用不同浓度的HCl、NaOH、KH_2PO_4、NaHCO_3、KCl、流动相及超纯水作浸提液提取富硒产品中的无机硒后,用高效液相色谱-原子荧光光谱(HPLC-AFS)联用仪测定Se(IV)和Se(VI),并对浸提时间、浸提温度、振荡频率、液料比等条件进行系统研究,建立了富硒植物碎米荠及富硒产品中无机硒的提取方法:无机硒的最佳提取剂为0.1mol/L KH_2PO_4溶液,提取方法为:称取样品0.10g于离心管中,加入0.1mol/L KH_2PO_4溶液至3mL,于70℃、1 500r/min条件下振荡提取30min,以3 000r/min转速离心10min,0.45μm滤膜过滤后上机测定,样品加标回收率为86.14%~117.60%,Se(IV)和Se(VI)均能定性定量检测,为富硒产品中无机硒测定方法标准的制定奠定了基础。     

超重力对谷子种子萌发及生理生化特性的影响

以"农大8号"和"长谷1号"2个谷子品种为试验材料,分别以3 000 r/min、5 000 r/min、7 000 r/min进行离心30 min、60 min处理,研究超重力处理对谷子种子发芽指标、萌发活力的影响以及萌发期丙二醛含量、过氧化物酶活性、超氧化物歧化酶活性的变化。结果表明,中低速离心处理能促进种子萌发、根长及鲜质量,各处理的芽长均下降;两品种各处理组的丙二醛(MDA)含量都低于对照,在处理7 000 r/min、30 min下达到最低;除了在3 000 r/min、60 min处理下长谷1号的POD活性稍有下降外,其余各处理两个品种的POD活性均高于对照,长谷1号的POD活性在5 000 r/min、30 min下达到最大值,农大8号的POD活性在处理时间60 min、转速(3 000 r/min、5 000 r/min)下达到最大;两品种的SOD活性均高于对照组,且在中高速(5 000 r/min、7 000 r/min)转速下SOD活性达到最大。超重力处理可提高谷子萌发期的抗逆性,以5 000 r/min处理时间30 min、60 min为宜。     

大鼠肠内容物细菌基因组DNA提取方法的比较

目的比较两种肠内容物前处理和两种提取方法对清洁级SD大鼠肠内容物细菌基因组DNA提取效率。方法分别选用PBS多次离心漂洗、液氮破细胞两种前处理方法和酚/氯仿抽提、试剂盒过柱法两种提取方法进行组合分析,对4份肠内容物和16份含金黄色葡萄球菌肠内容物进行随机提取。结果大鼠肠内容物细菌基因组DNA含量和纯度测定结果显示,与PBS反复离心相比,液氮研磨前处理能显著提高大鼠肠内容物基因组DNA。荧光定量PCR表明,液氮研磨前处理较PBS反复离心能更好地收集细菌基因组DNA,其Ct值最低。结论研究结果表明,采用液氮研磨试剂盒法在大鼠肠内容物DNA提取中是较为优良的方法,该方法为建立实验动物中微生物的定量PCR检测方法打下了基础。     

多孔板-MTT比色法评价植物和微生物代谢产物的抗真菌活性

多孔板-MTF比色法测定植物和微生物代谢产物对真菌抑制活性的步骤为:在多孔板的每孔中依次加入浓度为105孢子/mL的供试真菌孢子悬液90μL,不同浓度的药液10 μL.25℃暗培养48 h,然后每孔中加入8mg/mL的MTT溶液10μL,继续培养10 h后,离心去上清,加入DMS0 150 μL,振荡30 min,离心后上清液在510nm测定吸光值.采用上述条件测定了白屈菜红碱对稻瘟病菌和西瓜枯萎病菌的MIC值分别为80和1.5μg/mL,IC50值分别为21.99和0.78 μg/mL;Diepoxinζ对稻瘟病菌的MIC和IC50值分别为200和96.21 μg/mL.多孔板-MTT比色法为快速有效地筛选和评价植物和微生物抗真菌活性成分创造了条件.     

离心力对制备沉积物间隙水中化合物浓度的影响

研究了离心力对间隙水化合物浓度的影响.将腐殖质掺入东湖沉积物样品,按泥:水=1:4(体积)比室温下静置30d,随后掺入铜,泥:水=1:4(体积)比静置10d,得到总有机碳含量在1.47%-.72%、铜含量在120-2700mg/kg(干重)的试验沉积物样品,用离心法制备沉积物中的间隙水.离心参数为3000r/min、200r/min、9000r/min、1000r/min和12000r/min,4 ℃下离心20min.间隙水中化合物浓度分析表明,随离心力升高,间隙水中铜、铁、总有机碳(TOC)含量逐渐降低,钙的含量略有增加,而锰的含量不受离心力变化的影响.根据上述分析结果,确定在腐殖质对沉积物中铜的毒性影响研究中,制备沉积物间隙水的适宜离心条件为:12000r/min、4℃下离心20min.       

银胶菊叶和花提取物对南方根结线虫的毒杀活性比较

为进一步明确银胶菊(Parthenium hysterophorus L.)的杀线虫活性,对银胶菊叶和花的不同溶剂提取物、甲醇提取物的不同萃取物以及甲醇提取物碱水层的不同极性组分对南方根结线虫(Meloidogyne incognita Chitwood)的杀虫活性进行了检测,并对不同提取物、萃取物和萃取组分进行了生物碱的定性分析.结果表明:银胶菊叶和花的蒸馏水、甲醇、乙酸乙酯和石油醚提取物的得率分别为24.5％和20.3％、19.6％和10.9％、6.8％和7.7％、2.0％和2.7％,其中,叶和花的蒸馏水和甲醇提取物的杀线虫活性均较强,而石油醚提取物的杀线虫活性最弱.用质量体积分数1.0％和0.5％的叶和花蒸馏水提取物分别处理24和48 h后试虫的校正死亡率均达到100.00％;用质量体积分数1.0％和0.5％的叶和花甲醇提取物处理48 h,试虫的校正死亡率均大于90％.叶和花甲醇提取物的碱水层、三氯甲烷Ⅰ层和Ⅱ层萃取物均具有一定的杀线虫活性,其中,用质量体积分数1.0％的花和叶碱水层萃取物以及花的三氯甲烷Ⅰ层萃取物分别处理48 h,试虫的校正死亡率均为100.00％,而三氯甲烷Ⅱ层萃取物的杀线虫活性最弱.银胶菊叶和花甲醇提取物碱水层的11个不同极性组分(A1～A11)也表现出不同程度的杀线虫活性,其中,用质量体积分数0.2％和0.1％花的A2[溶剂为V(三氯甲烷)∶V(甲醇)=10∶1]和A7[溶剂为V(三氯甲烷)∶v甲醇)=1∶1]组分以及叶的A2和A6[溶剂为V(三氯甲烷)∶V(甲醇)=2∶1]组分处理48 h后,试虫的校正死亡率均达100.00％,显著高于其他组分.定性实验结果表明:银胶菊叶和花中具有杀线虫活性的提取物、萃取物和萃取组分中均含有生物碱.研究结果说明:银胶菊花的杀线虫活性高于叶片,其毒杀活性不仅与提取部位及溶剂的种类和极性有关,还与提取物浓度及作用时间等因素有关.     

一种Vc二步发酵伴生菌的筛选方法

采用发酵种液离心法对Vc二步发酵伴生菌筛选方法进行研究。将发酵12h的发酵液4000r／min离心l0min,取上清液以20％的接种量接入种子发酵液中（30ml／250m1）,再接入1／20环大菌,29℃振荡（180r／min）培养24h,将发好种液以15％接种量转接摇瓶发酵（20ml/250ml）,29℃振荡（180r／min）培养,待残糖降至lmg/ml以下测酸。摇瓶发酵结果表明,此方法易操作、效率高,可应用于伴生菌筛选的初筛过程中。     

高速逆流色谱仪分离纯化芦荟多糖的研究

采用紫外-可见分光光度计法进行了高速逆流色谱技术分离芦荟多糖的溶剂系统研究,得出了高速逆流色谱分离芦荟多糖的溶剂系统为w(PEG600)∶w(KH2PO4)∶w(K2HPO4)∶w(H2O)=5∶15∶15∶65,加入NaCl的质量分数为2%。在水浴温度30℃,转速600 r/min,下相流速为2 mL/min的条件下,采用高速逆流色谱技术成功分离出芦荟多糖粗品,得到APS-1和APS-2两个组分,经Sephadex G-100凝胶柱层析技术和高效凝胶渗透色谱技术初步分析:APS-1和APS-2均为单一组分。     

一种快速提取肠道微生物总DNA的方法

采集的兔肠道内容物及其粪便样品,通过分散浸泡、震荡洗涤、分级离心、滤器过滤、DNA提取试剂盒提取纯化,可以获得纯度很高的DNA样品。经0.8%琼脂糖凝胶电泳检测和紫外分光光度计测定,样品A260/A280的比值为1.72±0.02。分别以提取的DNA样品为模板,通过设计的细菌特异引物,对其16S rDNA基因进行PCR扩增,获得了1.6 kb大小特异性很好的预期条带。这为肠道微生物群落的分子生态学研究提供了一种简便、可靠的DNA提取方法。