对虾白斑综合症病毒囊膜蛋白VP28的表达及其抗病毒感染作用

根据GenBank上WSSV囊膜蛋白基因vp28的序列,设计并合成引物,PCR扩增得到vp28基因,成功构建重组表达载体pET22b-vp28并转化大肠杆菌BL21(DE3)。基因工程菌株37℃IPTG诱导,表达产物经Western-blot和SDS-PAGE检测显示有与预期大小32kDa相符合的目的蛋白。用Ni2 -柱纯化的目的蛋白分别直接注射螯虾和包被饲料投喂螯虾,实验结果表明vp28在大肠杆菌中的表达产物有显著提高虾体抗WSSV感染力的作用,而且注射效果更好。     

一种快速提取肠道微生物总DNA的方法

采集的兔肠道内容物及其粪便样品,通过分散浸泡、震荡洗涤、分级离心、滤器过滤、DNA提取试剂盒提取纯化,可以获得纯度很高的DNA样品。经0.8%琼脂糖凝胶电泳检测和紫外分光光度计测定,样品A260/A280的比值为1.72±0.02。分别以提取的DNA样品为模板,通过设计的细菌特异引物,对其16S rDNA基因进行PCR扩增,获得了1.6 kb大小特异性很好的预期条带。这为肠道微生物群落的分子生态学研究提供了一种简便、可靠的DNA提取方法。     

Nisin高产菌株的高通量筛选

【目的】乳酸链球菌素(nisin)是一种天然生物活性抗菌肽,对包括食品腐败菌和致病菌在内的许多革兰氏阳性菌具有强烈的抑制作用,而用作食品的防腐剂。本研究通过建立高通量筛选方法,实现高效快速省力的高产菌株筛选,为工业上筛选高产菌株提供研究方案。【方法】通过对Lactococcus lactis ATCC11454菌株进行紫外诱变,获得2511株突变株。利用Biomek FXP自动工作站建立96微孔板的高通量筛选方法,突变株经高通量挑选、菌种培养及菌液稀释后,加入到生长至对数中期的藤黄微球菌中,采用改进后的比浊法快速检测nisin生物活性。用此方法对突变株进行初筛、复筛后可得到nisin高产菌株,并通过摇瓶发酵评估高通量筛选方法。【结果】确定比浊法检测的条件为:nisin活性稀释在10–25 IU/m L范围内,与藤黄微球菌反应2 h后检测藤黄微球菌的菌体量(OD600)。2511株突变株经过2轮高通量筛选,最终获得约50株产量提升的菌株,对其中8株进行摇瓶精确测量,显示产量均有提高,并且其中一株产量提升了30%,成功建立了高通量筛选nisin高产菌株的方法。【结论】利用比浊检测法,在其基础上成功建立高通量筛选高产nisin菌的方法,经过初筛复筛,整个周期由1人耗时5 d即可完成2511株突变株的筛选工作。相较于传统的选育方法,高通量筛选具有快速、稳定、高效的特点,提高了筛选效率,缩短了选育周期,是工业上筛选高产nisin菌的有效手段。     

广东地区汉族群体线粒体DNA 9bp序列缺失频率研究

旨在研究中国广东省部分地区汉族人群线粒体DNA RegionⅤ9bp序列缺失情况.采用PCR-PAGE和直接测序法对3个群体144份样本mtDNA RegionⅤ进行序列分析.结果只检测到标准型和短型(即9 bp缺失)两种多态.广东汉族人群的平均缺失频率为21.5%,广州、东莞和湛江汉族人群的缺失频率依次为20.8%、19.2%和25.0%.由此得出,广东汉族人群mtDNA 9 bp缺失频率较高,与其它地区汉族群体存在一定的差异.     

芽孢杆菌WS-3L淀粉酶的纯化和特性的研究

芽孢杆菌WS-3L产生的α-淀粉酶AmyL经过多步纯化,酶的回收率为15.5%,比活提高了345倍.该淀粉酶能够有效水解淀粉生成麦芽寡糖.酶的最适反应温度为45℃,最适反应pH为6.5,在pH 7.0～8.0,40℃以下酶活较稳定;离子Cu2 、NH4 、Ag 、Hg 和EDTA、SDS对酶活力有显著抑制作用,而其他一些常见金属离子如Na 、K 则对酶活影响不大.AmyL对可溶性淀粉、直链淀粉、支链淀粉的Km值和Vmax分别为2.81 mg/mL、8.37 mg/mL、1.80 mg/mL和11.67 μmol/(min·mL)、10.00μmol/(min·mL)、13.33 μmol/(min·mL),表明支链淀粉是该酶的理想水解底物.玉米淀粉对AmyL有很高的吸附率,预示这可以作为酶快速固定的一个简易方法应用到实际生产中.     

对虾白斑综合症病毒囊膜蛋白VP28的表达及其抗病毒感染作用

根据GenBank上WSSV囊膜蛋白基因vp28的序列,设计并合成引物,PCR扩增得到vp28基因,成功构建重组表达载体pET22b-vp28并转化大肠杆菌BL21(DE3).基因工程菌株37℃IPTG诱导,表达产物经Western-blot和SDS-PAGE检测显示有与预期大小32kDa相符合的目的蛋白.用Ni2+-柱纯化的目的蛋白分别直接注射螯虾和包被饲料投喂螯虾,实验结果表明vp28在大肠杆菌中的表达产物有显著提高虾体抗WSSV感染力的作用,而且注射效果更好.     

疱疹病毒感染与阿尔茨海默病

疱疹病毒可通过直接和间接2种方式促进阿尔茨海默病的进一步发展。激活的病毒既可以直接杀伤神经元造成损害,又可以刺激产生免疫应答,间接引起中枢神经系统损伤。损害的程度由脑内病毒激活情况或脑内所有与病毒有关的炎症决定,同时也受ApoE基因型影响,且不同型别疱疹病毒对该病的作用不尽相同。     

清咽滴丸药物冰块治疗甲状腺术后咽痛的疗效及对临床症状和睡眠质量的影响

摘要 目的：探讨清咽滴丸药物冰块治疗甲状腺术后咽痛的疗效,分析其对相关临床症状和睡眠质量的影响。方法：回顾性分析2019年4月至2021年8月期间广东省中医院甲状腺诊治中心收治的甲状腺术后咽痛患者240例的临床资料,根据不同的治疗方法分成三组,每组80例。对照组为药物组,给予清咽滴丸含服;实验I组为冰块组,给予25%高糖冰块含漱;实验II组为药冰组,给予自制清咽滴丸药物冰块含漱。观察比较三组患者治疗48 h后的临床疗效,治疗前和治疗48 h后的中医证候积分、深睡眠质量评分以及治疗前、治疗8 h、24 h和48 h后的视觉模拟评分法（VAS）评分。结果：实验II组治疗48 h后总有效率显著高于实验I组和对照组（P＜0.05）。三组患者治疗48 h后的中医证候积分和深睡眠质量评分均显著低于治疗前（P＜0.05）,三组患者治疗8 h、24 h、48 h后的VAS评分均显著低于治疗前（P＜0.05）,且实验II组治疗48 h后的中医证候积分和深睡眠质量评分均显著低于实验I组与对照组（P＜0.05）,实验II组治疗8 h、24 h、48 h后的VAS评分均显著低于实验I组与对照组（P＜0.05）。结论：清咽滴丸药物冰块治疗可有效缓解甲状腺术后咽痛及相关临床症状,改善患者睡眠质量,具有良好的临床应用价值。     

芽孢杆菌WS-3L淀粉酶的纯化和特性的研究

芽孢杆菌WS-3L产生的a-淀粉酶AmyL经过多步纯化, 酶的回收率为15.5%, 比活提高了345倍。该淀粉酶能够有效水解淀粉生成麦芽寡糖。酶的最适反应温度为45℃, 最适反应pH为6.5, 在pH 7.0~8.0, 40℃以下酶活较稳定; 离子Cu2+、NH4+、Ag+、Hg+ 和EDTA、SDS对酶活力有显著抑制作用, 而其他一些常见金属离子如Na+、K+则对酶活影响不大。AmyL对可溶性淀粉、直链淀粉、支链淀粉的Km值和Vmax分别为2.81 mg/mL、8.37 mg/mL、1.80 mg/mL和11.67 mmol/（min·mL）、10.00mmol/（min·mL）、13.33 mmol/（min·mL）, 表明支链淀粉是该酶的理想水解底物。玉米淀粉对AmyL有很高的吸附率, 预示这可以作为酶快速固定的一个简易方法应用到实际生产中。     

排卵期生殖道局部细胞免疫与黄体功能不全患者不孕的关系研究

目的:探讨排卵期生殖道局部细胞免疫与黄体功能不全(LPD)患者不孕之间的关系,旨在为临床防治不孕不育提供依据及参考。方法:选择2014年10月~2015年10月本院确诊的LPD患者50例为观察组,同期筛选同期50例健康体检者为对照组,排卵后第4 d、6 d、8 d采用酶联免疫法检测两组排卵期血清孕酮(P)水平,采用放射免疫法(RIA)检测两组排卵期血清以及宫颈黏液中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与白细胞介素1-β(IL-1β)的表达水平,对以上检测指标予以比较分析。结果:排卵后第4d、6d、8d观察组血清P明显低于对照组,比较差异均有统计学意义(P0.05)。排卵期观察组血清TNF-α及IL-1β水平与对照组比较,差异不具有统计学意义(P0.05),但观察组宫颈黏液中TNF-α及IL-1β水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。排卵期观察组宫颈黏液中TNF-α、IL-1β水平与血清P存在负相关关系(r=-0.879,-0.886,P0.05),且宫颈黏液中TNF-α、IL-1β二者存在显著正相关关系(r=0.768,P0.05)。结论:排卵期生殖道局部细胞免疫激活,宫颈黏液中TNF-α及IL-1β水平升高,对黄体发育产生影响,并导致LPD的发生。