罗格列酮联合地塞米松上调GR减缓博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化

目的:探讨PPARγ配体罗格列酮联合糖皮质激素对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化的干预作用和对糖皮质激素受体(GR)表达的影响,为治疗肺纤维化提供新方向。方法:30只健康雄性SD大鼠随机分为对照组(C组)、模型组(M组)、罗格列酮干预组(R组)、地塞米松干预组(D组)、罗格列酮+地塞米松干预组(R+D组),每组动物6只。气管内注入博莱霉素(5 mg/kg)的方法构建大鼠肺纤维化模型,C组气管内注入同等量生理盐水作为对照;各组于造模24小时后分别给各组大鼠生理盐水、地塞米松、罗格列酮、罗格列酮+地塞米松灌胃干预;第21天以心腔抽血法处死,左肺做病理切片行HE及Masson染色观察肺纤维化情况、免疫组化测GR表达情况,右肺用比色法测羟脯氨酸(Hyp)含量。结果:(1)造模后第21天M组和R组体重均小于C组(P<0.01)但大于D组(P<0.01)。(2)M组肺组织Hyp含量较C组增高(P<0.01);R组和D组肺组织Hyp含量较M组减低(P<0.01),但高于R+D组(P<0.05)。(3)Masson染色示M组肺组织纤维化程度较C组增高(P<0.01),R组和D组肺纤维化评分较M组减低(P<0.01),但高于R+D组(P<0.05)。(4)M组GR表达较C组下降(P<0.01);R组和D组GR表达较M组增强(P<0.01),但低于R+D组(P<0.01)。结论:罗格列酮和小剂量地塞米松均可上调大鼠肺组织GR的表达减轻博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化,罗格列酮对体重的影响明显小于地塞米松,二者联合使用有协同效应,提示罗格列酮和地塞米松联合有望成为治疗肺纤维化的新方法。     

罗格列酮和强的松对博来霉素诱导大鼠肺纤维化中FIZZ1表达的影响

目的:观察Fizz1在肺组织中的动态表达及其意义,并比较罗格列酮与强的松对Fizz1表达的影响。方法:90只雄性SD大鼠随机分为对照组,模型组,强的松干预组,罗格列酮干预组,强的松+罗格列酮干预组,模型组和干预组大鼠气管内一次性注入博来霉素构建大鼠肺纤维化模型,对照组给予等量生理盐水。造模24小时后各干预组给予相应药物灌胃。各组动物于7、14、28d随机处死6只,测肺系数,取肺组织病理切片行HE和Masson染色,观察肺泡炎和纤维化程度,测肺组织羟脯氨酸含量,免疫组化法检测Fizz1在肺组织中的表达情况。结果:干预组各时期肺纤维化程度均较模型组轻。Fizz1表达呈动态性变化,第7天表达最高,14 d,28 d表达减弱。干预组各时期Fizz1表达水平较模型组降低,其中罗格列酮和强的松联合干预组早期对Fizz的下调水平更大。结论:Fizz1的表达上调可能参与博来霉素诱导的肺纤维化形成;罗格列酮、强的松均可下调Fizz1表达减轻博来霉素诱导的肺纤维化程度,减少肺组织胶原的沉积,提示Fizz1可成为肺纤维化治疗的新靶点,罗格列酮和强的松联用治疗较单用强的松效果更好,对Fizz1的下调水平更大。     

罗格列酮和强的松对博来霉素诱导大鼠肺纤维化中FIZZ1表达的影响

目的：观察Fizzl在肺组织中的动态表达及其意义,并比较罗格列酮与强的松对Fizzl表达的影响。方法：90只雄性SD大鼠随机分为对照组,模型组,强的松干预组,罗格列酮干预组,强的松＋罗格列酮干预组,模型组和干预组大鼠气管内一次性注入博来霉素构建大鼠肺纤维化模型,对照组给予等量生理盐水。造模24小时后各干预组给予相应药物灌胃。各组动物于7、14、28d随机处死6只,测肺系数,取肺组织病理切片行HE和Masson染色,观察肺泡炎和纤维化程度,测肺组织羟脯氨酸含量,免疫组化法检测Fizzl在肺组织中的表达情况。结果：干预组各时期肺纤维化程度均较模型组轻。Fizzl表达呈动态性变化,第7天表达最高,14d,28d表达减弱。干预组各时期Fizzl表达水平较模型组降低,其中罗格列酮和强的松联合干预组早期对Fizz的下调水平更大。结论：Fizzl的表达上调可能参与博来霉素诱导的肺纤维化形成;罗格列酮、强的松均可下调Fizzl表达减轻博来霉素诱导的肺纤维化程度,减少肺组织胶原的沉积,提示Fizzl可成为肺纤维化治疗的新靶点,罗格列酮和强的松联用治疗较单用强的松效果更好,对Fizzl的下调水平更大。     

吸入糖皮质激素对大鼠肺纤维化的干预作用及bFGF表达的影响

目的:研究吸入糖皮质激素对大鼠肺纤维化模型的干预作用及可能的机制。方法:雌性Wistar大鼠40只,体重180～250g,按照随机数字表法将大鼠随机分为4组(n=10):①对照组(C组);②模型组(M组);③布地奈德组(B组);④地塞米松组(D组)。M组、B组、D组给大鼠气管内吸入博莱霉素(5mg/kgbw,8mg)复制肺纤维化模型,C组气管内吸入同等剂量的生理盐水作对照,B组于次日给予雾化吸入等效剂量布地奈德,D组于次日腹腔内注射地塞米松。上述各组均于注药后第1、4周各宰杀5只。通过苏木素-伊红染色观察肺泡炎、Masson胶原染色观察肺纤维化、用免疫组化及酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测bFGF蛋白在大鼠肺组织,血清及肺泡灌洗液(BALF)的表达。结果:1、4周时M组表现为肺泡炎及肺间质炎症,B组、D组肺泡炎及肺纤维化程度较M组减轻。1、4周时血清、肺组织、BALF中M组的bFGF表达高于C组(P0.01),B、D组低于M组(P0.01)。结论:吸入糖皮质激素可减轻博莱霉素诱导的肺纤维化,其抗纤维化作用的机制与抑制bFGF表达有关。     

PPARγ/PGC-1α在支气管哮喘豚鼠肺组织中表达及作用

目的:观察PPARγ和PGC-1α在豚鼠支气管哮喘肺组织中表达而探索PPARγ/PGC-1α对哮喘作用机制.方法:加只健康雄性豚鼠随机化原则分成对照组(A组)、哮喘组(B组)、地塞米松(C组)和罗格列酮治疗组(D组)每组10只豚鼠.卵蛋白致敏法复制哮喘模型,第16天始每日诱喘前30min C组和D组分别给予约3至5ml溶有药物的生理盐水灌胃:C组地塞米松2mg/kg,D组罗格列酮4mg/kg连续14天.测细支气管炎症细胞浸润及支气管重塑指标,肺组织病理;原位杂交和RT-PCR检测PPARγ和PGC-1α的mRNA表达免疫组化和Western blot检测肺组织两者蛋白表达.结果:(1)哮喘组出现了明显气道重塑和炎症细胞浸润,地塞米松和罗格列酮对其起抑制作用.(2)原位杂交和RT-PCR显示PPARγ和PGC-1αmRNA哮喘组表达最低四组差异均有统计学差异(P均<0.01);免疫组化和Western blot显示PPARγ和PGC-1α蛋白哮喘组表达几乎都呈阴性而且以核内表达为主,四组差异均有统计学意义(P均<0.01);地塞米松和罗格列酮可上调PPARα和PGC-1γ蛋白以及mRNA的表达.(3)支气管哮喘豚鼠肺组织PPARγ与PGC-1α表达呈正相关,PPARγ和PGC-1α蛋白以及mRNA与浸润的嗜酸粒细胞、Wal%、SMC-A%呈负相关.结论:PPARγ/PGC-1α在卵蛋白致敏急性支气管哮喘模型中表达下降,罗格列酮和地塞米松一样可上调PPARγ/PGC-1α,PPARγ/PGC-1α对哮喘发病起重要作用而可能为哮喘防治开辟新途径.     

抗bFGF抗体对肺纤维化模型的干预作用

目的:研究抗bFGF抗体对大鼠肺纤维化模型的干预作用及可能的机制。方法:雌性Wistar大鼠30只,体重180～250g,按照随机数字表法将大鼠随机分为3组(n=10):①对照组(C组);②模型组(M组);③抗bFGF抗体组(K组)。M、K组给大鼠气管内注入博莱霉素复制肺纤维化模型,C组气管内注入同等剂量的生理盐水作对照,K组于造模后1,2,3,8,12,19,25d腹腔内注射抗bFGF抗体。上述各组均于注药后1、4周各宰杀5只。通过苏木素-伊红染色观察肺泡炎、Masson胶原染色观察肺纤维化、用免疫组化及酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测bFGF蛋白在大鼠肺组织,血清及肺泡灌洗液(BALF)的表达。结果:在1、4周时M组与C组比较肺泡炎、肺纤维化程度明显,M组在肺组织、血清和的BALF中的bFGF表达与C组的bFGF表达比较升高;在1、4周时K组与M组比较肺泡炎、肺纤维化程度减轻,K组在肺组织、血清和的BALF中的bFGF表达与M组的bFGF表达比较均有降低。结论:抗bFGF抗体可减轻博莱霉素诱导的肺纤维化,其抗纤维化作用的机制与抑制bFGF表达有关。     

EGFR 对博莱霉素诱导小鼠肺纤维化中上皮- 间质转分化的影响

目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)在肺内的表达对博莱霉素(BLM)诱导小鼠肺纤维化中上皮-间质转分化的影响。方法:将40只4～6周龄C57BLB/c雄性小鼠随机分为正常对照组(气管滴入PBS),纤维化组(气管滴入BLM 3 mg/kg),EGFRRNAi组(气管滴入BLM 3 mg/kg+气管滴入siRNA 20μl)和RNAi阴性对照组(气管滴入BLM 3 mg/kg+气管滴入siRNA阴性对照20μl)。实验第10天处死小鼠,收获肺组织,检测羟脯氨酸含量;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测EGFR和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA的表达;肺组织切片行HE染色观察肺组织病理改变,免疫组化染色检测EGFR和α-SMA表达。结果:纤维化组EGFR和α-SMA两者的mRNA和蛋白表达均较正常对照组显著增加;RNAi组肺病理损伤较纤维化组减轻,气道上皮下胶原沉积及肺羟脯氨酸含量减少(P<0.05),肺组织EGFR和α-SMA两者的mRNA和蛋白表达均较纤维化组显著下降(P<0.05)。结论:在博来霉素诱导的肺纤维化中EGFR RNAi抑制EGFR活化,下调α-SMA的表达,减轻了博莱霉素诱导的肺纤维化病理改变。其抑制肺纤维化病理过程可能与其抑制上皮-间质转分化(EMT)有关。     

腺苷A2a受体在博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化中的作用

目的：观察腺苷A_2a受体（A_2aR）在小鼠肺纤维化形成中的调控作用。方法：30只雄性SPF级野生型BALB/C小鼠和20只A_2aR基因敲除BALB/C小鼠,随机分为以下5组：野生型小鼠对照组（A组）、野生型小鼠纤维化组（B组）、A_2aR基因敲除小鼠对照组（C组）、A_2aR基因敲除小鼠纤维化组（D组）、野生型小鼠纤维化+A_2aR激动剂（CGS21680）组（E组）,每组各10只。纤维化组小鼠气管内注入博莱霉素（bleomycin,BLM）溶液50μl （5 mg/kg体重）,对照组在气管内注入等体积生理盐水,注射后立即将小鼠直立旋转3~5 min,使其均匀分布于两肺。A、B、C、D各组每天腹腔注射生理盐水0.5 ml,E组每天腹腔注射A_2aR激动剂（CGS21680）0.5 ml （0.25 mg/kg体重）,连续28 d。第29天取血检测血清转化生长因子β1（TGF-β1）含量;检测肺组织中羟脯氨酸（hydroxyproline,Hyp）、TGF-β1和A_2aR蛋白质含量,TGF-β1 mRNA、A_2aR mRNA的表达,并观察肺组织光镜和超微结构。结果：①光镜和超微结构提示,B组肺泡壁增厚破坏,肺泡腔狭窄或部分陷闭,纤维增生,炎细胞浸润,I型、Ⅱ型肺泡上皮细胞明显空泡化,D组较B组明显,E组表现较B组减轻。Masson染色提示B组、D组小鼠肺组织纤维增生明显,E组明显减少,提示基因缺失加重了小鼠肺纤维化的形成。②与A组比较,B组血清TGF-β1含量,肺组织Hyp含量,TGF-β1、A_2aR蛋白质含量和TGF-β1 mRNA、A_2aR mRNA的表达均明显增高（P<0.01,P<0.05）。与C组比较,D组血清TGF-β1含量、肺组织Hyp、TGF-β1含量和TGF-β1 mRNA表达明显增高（P<0.01,P<0.05）,提示肺纤维化小鼠肺组织Hyp含量增高,TGF-β1表达上调。③与B组相比,D组血清TGF-β1、肺组织Hyp、TGF-β1含量和TGF-β1 mRNA表达明显增高（P<0.01）。与B组比较,E组A_2aR蛋白质含量和A_2aR mRNA的表达均增高（P<0.01）,而血清TGF-β1、肺组织Hyp和TGF-β1蛋白含量及TGF-β1 mRNA表达较B组明显下降（P<0.01,P<0.05）,提示A_2aR基因敲除小鼠肺组织Hyp含量增高、TGF-β1表达上调;A_2aR激动剂可使A_2aR表达上调、TGF-β1表达下降。结论：A_2aR基因敲除小鼠的肺纤维化明显增加。A_2aR在肺纤维化形成中反应性增高,可通过降低TGF-β1的表达而抑制肺纤维化形成。     

VEGF与其受体2在哮喘大鼠气道中表达变化及其对气道平滑肌细胞增殖的影响

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)及其受体2(Flk-1)在哮喘大鼠气道中表达变化及其对气道平滑肌细胞增殖的影响.方法 SD大鼠18只,随机分为对照组,哮喘模型组和地塞米松干预组各6只.以腹腔注射1%卵蛋白致敏和2%卵蛋白雾化吸入激发复制哮喘模型,干预组在每次激发前给予地塞米松干预.用免疫组织化学技术检测气道平滑肌α-actin以及VEGF和Flk-1蛋白质在不同组大鼠肺组织的表达程度;用RT-PCR方法检测VEGF和Flk-1mRNA在不同组大鼠肺组织的表达程度;采用HMIAS-2000型高清晰度彩色医学图文分析系统进行图像分析.结果 (1)哮喘模型组气道壁平滑肌厚度较对照组和干预组显著增加(P<0.05).(2)哮喘模型组VEGF及Flk-1蛋白质在大鼠肺组织中的表达较对照组和干预组显著增加(P<0.05).(3)哮喘模型组VEGF144,VEGF188 mRNA和VEGF205 mRNA在大鼠肺组织中的表达较对照组和干预组显著增加(P<0.05或P<0.01).哮喘模型组Flk-1mRNA在大鼠肺组织中的表达较对照组和干预组显著增加(P<0.05).直线相关性分析显示,气道壁平滑肌厚度与大鼠肺组织中VEGF205,188,144及Flk-1mRNA表达水平呈正相关(r分别为0.739,0.747,0.744,0.682;P<0.05);气道壁平滑肌厚度与大鼠肺组织中VEGF及Flk-1蛋白质表达水平也呈正相关(r分别为0.693,0.672;P<0.05).结论哮喘模型大鼠肺组织中VEGF及其受体Flk-1表达上调,并与气道平滑肌增殖有密切关系.该结果提示VEGF及其受体2可能参与了哮喘气道重建中气道平滑肌增殖的过程.     

黄芩苷防止肺纤维化大鼠肺内结缔组织生长因子的上调

为探讨黄芩苷(baicalin,Bai)防止肺纤维化的机制,本研究观察了Bai对肺纤维化大鼠肺内结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)上调的影响。将雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为4组:生理盐水(normal saline,NS)+NS组(气管内滴注NS,随后每天腹腔注射NS一次)、NS+Bai组(气管内滴注NS,随后每天腹腔注射Bai一次)、博莱霉素(bleomycin,BLM)+NS组(气管内滴注BLM,随后每天腹腔注射NS一次)和BLM+Bai组(气管内滴注BLM,随后每天腹腔注射Bai一次)。Bai的剂量分别为每天6、12.5或50mg/kg。各组于气管内一次性滴注BLM或NS后第28天处死动物,取肺组织样本。采用氯胺-T法检测肺组织羟脯氨酸含量(反映肺纤维化程度的指标),用RT-PCR和免疫组织化学方法检测肺CTGF的表达。结果显示,BLM+NS组大鼠肺羟脯氨酸含量、CTGF蛋白及mRNA水平均明显高于NS+NS组大鼠(均P0.01),提示BLM诱导了大鼠的肺纤维化,且纤维化肺内出现CTGF表达的上调。BLM+Bai组大鼠连续28d每天腹腔注射6、12.5或50mg/kgBai后,BLM所致的肺纤维化明显减轻,同时肺CTGF表达的上调也得到明显抑制。以上结果提示,Bai可防止肺纤维化大鼠肺内CTGF表达的上调,这可能是其防止肺纤维化形成的作用机制之一。     

罗格列酮对大鼠肺组织IL-4、IL-8和TNFα的影响

目的 研究过氧化物酶体增殖物激活的受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮对大鼠肺白介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-4(IL-4)的影响.方法 将SD大鼠随机分为正常对照组和罗格列酮组.制备肺组织匀浆和支气管肺泡灌洗液,用放免法检测IL-8、TNF-α,用ELISA法测IL-4.结果 罗格列酮组大鼠肺组织匀浆的IL-4含量[(5.36±1.08) ng/mL]高于正常对照组[(3.48±1.70) ng/mL],P＜0.01.其他指标差异无统计学意义.结论 激活PPAR-γ可诱导肺组织产生IL-4.     

罗格列酮对肺纤维化大鼠肺动脉壁结缔组织生长因子表达的影响

目的:观察过氧化物酶体增殖活化受体γ(PPAR-γ)激动剂罗格列酮(RSG)对肺纤维化大鼠肺动脉壁结缔组织生长因子(CTGF)上调、Ⅰ型和Ⅲ型胶原沉积的影响。方法:48只雄性SD大鼠,随机分为以下4组:博莱霉素(BLM)+生理盐水(NS)组(n=21)、BLM+RSG组(n=9)、NS+NS组(n=9)和NS+RSG组(n=9)。气管内一次性滴注BLM(5mg/kgbw),RSG灌胃(3mg/(kg.d),14d)。整体实验,气管滴注后第14天观察;离体实验,气管滴注BLM后第14天,分离大鼠的肺动脉,并用RSG培养液和单纯培养液孵育(37℃,5%CO2,24h)。结果:在整体水平,与对照大鼠相比,BLM模型大鼠肺动脉壁的CTGF免疫阳性表达增强,CTGF蛋白含量、Ⅰ型和Ⅲ型胶原含量、Ⅰ/Ⅲ胶原比值均增高(均P0.05);RSG能阻止上述指标的异常变化(均P0.05);在离体水平,RSG能阻止BLM模型大鼠肺动脉壁CTGF的上调(P0.05),但对Ⅰ型和Ⅲ型胶原沉积无明显影响(P0.05)。结论:RSG能直接作用于肺动脉壁,阻止肺纤维化大鼠肺动脉壁CTGF的上调,这可能是其减轻动脉壁结构重塑的机制之一。     

罗格列酮对低氧性肺动脉高压大鼠PPARγ和PTEN表达的影响

目的:研究罗格列酮(rosiglitazone,RSG)对低氧性肺动脉高压大鼠过氧化物酶体增殖物激活受体γ(Peroxisome proliferator activated receptor gamma,PPARγ)和10号染色体缺失张力蛋白同源磷酸酶基因(Phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10,PTEN)表达的影响。方法:SD大鼠随机分为正常对照组、低氧组、低氧+罗格利酮组,建立低氧性肺动脉高压大鼠模型,4周后测定各组大鼠右心室压力、右心肥厚指标,同时检测各实验组PPARγ、PTEN的表达和组织病理学变化。培养原代大鼠肺动脉平滑肌细胞,分别给与低氧、低氧+罗格列酮、低氧+GW9662处理后观察细胞增殖及PPARγ、PTEN的表达变化。结果:1与正常组相比,低氧组大鼠右心室压力、右心肥厚指标明显增加,肺小动脉管壁增厚,PPARγ、PTEN的表达明显减少。与低氧组相比,低氧+罗格列酮组大鼠右心室压力下降,右心室及肺小动脉管壁的肥厚减轻,PTEN的表达增加。2低氧下,PASMCs中PPARγ、PTEN表达明显减低,细胞增殖较常氧明显增加,给与罗格列酮后,PTEN表达增加,给与GW9662,PTEN表达减少。3罗格列酮可以抑制PASMCs低氧下的增殖,而给与GW9662后,这一抑制作用减轻。结论:早期应用罗格列酮可激活低氧性肺动脉高压大鼠PPARγ的活性,进而上调PTEN表达,改善低氧性肺动脉高压。     

参麦注射液对肠缺血/再灌注肺损伤大鼠肺组织p38MAPK及凋亡相关基因表达的影响

目的:观察参麦注射液(SM)对肠缺血/再灌注(I/R)肺损伤大鼠肺组织p38MAPK和凋亡相关基因Bax、Bcl-2蛋白表达的影响,探讨其保护机制。方法:采用夹闭肠系膜上动脉(SMA)方法建立大鼠肠I/R损伤模型。24只SD大鼠随机分为对照组(Control组)、肠缺血/再灌注组(I/R组)、参麦注射液组(SM+I/R组),每组8只。比较各组大鼠肺湿/干比(W/D)、肺表面活性物质主要成分卵磷脂(PC)及总磷脂(TPL)含量的变化;同时免疫组织化学法检测各组大鼠肺组织中p38MAPK、Bax及Bcl-2蛋白的表达水平。结果:与对照组比较,I/R组肺组织W/D明显升高,而PC和TPL的含量显著降低,肺组织p38MAPK、Bcl-2和Bax蛋白表达明显增强(P均＜0.01),其中Bax的增强比Bcl-2的增强更为明显,Bcl-2/Bax比值降低(P＜0.01);与I/R组比较,SM+I/R组大鼠肺组织W/D明显降低,PC和TPL的含量增加,肺组织p38MAPK和Bax蛋白表达下降(P均＜0.01),Bcl-2的表达增强,Bcl-2/Bax比值明显升高(P＜0.01)。相关分析显示,肠I/R时肺组织p38MAPK蛋白表达水平与肺表面活性物质主要功能成分PC含量及凋亡基因Bcl-2/Bax比值呈负相关(r分别为-0.787,-0.731,P均＜0.01)。结论:SM可能通过抑制p38MAPK信号通路的激活,提高Bcl-2/Bax比值来阻抑细胞凋亡,从而减轻肠I/R时的肺损伤。     

大鼠肺纤维化细胞凋亡及Cathepsin B基因变化的关系

目的:检测大鼠肺纤维化时细胞凋亡及组织蛋白酶B(Cathepsin B,CB)基因的变化,探讨细胞凋亡和CB基因变化在肺间质纤维化中的意义。方法:将20只大鼠分为正常对照组及模型组,每组10只,应用末端原位杂交(TUNEL)、RT-PCR、免疫组化技术检测博莱霉素致肺间质纤维化大鼠肺组织细胞凋亡、CB mRNA水平及蛋白表达的变化。结果:模型组大鼠肺组织中细胞凋亡指数为(13．7±3．4)%,对照组为(1．9±0．3)%,两组比较差异有统计学意义(t=-11．03,P＜0．01);模型组CB蛋白表达为29．76±4．62,正常对照组为78．48±5．36,两组比较差异有统计学意义(t=23 713;P＜0．01);CB mRNA在模型组为0．9413±0．0592,正常对照组为0．4280±0．0161,两组比较差异有统计学意义(t为—26．447,P＜0．01)。结论:博莱霉素致大鼠肺间质纤维化时引起肺组织CB表达上调,启动肺组织细胞凋亡程序,在肺纤维化发生、发展中起到重要的作用。     

5-HTR2B、E-cad、α-SMA在博莱霉素致大鼠肺纤维化中的表达变化

目的:观察5-羟色胺2B受体(5-HTR2B)、E-钙粘素(E-cad)、α-平滑肌蛋白(α-SMA)在博莱霉素(BLM)致大鼠肺纤维化中的表达变化。方法:健康雄性SD大鼠45只,随机分为3组(n=15):对照组、BLM组、泼尼松+BLM组。各组分别于第7、14和28天各处死动物5只,取肺组织,行HE、Masson染色,观察大鼠肺组织炎症和纤维化的程度;免疫组化法及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肺组织中5-HTR2B、上皮细胞标记物E-cad和间质细胞标记物(α-SMA)mRNA及蛋白的表达水平。结果:BLM组肺组织病理切片HE和Masson染色按时间顺序呈现由肺泡炎症至纤维化的动态改变。免疫组化及RT-PCR结果显示肺纤维化大鼠肺组织中5-HTR2B、α-SMA的蛋白及mRNA表达均增加(P0.05),28 d时最高;E-cad蛋白及mRNA表达均减弱(P0.05),28 d时最低;泼尼松+BLM组,相应时间点5-HTR2B、α-SMA蛋白及mRNA表达有所下降(P0.05),E-cad蛋白及mRNA表达不同程度增强(P0.05)。结论:5-HTR2B可促进大鼠肺纤维化发生,机制可能与减弱E-cad,促进α-SMA表达,诱导上皮细胞间质转化(EMT)有关。     

磷脂酶C抑制剂U73122对COPD大鼠肺组织内MMP-9,MMP-12表达影响的实验研究

目的:探讨磷脂酶C抑制剂U73122对COPD大鼠肺组织内MMP-9,MMP-12表达的影响.方法:通过烟熏及气管内注入脂多糖(LPS)建立COPD大鼠模型,从第1d起通过尾静脉注射磷脂酶C(PLC)抑制剂U73122(以U73343为阴性对照),持续28天.第28d,观察各组大鼠肺组织病理变化,western blot法检测肺组织中MMP-9、MMP-12表达水平.结果:模型组和干预组大鼠MMP-9、MMP-12蛋白表达高于对照组(P＜0.05),干预组低于模型组(P＜0.05).干预组肺组织形态学改变较模型组改善(P＜0.05).结论:U73122通过抑制磷脂酶C(PLC)信号途径减少了COPD中MMP9、MMP12的表达,减轻肺组织结构破坏.     

降钙素基因相关肽对肺纤维化大鼠肺组织eIF3a、p27表达的影响

目的：观察降钙素基因相关肽（CGRP）对肺纤维化大鼠肺组织真核翻译起始因子3a （eIF3a）、p27表达的影响,探讨CGRP在肺纤维化中的作用及机制。方法：雄性SD大鼠,体重180~220 g,随机分为3组（n=8）：对照组、博莱霉素组、博莱霉素+辣椒素组。采用气管内注射博莱霉素（5 mg/kg）诱导肺纤维化大鼠模型。造模前4 d大鼠皮下注射辣椒素（Capsaicin）（50 mg/kg·d）,造模后第28天处死动物,颈动脉采血ELISA法测定血浆CGRP含量。细胞实验分6组（n=9）：Control组,转化生长因子-β1（TGF-β1）组,CGRP （1、10、100 nmol/L）组,CGRP8-37 1 μmol/L和CGRP 100 nmol/L组。细胞用CGRP和（或） CGRP8-37预处理1 h,再用TGF-β1（5 ng/ml）处理48 h。5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）法检测细胞增殖。免疫组化、real-time PCR和（或） Western blot检测eIF3a、p27、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、collagen Ⅰ mRNA及蛋白表达。结果：博莱霉素诱发肺纤维化动物肺组织eIF3a、α-SMA及Ⅰ胶原表达增高,CGRP及p27的表达明显降低。外源性CGRP可剂量依赖性的抑制TGF-β1诱导的肺成纤维细胞增殖,明显抑制eIF3a、α-SMA、Ⅰ胶原的表达,上调p27的表达,这些作用可以被CGRP阻断剂CGRP8-37所取消。结论：CGRP在博莱霉素诱导的肺纤维化中起着重要作用,可能通过抑制eIF3a、上调p27的表达而抑制肺成纤维细胞的增殖,进而抑制肺纤维化的形成与发展。     

HSC的活化、增殖与TGF-β1及其Ⅰ型受体在中晚期纤维化肝组织中的改变及护杆片对其的影响

目的 探讨护肝片对中、晚期纤维化大鼠肝组织肝星状细胞(HSC)的活化与增殖及转化生长因子-β1(TGF-β1)及其Ⅰ型受体(TβRⅠ)表达的影响.方法 采用12.5% CCl4诱导的大鼠肝纤维化模型,自造模之日起,大鼠分组灌胃给药(护肝片921mg·kg-1)或溶媒,每日一次,直至8或13周末,分别处死动物,取左叶肝组织石蜡包埋,制作组织芯片,免疫组化S-P法检测大鼠肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、TGF-β1及TβRⅠ蛋白的表达,并用MetaMorph图像分析系统计数α-SMA阳性细胞数、对TGF-β1及TβRⅠ蛋白表达量进行定量分析.结果 1.模型复制8周和13周,模型组的肝损伤及其纤维化分级均明显高于正常组(P＜0.01),护肝片组的肝损伤及其纤维化分级均轻于模型组.2.模型复制8周和13周,模型组活化的HSC(即α-SMA阳性细胞)数量较正常组明显增多、TGF-β1及TβRⅠ蛋白的表达较正常组明显增强(P＜0.01);3.护肝片显著抑制8、13周纤维化肝组织HSC的活化与增殖和TGF-β1及TβRⅠ蛋白的表达(P＜0.01).结论 抑制HSC的活化与增殖和TGF-β1及TβRⅠ的表达可能是护肝片抗肝纤维化作用的靶点之一.     

菠菜和芫荽对雄性大鼠性功能的影响与植物雌激素样作用研究

目的:研究菠菜、芫荽对雄性大鼠性功能的影响,探讨植物雌激素样作用机制。方法:60只正常雄性SD大鼠,随机分为正常组(N组)、大豆对照组(A组)、菠菜组(B组)、芫荽组(C组)和菠菜+芫荽组(D组),每组12只,不同饲料干预20周后,进行性行为学试验并取材。采用放免法检测各组外周血清中T、E2、LH、FSH和PRL等性腺轴激素含量,HE染色观察睾丸组织形态学变化,IHC和western blot法检测大鼠睾丸中ERα,ERβ蛋白表达。结果:(1)性行为学检测结果:C和D组插入、射精潜伏期较N组显著延长(P0.05),爬背、插入,射精次数较N组显著减少(P0.05);D组插入潜伏期较A组显著延长(P0.05)(2)性激素水平检测结果:D组T水平较N组显著降低(P0.05);C组E_2水平较A组显著升高(P0.05),D组E_2水平较N、A组显著升高(P0.05);C和D组LH水平较N组显著降低(P0.05),同时C组LH水平亦较A组显著降低(P0.05);FSH水平在各组之间无显著差异(P0.05);D组PRL水平较N组显著降低(P0.05)。(3)睾丸HE染色结果:光镜下N组睾丸组织结构完整,B、C和D组睾丸组织形态结构发生明显变化,生精小管间连接疏松,间质细胞减少,生精细胞减少。(4)ERα和ERβ的表达结果:ERα和ERβ分别在睾丸中精原细胞和间质细胞中表达,其中ERα在B、C和D组表达较N组显著增多(P0.05),ERβ在各组间无显著差异(P0.05)。结论:芫荽及菠菜和芫荽联合干预可延长大鼠爬背、插入、射精潜伏期和减少其爬背、插入和射精次数,导致大鼠性功能障碍;具体机制可能与发挥雌激素样作用,升高血清中E_2水平,使ERα在睾丸间质中的表达增多,进而降低T水平有关。芫荽与大豆相比具有更强的雌激素样作用,而菠菜与大豆雌激素样作用接近,菠菜和芫荽联合干预出现累加效应。