降脂益生菌调节胆固醇代谢 改善小鼠非酒精性脂肪肝

目的研究一种由鼠李糖乳杆菌DM9054和植物乳杆菌86066构成的降脂益生菌组合对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠胆固醇代谢的影响及其可能机制。方法 24只雄性LDLR-/-小鼠随机分为对照组、模型组和益生菌干预组。高脂饮食(HFD)15周建立小鼠NAFLD模型,造模同时干预组给予鼠李糖乳杆菌DM9054联合植物乳杆菌86066灌胃,对照组和模型组给予等量生理盐水灌胃。实验过程中监测各组小鼠体重变化。实验结束后,检测小鼠血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL)的水平差异。检测小鼠肝脏组织病理变化。使用Realtime PCR检测小鼠肠道内法尼脂受体(FXR)mRNA、顶端膜钠依赖的胆汁酸转运体(ASBT)mRNA、纤维生长因子15(FGF-15)mRNA和三磷酸腺苷结合盒转运体G5(ABCG-5)mRNA表达水平。Western blot检测小鼠肝脏胆固醇7α-羟化酶(CYP7A1)、FXR、三磷酸腺苷结合盒转运体G8(ABCG-8)、清道夫受体BI(SR-BI)、3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCR)、胆盐输出泵(ABCB-11)、纤维生长因子受体4(FGFR-4)和胆固醇调节元件结合蛋白-2(SREBP-2)蛋白表达水平。结果与模型组相比,降脂益生菌干预组小鼠体重减轻(P0.05);小鼠血清TC、TG、LDL水平降低,HDL水平升高(P0.05);小鼠肝脏脂肪变性和炎性细胞浸润的现象显著减少;小鼠肠道ASBT mRNA和ABCG-5mRNA表达水平明显降低(Ps0.05),FGF-15mRNA表达水平明显升高(P0.05),FXR mRNA表达水平差异无统计学意义(P0.05);小鼠肝脏FGFR-4蛋白表达水平升高(P0.05),SREBP-2和HMGCR蛋白表达水平降低(Ps0.05),FXR、CYP7A1、SR-BI、ABCG-8和ABCB-11蛋白表达水平差异无统计学意义(Ps0.05)。结论降脂益生菌可能通过激活FXR-FGF15通路调节胆汁酸代谢;通过下调SREBP-2表达水平,抑制HMGCR表达,减少胆固醇的生成,从而起到改善非酒精性脂肪肝的作用。     

PM2.5通过抑制FGF21/AMPKα2通路促发非酒精性脂肪肝

目的:探讨PM2.5对非酒精性脂肪肝(NAFLD)的影响及与FGF21/AMPKα2通路的关系。方法:根据气管滴注的PM2.5浓度随机将40只6周龄雄性小鼠分为4组:对照组(生理盐水,10只)和低毒组(6.25μg/mL)、中毒组(12.5μg/mL)、高毒组(25.0μg/mL),10只/组,持续染毒19天。10周龄起给予高脂饲料喂养6周,构建NAFLD小鼠模型。分别于染毒前、染毒后、高脂喂养6周测定循环TG、TC及FGF21水平。处死小鼠,取肝细胞培养后随机分两组,分别转染Ad-FGF21与对照病毒Ad-GFP 16 h,后加入PM2.5混悬液进行染毒共培养36 h,测定两组细胞存活率,肝细胞内TC及TG、FGF21、AMPKα2含量。结果:染毒后及高脂喂养6周后,各组血清TG、TC较染毒前明显升高,血清FGF21水平降低,且随着染毒浓度的增加,血清TG、TC亦相应升高,FGF21随之降低(P0.05)。与染毒后比较,高脂喂养6周后各组血清TG、TC均显著升高,血清FGF21显著降低(P0.05)。与Ad-GFP组比较,Ad-FGF21组PM2.5染毒后肝细胞存活率显著升高,TG、TC水平明显降低,而肝细胞FGF21、AMPKα2表达含量则显著升高(P0.05)。结论:幼年期PM2.5暴露可加速成年后NAFLD发生,且与暴露浓度密切相关,PM2.5可能通过抑制肝脏FGF21/AMPKα2信号通路促进肝细胞脂质沉积和NAFLD的发生发展。     

新加越鞠丸对非酒精性脂肪肝大鼠血清脂联素及瘦素水平的影响

目的:观察新加越鞠丸对非酒精性脂肪肝大鼠血清脂联素及瘦素的影响.方法:3只健康雄性SD大鼠随机分为4组,每组9只.高脂高糖饲料喂养制备大鼠非酒精性脂肪肝模型.8W病理显示造模成功后,每组给予相应药物干预,连续4W.酶联免疫吸附(ELISA)法测定各组大鼠血清中脂联素(ADP)浓度及瘦素(LP)浓度,HE染色观察肝脏病理变化.结果:与正常对照组大鼠比较,模型对照组血清中ADP浓度明显降低(P＜0.05),LP明显升高(P＜0.05);与模型对照组大鼠比较,新加越鞠丸组血清中ADP浓度明显升高(P＜0.05),LP明显降低(P＜0.05);新加越鞠丸组大鼠较水林佳组,血清中ADP浓度显著升高(P＜0.05),LP有显著性差异(P＜0.05).结论:新加越鞠丸可通过升高血清脂联素水平,降低血清瘦素水平,减轻非酒精性脂肪肝的损伤.     

过表达miR-31对结肠炎模型小鼠TLR4/NF-κB信号通路及凋亡蛋白的调控

目的: 探讨miR-31对DSS诱发结肠炎小鼠TLR4/NF-κB信号通路和凋亡相关蛋白的影响。方法: ①小鼠结肠炎实验:用1%葡聚糖硫酸钠(DSS)诱发小鼠溃疡性结肠炎(UC)。14只FVB非转基因小鼠随机分为control组(n=6),DSS组(n=8),16只FVB miR-31转基因小鼠随机分为miR-31过表达组(n=8),miR-31过表达+DSS 组(n=8),DSS溶于水后通过饮水给予小鼠。DSS组和miR-31+DSS组第一周饮用1%DSS水,第二周饮用正常无菌水,第三周饮用1%DSS水,如此5周后造模完成,之后留取小鼠的结肠组织,通过Western blot和IHC检测小鼠结肠组织NF-κB p65、TLR4、Bax、Bcl-2蛋白的表达;TUNEL检测小鼠结肠组织细胞凋亡。②细胞培养实验:在人结肠上皮细胞系HCT 116细胞中通过脂质体转染的方法转染miR-31 mimic和inhibitor,使miR-31过表达或敲低,每组均进行三次重复,48 h后收取细胞,通过Western blot检测NF-κB p65、TLR4蛋白的表达。结果: ①动物实验中,与control组相比,小鼠结肠组织中DSS组和miR-31过表达组NF-κB p65、TLR4蛋白表达水平和凋亡细胞指数均显著升高(P＜0.05或P＜0.01),Bcl-2/Bax比值显著降低(P＜0.05或P＜0.01);且与DSS组相比,miR-31+DSS组NF-κB p65、TLR4蛋白表达水平和凋亡细胞指数也显著升高(P＜0.01),Bcl-2/Bax比值显著降低(P＜0.01)。②细胞实验中,与control组相比, HCT 116细胞过表达miR-31组的NF-κB p65、TLR4蛋白表达水平均显著升高(P＜0.05或P＜0.01),敲低miR-31组的NF-κB p65、TLR4蛋白表达水平下降(P＜0.05)。结论: miR-31通过促进TLR4/NF-κB信号通路和介导肠上皮细胞凋亡促进结肠炎的发展。     

肠道菌群与呼吸道感染患者免疫球蛋白的关系及其肠内营养的疗效

目的分析肠道菌群紊乱对呼吸道感染患者免疫球蛋白水平的影响,探讨肠内营养对此类患者的疗效。方法选取2016年2月至2018年12月在我院接受治疗的116例呼吸道感染患者作为观察组,进一步将其分为非菌群失调组(50例)和菌群失调组(66例),选取同期60例健康体检者作为对照组,比较各组对象肠道菌群失调情况和血清免疫球蛋白水平,同时对菌群失调患者在常规治疗基础上联合应用肠内营养治疗,观察其治疗效果。结果 (1)观察组患者肠道乳杆菌、双歧杆菌数量及双歧杆菌/大肠埃希菌比值(B/E)显著低于对照组,而肠球菌、大肠埃希菌数量显著高于对照组(均P0.05);观察组患者血清IgM、IgA、IgG水平均显著低于对照组(均P0.05);菌群失调组患者血清IgM、IgA、IgG水平均显著低于非菌群失调组(均P0.05)。(2)观察组患者肠道乳杆菌、双歧杆菌数量及B/E值与血清IgM、IgA、IgG水平呈显著正相关(均P0.05),而大肠埃希菌和肠球菌数量与之呈显著负相关(均P0.05)。(3)菌群失调组患者血清ALB、PA水平随治疗时间的延长而逐渐升高,CRP、PCT水平逐渐降低,IgM、IgA、IgG水平逐渐升高,乳杆菌、双歧杆菌数量和B/E值逐渐增加,大肠埃希菌和肠球菌数量逐渐减少(均P0.05)。结论呼吸道感染患者存在明显的肠道菌群失调情况,其与患者免疫球蛋白水平的降低有关,这可能是引发呼吸道感染的主要危险因素。肠内营养支持疗法能有效改善患者肠道菌群失调,降低血清炎性因子水平,增强机体免疫力,提高患者营养状况及治疗效果。     

血清BDNF、IGF-1及Hcy与癫痫患者认知功能损害关系研究

为探讨血清脑源性神经营养因子(BDNF)、胰岛素样生长因子-1 (IGF-1)及同型半胱氨酸(Hcy)与癫痫患者认知功能损害(MCI)的关系,本研究选取2015年1月至2016年10月由本院收治并确诊的癫痫患者116例,根据患者是否发生轻度认知障碍(MCI),将患者分为MCI组50例、非MCI组66例,选取健康体检对象60例作为对照组,检测各组血清BDNF、IGF-1、Hcy水平,并采用韦氏成人智力量表中国修订本(WAIS-RC)对三组患者进行测量,并分析血清BDNF、IGF-1、Hcy与WAIS-RC量表评分的关系。结果显示,与非MCI组和对照组比较,MCI组患者的血清Hcy水平明显升高(p0.05),MCI组患者的血清BDNF、IGF-1水平明显降低(p0.05);非MCI组患者的血清Hcy水平明显高于对照组(p0.05),非MCI组患者的血清BDNF、IGF-1水平明显低于对照组(p0.05);MCI组患者的VIQ、PIQ、FIQ量表评分明显低于非MCI组和对照组(p0.05);非MCI组患者的VIQ、PIQ、FIQ量表评分与对照组比较,差异无统计学意义(p0.05);MCI组患者的VIQ、PIQ、FIQ量表评分与血清BDNF、IGF-1水平呈显著的正相关关系(p0.05);MCI组患者的VIQ、PIQ、FIQ量表评分与血清Hcy水平呈显著的负相关关系(p0.05)。本研究发现癫痫患者MCI血清BDNF、IGF-1水平显著降低、Hcy显著升高,说明血清BDNF、IGF-1和Hcy水平与患者MCI程度有一定的相关性。     

MicroRNA-185改善非酒精性脂肪肝小鼠胰岛素敏感性并调节脂代谢基因的表达

目的:探讨micro RNA-185(miR-185)对高脂饮食的小鼠模型的HepG2肝细胞脂质代谢和胰岛素信号通路的调节作用。方法:应用定量反转录聚合酶链反应评估过表达或抑制miR-185表达脂质合成相关基因的mRNA水平。此外,应用Western Blot方法测定转染HepG2细胞pre-mir-185后的关键信号通路组分(IRS-1,IRS-2,PI3K、AKT2)和磷酸化PI3K和AKT2的表达情况。结果:诱导的人类HepG2细胞的软脂酸对mir-185水平的下降具有时间和剂量依赖性。经过mir-185转染的HepG2细胞显著降低脂肪酸合成酶,3-hydroxy-3-methylglutaryl-coa还原酶,固醇调节元件结合蛋白和固醇调节元件结合蛋白-1c的mRNA水平,而使用anti-mir-185寡核苷酸抑制mir-185在HepG2细胞中产生相反的作用。在高脂饮食的小鼠模型,与对照组动物相比,mir-185处理后脂质积累明显改善。mir-185诱导后通过上调胰岛素受体底物2增强胰岛素信号通路。结论:miR-185在体内和体外调节肝细胞脂肪酸代谢和胆固醇平衡,以及在改善胰岛素敏感性中起重要作用,miR-185可能成为非酒精性脂肪肝和胰岛素抵抗的新靶点和治疗非酒精性脂肪肝药物作用新靶标。     

miR-487b在改善慢性心力衰竭中的作用机制

为了考察miR-487b在慢性心力衰竭发病过程中的作用及机制,本研究检测了miR-487b在慢性心力衰竭患者中的表达情况,通过冠状动脉左前降支结扎建立大鼠心力衰竭模型,并通过转染miR-487b模拟物和miR-487b抑制剂来调控其表达。研究发现,慢性心力衰竭患者心肌组织中mir-487b的表达水平显著低于健康人(p0.05)。此外,慢性心力衰竭模型大鼠心肌组织中miR-487b的表达也显著下调(p0.05)。上调miR-487b则有效抑制了慢性心力衰竭大鼠心肌细胞肥大,减少了胶原纤维和炎症细胞浸润程度(p0.05)。上调miR-487b还有效减少了心肌细胞凋亡(p0.05)。上调miR-487b则可显著升高大鼠心肌组织中SOD水平并降低MDA水平。采用ELISA法检测慢性心力衰竭患者和健康人血清中IL-33和ST2的水平,发现慢性心力衰竭患者和大鼠中的IL-33和ST2的水平均显著升高。此外,上调miR-487b可显著抑制IL-33和ST2mRNA和蛋白的表达。本研究表明miR-487b在慢性心力衰竭患者和大鼠中均显著下调;上调miR-487b的表达可显著改善慢性心力衰竭大鼠的心脏功能,抑制心肌纤维化和细胞凋亡,提高抗氧化能力;miR-487b可能通过抑制IL-33/ST2信号通路来发挥心脏保护作用。     

三种乳杆菌对小鼠溃疡性结肠炎的缓解作用及机制CSCD

目的探讨3株乳杆菌(植物乳植杆菌、罗伊氏粘液乳杆菌和副干酪乳酪杆菌)对小鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的缓解作用及机制。方法采用葡聚糖硫酸钠(DSS)法构建C57BL/6J小鼠急性UC模型,并在造模前后均给予乳杆菌干预治疗;测量各组小鼠体质量、结肠长度;采用蛋白免疫印迹技术检测小鼠结肠上皮紧密连接蛋白表达水平;HE染色观察分析小鼠结肠组织病理变化;16S rDNA高通量测序分析小鼠肠道菌群组成情况;转录组测序分析小鼠结肠组织基因表达差异。结果与DSS模型组相比,植物乳植杆菌干预组(t=2.285,P=0.045)和副干酪乳酪杆菌干预组(t=2.360,P=0.040)小鼠体质量增加显著;植物乳植杆菌干预组(t=2.335,P=0.042)结肠长度显著增加;植物乳植杆菌干预组(ZO-1:t=4.975,P=0.003;Occludin:t=2.629,P=0.034)和罗伊氏粘液乳杆菌干预组(ZO-1:t=3.523,P=0.013;Occludin:t=2.525,P=0.040)紧密连接蛋白表达水平显著上调。乳杆菌干预组结肠黏膜组织病理损伤得以缓解,肠道菌群丰度及多样性降低得以改善。植物乳植杆菌干预组vs DSS模型组共有69个差异表达基因,KEGG pathway分析提示差异基因富集于免疫调节、内分泌与消化系统相关疾病等通路上。结论3株乳杆菌对UC小鼠展现出较好的缓解作用,其作用机制与修复肠道屏障、调节肠道微生物群结构和降低肠道炎症水平相关。     

应用体内外实验筛选可降低牛乳β-乳球蛋白过敏的乳杆菌

【目的】通过体内外实验评估5种乳杆菌缓解牛乳β-乳球蛋白(BLG)过敏的作用,为今后筛选具有抗过敏活性的乳杆菌提供参考。【方法】首先体外分析5种活的/热致死的乳杆菌促进小鼠原代淋巴细胞分泌细胞因子(CK)IFN-γ和IL-4的水平,随后应用小鼠BLG过敏模型评估这5种乳杆菌抑制过敏的能力。将实验动物随机分为空白组、BLG致敏组和5种活的/热致死乳杆菌组。采用ELISA法检测各组小鼠淋巴细胞分泌Thl/Th2型CK的水平,并测定小鼠血清中总IgE和BLG特异性IgE的含量。【结果】在体外可促进淋巴细胞分泌IFN-γ、抑制IL-4,使其IFN-γ/IL-4比值(代表Thl/Th2细胞平衡)显著高于正常对照组(P<0.05)的乳杆菌,在体内实验中也能有效提高致敏小鼠淋巴细胞的IFN-γ/IL-4分泌率,并显著降低致敏小鼠血清中总IgE和BLG特异性IgE的水平(P<0.05)。相反,在体外的IFN-γ/IL-4比值较低的乳杆菌,不能缓解特异性IgE抗体介导的食物过敏反应。【结论】基于乳杆菌体外刺激小鼠原代淋巴细胞分泌Th1/Th2型CK的结果,可以预测菌株在体内具有可通过纠正Th2占优势的Th1/Th2细胞失衡,下调抗体分泌量,缓解小鼠BLG过敏症状的能力。     

糖皮质激素对小鼠急性肝衰竭的干预作用研究

摘要 目的：探讨糖皮质激素对小鼠急性肝衰竭（Acute liver failure, AHF）的干预作用。方法：通过腹腔注射D-GaIN/LPS构建AHF小鼠模型,并随机分为对照组、AHF模型组（AHF组）和糖皮质激素处理急性肝衰竭组（GCs + AHF组）。通过全自动生物化学分析仪检测小鼠血清中ALT、AST、TBA、TBIL、DBIL水平;采用ELISA试剂盒测定小鼠血清中IL-1β、TNF-α、IL-6水平;通过定量PCR检测mRNA表达水平;苏木精-伊红（H&E）染色检测肝组织病理学情况;免疫组织化学检测肝组织中SOX9表达水平;蛋白质印迹检测Hedgehog信号通路关键蛋白因子的表达水平。结果：与对照组相比,AHF组小鼠血清ALT、AST、TBA、TBIL、DBIL、MDA、TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著升高,SOD、GSH和CAT活性水平显著降低（P＜0.01）;与AHF组相比,GCs+AHF组小鼠血清中ALT、AST、TBA、TBIL、DBIL、MDA、TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著降低,SOD、GSH和CAT活性水平显著升高（P＜0.01）。H&E染色结果显示,对照组小鼠的肝脏切片显示正常的细胞结构,AHF组小鼠出现广泛的细胞坏死和炎性细胞浸润;与AHF组相比,GCs + AHF组小鼠中细胞坏死和炎性细胞浸润等病理变化显著减弱。免疫组织化学结果显示：与对照组相比,AHF小鼠肝脏中SOX9的表达水平显著升高（P＜0.01）;与AHF组相比,GCs+AHF组小鼠肝脏中SOX9的表达水平显著降低（P＜0.01）。Western blotting结果显示,与对照组相比,AHF组小鼠的Hedgehog通路关键蛋白因子Shh、Ptch-1和Gli-1蛋白表达水平显著升高（P<0.01）;与AHF组相比,GCs+AHF组的Shh、Ptch-1和Gli-1蛋白表达水平显著降低（P<0.01）。结论：GCs可有效改善AHF小鼠肝功能指标,降低炎性因子表达,提高急性肝衰竭小鼠抗氧化能力,并使Hedgehog通路关键蛋白因子表达恢复正常。     

荷叶总生物碱激活肝脏AMPK/Nrf2通路缓解对乙酰氨基酚诱导的小鼠急性肝损伤

为探讨荷叶总生物碱(TAL)对对乙酰氨基酚(APAP)所致小鼠急性肝损伤的保护作用及可能机制,小鼠被随机分为正常组,模型组和TAL低、高剂量组(30、100 mg/kg),连续灌胃给药七天后,除正常组外,其余各组腹腔注射300 mg/kg的APAP诱导急性肝损伤。12小时后,收集各组小鼠的血清与肝脏样本,进行后续实验。结果显示,与模型组相比,TAL可显著降低血清中的ALT和AST活性,下调肝组织中TNF-α、IL-1β、IL-6和MDA含量,上调肝组织中SOD、CAT、GSH-Px和GSH的水平。此外,TAL还明显改善了APAP诱导的小鼠肝组织病变。在TAL的作用下,肝内AMPK磷酸化水平提高,Nrf2蛋白入核,HO-1和GCLC基因表达上调。综上所述,TAL对APAP诱导的急性肝损伤具有保护作用,其机制可能与激活AMPK/Nrf2通路相关。     

猪表皮生长因子在植物乳杆菌中的表达及其活性检测

为获得一株高效表达猪表皮生长因子(p EGF)的重组植物乳杆菌,并检测其生物活性,从仔猪肠道内容物中分离植物乳杆菌,选择其中生物活性最强的一株(Lp-1)为宿主。以商品化乳杆菌表达载体p IAβ8为骨架,干酪乳杆菌超强组成型启动子SCP、M6前体蛋白信号肽SP、猪表皮生长因子p EGF等为元件,构建表达p EGF的植物乳杆菌重组表达载体p SCPSE。用电转化方法 (2.0 k V,2 000?,25μF,4.0 ms)将重组载体p SCPSE转化入宿主菌Lp-1中获得重组植物乳杆菌Lp-p SCPSE。以Tricine-SDS-PAGE法和p EGF ELISA特异性检测试剂盒检测目的蛋白的表达;用培养12 h的阳性转化子菌体给刚断奶的BALB/c小鼠灌胃,2次/d,连续10 d,以断奶小鼠的体重、肠绒毛长度和隐窝深度的变化为指标,检测目的蛋白的生物活性。Tricine-SDS-PAGE检测和小鼠实验结果显示,重组植物乳杆菌的培养上清中出现6 k Da左右p EGF的特异性条带,且表达p EGF的重组植物乳杆菌能显著增加(P0.05)断奶小鼠的体重、肠绒毛高度和肠隐窝深度。结果表明,p EGF在植物乳杆菌中成功表达,且具有良好的生物学活性。     

SP-A、CRP和PCT在新生儿肺炎中的变化及诊断意义

为了考察肺泡表面活性物质蛋白A (SP-A)、血清C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)在新生儿肺炎中的变化及诊断意义,本研究检测了80例肺炎新生儿和40例健康新生儿血清SP-A、CRP和PCT水平。然后建立了肺炎克雷伯菌诱导的肺炎小鼠模型,每天按照200 mg/kg的剂量对小鼠腹腔注射SP-A蛋白溶液,共注射3 d。研究显示,肺炎新生儿血清中SP-A水平显著低于健康新生儿,而CRP和PCT水平均显著高于健康新生儿(p0.05)。肺炎新生儿血清SP-A与CRP和PCT水平显著负相关(p0.05),CRP和PCT水平显著正相关(p0.05)。SP-A、CRP和PCT联合诊断的敏感度、特异性和曲线下面积依次为0.864、0.829和0.845,均高于单独指标诊断。SP-A处理可显著减轻肺炎小鼠肺组织的病理改变,并显著升高肺组织和血清中的SP-A水平,降低血清CRP和PCT水平。本研究表明,肺炎新生儿血清SP-A水平明显降低,而CRP和PCT水平明显升高。SP-A、CRP和PCT联合检测对新生儿肺炎的诊断价值高于单独指标诊断。通过腹腔注射SP-A蛋白溶液可显著抑制小鼠肺组织病变,并降低血清CRP和PCT水平,从而抑制炎症反应。     

基于Hippo信号通路的野黄芩苷抗结直肠癌HCT116细胞的研究CSCD

本文旨在探究野黄芩苷(scutellarin,SCU)对人结直肠癌HCT116细胞的作用及机制。不同浓度SCU处理人结直肠癌HCT116细胞,采用显微镜观察法、MTT法、平板克隆形成试验、细胞划痕试验、Hoechst 33342/PI双染法、流式细胞术、qRT-PCR以及Western blot等多种手段进行检测。结果显示,SCU能明显改变HCT116细胞形态,降低细胞活力;抑制HCT116细胞克隆和迁移(P<0.01);诱导细胞核致密浓染,促进细胞凋亡,使细胞凋亡率显著增加(P<0.05或P<0.01)。机制研究结果表明,SCU能显著上调caspase-9、caspase-3的mRNA表达水平(P<0.01),下调Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平(P<0.01),上调Bax的mRNA和蛋白表达水平(P<0.01)。此外,SCU能明显升高MST1、LATS1的mRNA和蛋白表达量(P<0.05或P<0.01),升高p-YAP(Ser127)的蛋白表达量(P<0.05或P<0.01),降低YAP1、TAZ和下游靶点c-Myc的mRNA和蛋白表达量(P<0.05或P<0.01)。综上所述,SCU能通过调节Hippo信号通路的活性,抑制HCT116细胞的增殖和迁移,并诱导细胞凋亡,从而发挥抗结直肠癌的作用。     

miR-27b通过靶向FZD7和Wnt信号通路抑制口腔鳞癌细胞增殖

为了揭示microRNA-27b (miR-27b)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma, OSCC)细胞增殖中的作用及其潜在的分子机制。本研究通过MTT测定检测细胞增殖,通过qRT-PCR检测miR-27b和Frizzled7 (FZD7)的mRNA表达水平,通过蛋白质印迹分析检测FZD7的蛋白表达水平,使用荧光素酶报告基因测定法测定miR-27b和FZD7之间的关系以及Wnt信号通路的活性。研究显示,与对照相比,OSCC细胞系中miR-27b的表达显著降低(p0.05)。miR-27b的过表达显著抑制OSCC细胞增殖(p0.05)。miR-27b可以靶向和抑制FZD7的表达(p0.05)并降低Wnt信号通路的活性。miR-27b可通过抑制FZD7和Wnt信号通路来抑制OSCC细胞增殖。因此,我们的研究结论初步表明,miR-27b的低表达可能有助于OSCC的肿瘤发生,其有望成为OSCC的新型分子治疗靶标。     

抑瘤素M受体对慢性自身免疫性荨麻疹发病机制的影响

本研究旨在探讨抑瘤素M受体(OSMR)在慢性自身免疫性荨麻疹(CAU)发病机制中的作用。本研究分别检测30例CAU患者及30名健康受试者的皮肤组织中OSMR、JAK和STAT3的表达,研究显示OSMR、JAK和STAT3在CAU患者皮肤组织中高表达(p<0.05)。转染OSMR-siRNA可显著降低CAU模型小鼠血清炎症因子IL-1、IL-6和IFN-γ水平,而转染JAK/STAT3信号通路激动剂Tyr705则可显著升高炎症因子水平(p<0.05)。转染OSMR-siRNA可显著降低CAU小鼠瘙痒次数、瘙痒时间和嗜酸性粒细胞计数,而转染Tyr705则可显著升高CAU小鼠瘙痒次数、瘙痒时间和嗜酸性粒细胞计数(p<0.05)。转染OSMR-siRNA促进了CAU小鼠上皮细胞的增殖能力,并抑制了细胞凋亡(p<0.05)。而转染Tyr705则抑制了CAU小鼠上皮细胞的增殖能力,并促进了细胞凋亡(p<0.05)。转染OSMR-siRNA下调了上皮细胞中OSMR、JAK和STAT3的表达,而转染Tyr705则上调了OSMR、JAK和STAT3的表达(p<0.05)。总之,本研究表明OSMR基因在CAU患者皮肤组织中高表达。OSMR基因沉默可通过抑制JAK/STAT3信号通路来抑制炎症因子表达及嗜酸性粒细胞数量,促进上皮细胞增殖并抑制细胞凋亡。     

双歧杆菌对中国对虾原肌球蛋白致敏小鼠的免疫调控作用

【目的】比较研究婴儿双歧杆菌(Bifidobacterium infantis 13.085)对中国对虾原肌球蛋白致敏BALB/c小鼠预防与治疗过敏反应的差异,探究其对致敏小鼠Treg/Th17细胞平衡及相关细胞因子的影响。【方法】采用硫酸铵盐析及等电点沉淀法纯化中国对虾原肌球蛋白(TM),将中国对虾TM和弗氏佐剂混合液腹腔注射诱发BALB/c小鼠致敏,建立动物过敏模型。将实验小鼠随机分为正常对照组、治疗对照组、双歧杆菌治疗组、预防对照组和双歧杆菌预防组。观察分析小鼠过敏症状(腹泻、肺组织HE染色比较、称重法测定小鼠体重和脾脏脏器系数变化),采用ELISA测定小鼠血清中特异性IgE、IgG2a和组胺的含量,采用流式细胞术测定脾脏T淋巴细胞亚群(Treg、Th17)数量,采用荧光定量PCR测定脾脏中Treg型和Th17型细胞因子和转录因子的表达量。【结果】纯化得到中国对虾原肌球蛋白纯度为84.93%,得率为60.88%。体内试验表明,双歧杆菌治疗组和预防组相比于对照组,腹泻和过敏症状均有明显的缓解;不同时期的双歧杆菌干预均对过敏小鼠肺组织症状有明显的改善作用,且可降低过敏小鼠的脾脏脏器系数。第56天实验周期结束后发现,相比预防对照组和治疗对照组,双歧杆菌预防组和治疗组小鼠血清中特异性IgE和组胺含量显著降低(P0.05),脾脏Treg/Th17比值显著升高(P0.05),Th17型细胞因子IL-17A mRNA表达水平显著降低(P0.01);双歧杆菌治疗组相对于治疗对照组,Treg型细胞因子CD25mRNA表达水平显著升高(P0.01)。此外,双歧杆菌治疗组血清特异性IgE及IL-17A mRNA转录水平显著低于双歧杆菌预防组(P0.05),而Treg/Th17比值及CD25 mRNA转录水平显著高于预防组(P0.05)。【结论】双歧杆菌13.085能有效缓解小鼠过敏症状,且治疗免疫调控效果优于预防效果,其作用可能通过平衡Treg/Th17细胞亚群数量,促进Treg型细胞因子表达而抑制Th17型细胞因子分泌,从而阻断炎性抗体及组胺释放。     

植物乳杆菌后生元缓解小鼠沙门氏菌感染的作用效果及机理

【目的】研究不同剂量的植物乳杆菌后生元缓解小鼠伤寒沙门氏菌(Salmonellaenterica Typhimurium, ST)感染的作用效果及分子机制。【方法】选择60只5周龄的C57BL/6小鼠,分为5组：Control、ST、CFS-L+ST、CFS-M+ST和CFS-H+ST,后三组分别灌胃低、中、高剂量植物乳杆菌后生元,即50、100和200μL的无细胞培养上清(cell-free culture supernatant, CFS)预处理21 d,然后在第22天灌胃3×108 CFU ST进行攻毒,3 d后采样。【结果】与对照组相比,饲喂低、中剂量CFS小鼠体重增长无明显变化,而高剂量组体重显著降低(P<0.05)。中、高剂量CFS预处理组可显著缓解沙门氏菌感染引起的小鼠体重损失(P<0.05);饲喂3种剂量的CFS均可显著降低ST在小鼠肝脏、脾脏、结肠和脑组织的细菌移位数量(P<0.05),并缓解结肠和脾脏病理损伤。ST攻毒显著降低盲肠乙酸和丁酸含量,而中剂量CFS预处理组具改善趋势,但差异不显著(P>0.05)。与ST组相比,预饲中剂量CFS可通...     

中药脂肝宁预防酒精性脂肪肝的实验研究

目的探讨中药脂肝宁预防酒精性脂肪肝的作用机理。方法应用酒精灌胃方法建立大鼠酒精性脂肪肝模型,造模同时给予中药脂肝宁(ZGN)药物干预,以硫普罗宁(TPN)为对照,检测血清肝功能和肝匀浆甘油三酯(TG)、氧自由基(ORF)、抗超氧阴离子(ASOA)、超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)含量,并对大鼠肝脏行病理学检查。结果酒精灌胃12周后大鼠形成酒精性脂肪肝,中药脂肝宁高浓度组血清门冬氨酸氨基转移酶(AST)和肝匀浆TG、ORF及MDA含量显著降低,而ASOA和SOD含量升高(P<0.05),肝脏脂肪变明显改善。结论中药脂肝宁通过抑制氧化应激、稳定肝细胞膜、抑制脂质过氧化来改善酒精所致肝细胞脂肪变性。