组织与原生质体培养

931350桩物的单克隆抗体工程〔英〕/Hiatt,A.…/FEBS Lett一1992,307(1)。一71~75〔译自DBA,1992,11(20),。z一1135。〕 从以下方面综述了单克隆抗体(MAb)工程的研究状况:植物的转化及抗体的生物合成,F。区的特征,使植物表达抗体的远景策略i以及铸物一衍生MAb的应用。产生MAb的     

Medarex的双抗体优于单一MAb

将两个分离的单克隆抗体(MAb)连接起来制成的 Bispecific~(TM)抗体能起到其中任何一个抗体所起不到的作用。对此,Medarex,Inc.(Princeton,NJ)似乎掌握了足够的证据。特别是这种双特异性抗体能体外保护免疫细胞不受 HIV 侵染,而任何一个 MAb 则做不到。此项双特异性技术包括将两个结合不同抗原的 MAb 连接起来,因此,所产生的单一分子能结合两种抗原。治疗 HIV 侵染的双特异性抗体由结合 AIDS 病毒 gp41表面蛋白的 MAb 和结合巨噬细胞上 Fc 受体的MAb 组成。这种受体一旦被结合,巨噬细即摧毁结合另一种抗体的细胞或病原体。HIV 就是这种情     

双单克隆抗体共同作用抵销HIV

研究人员偶然发现了抵销人免疫缺失病毒(HIV)的方法,其效率比用单一抗体高100倍。他们发现,两种作用于病毒表面不同表位的单克隆抗体(MAb)协同作用抑制HIV。目前,从事该研究的科学家正在寻找商业伙伴,以便扩大生产这两种MAb,并进行临床前和后继临床研究。该项目的离体研究在Public Health Research Institute(PHRI) (New York,NY)和Memorial Sloan-Kettering Cancer Center(SKCC)(New York,NY)进行。研究者在设计实验时发现,有两种抗体结合病毒的糖蛋白120(gp120)分子,但结合部位不同,一种是4117C,结合gp120     

基于人ANP32A蛋白的C型流感病毒聚合酶纯化及PB2蛋白单克隆抗体的高效制备

C型流感病毒是感染人的重要呼吸道病原,也可感染猪、狗等动物。聚合酶是C型流感病毒复制的核心,是研究病毒复制机制的重要靶标。然而目前没有商品化针对C型流感病毒聚合酶的单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb),一定程度制约了相关研究的开展。为了制备C型流感病毒碱性聚合酶2(polymerase basic protein 2,PB2)的MAb,本研究依据人酸性核磷酸蛋白32A (human acidic nuclear phosphoprotein 32 family member A,huANP32A)与流感病毒RNA依赖性RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)相互作用的特性,利用免疫共沉淀技术在真核表达系统中通过融合Flag标签的huANP32A (huANP32A-Flag)纯化并富集C型流感病毒RdRp (PB1、PB2、P3),并以之作为免疫原免疫BALB/c小鼠,利用间接ELISA与Western blotting方法筛选出6株(7B11-5、8A4-5、13D9-6、8D4-1、8D4-3、9F9-4)能稳定分泌识别PB2 MAb的阳性杂交瘤细胞株。经鉴定7B11-5、8A4-5、8D4-1和8D4-3抗体亚型为IgG1型,13D9-6抗体亚型为IgG2a型,9F9-4抗体亚型为IgG3,轻链均为κ链。进一步选取1株效价高的杂交瘤细胞8D4-1来制备腹水,测定收集的小鼠腹水抗体效价为1︰ 64 000。Western blotting结果显示,制备的MAb能够与C型流感病毒PB2发生特异性免疫反应;激光共聚焦试验结果表明,该MAb可准确检测C型流感病毒PB2的亚细胞定位。本研究通过huANP32A蛋白高效富集了C型流感病毒的RdRp,并以该复合物为抗原制备的PB2 MAb具有较好的特异性,为C型流感病毒聚合酶检测、结构分析及机制研究奠定了基础。     

细胞培养生产人抗体研究的一些进展

细胞培养生产抗体的技术,已广泛地应用在基础研究和实际应用的许多方面。但这些抗体大多来自动物细胞而缺乏临床治疗价值。近年开始出现了一些细胞培养产生特异性人抗体的报道。本文简介这方面的一些进展。     

动物细胞培养及单克隆抗体

950137CHO细胞衰达扰-HIV一1人簟克隆抗体[会,英]/Rueker,F.…/Ann.N.Y.Acad.Sci.一1991,646.一212～219[译自DBA,1992,11(13),92-07605] 以抗HIV一1的人单克隆抗体(MAb)为模型检测了8种哺乳动物表达载体,以便高水平地表达抗体cDNA。从人异型杂交瘤3D6中分离出多聚腺替RNA。3D6产生抗HIV-1 gp41的MAb,此MAb可用于合成cDNA。构建了cDNA库,并鉴定了全长克隆的重链和轻链,将该cDNA的重链和轻链分别导入哺乳动物表达载体,质粒pRcRSV、pRcCMV和pMAMgpt,分别得到成对的表达载体质粒pRcRSV3D6HC+pRcRSV3D6LC,pR-cCMV…     

单域抗体与抗感染免疫

随着分子生物学技术的发展及抗体研究的不断深入,单域抗体(single domain antibodie,sdAb)的研究已成为肿瘤靶向治疗研究领域的热点之一。作为实验研究和治疗应用的重要工具与制剂,单域抗体在调节免疫功能,中和毒素和抗微生物感染等方面具有广阔的应用前景。     

表皮葡萄球菌 YycG单克隆抗体抗生物膜活性的研究

YycFG双组分信号转导系统调控葡萄球菌细胞壁合成、代谢及生物膜形成,PAS是组氨酸激酶YycG的胞外信号感应区域。本研究针对胞外PAS区域制备抗YycG‐PAS单克隆抗体（YycG‐PAS MAb ）。免疫鉴定结果表明,YycG‐PAS MAb可与重组YycG‐PAS蛋白和表皮葡萄球菌菌体 YycG蛋白结合,属于IgG2a亚型,效价为log 215。YycG‐PAS MAb（80μg／ml）与表皮葡萄球菌 RP62A菌株共培养24 h ,对细菌生物膜形成的抑制率达46．5％,与 mIgG （80μg／mL ）组相比有显著差异（ P＜0．05）。YycG‐PAS MAb （80μg／ml）与低浓度万古霉素（1μg／ml）联用可增强对24 h细菌生物膜的抑制作用,抑制率由57．6％提高至93．0％（P＜0．01）。YycG‐PAS MAb对浮游状态表皮葡萄球菌的生长及存活无显著影响。本研究为YycG‐PAS MAb在抗生物膜感染中的潜在应用价值奠定了一定基础。     

牛病毒性腹泻病毒E2蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定

为制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)糖蛋白E2单克隆抗体(MAb),利用原核表达并且纯化的重组糖蛋白E2(rE2)免疫BALB/c小鼠,取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合.采用以BVDV为检测抗原的间接ELISA筛选阳性细胞克隆,经3次克隆纯化后获得2株稳定分泌抗E2特异性MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为4E3与1G11.用4E3与1G11杂交瘤细胞株接种BALB/c小鼠制备腹水,采用rE2及BVDV包被的ELISA测得的效价分别是6.21×106和6.83×105及6.83×105和7.5×104.间接ELISA、Western blot、IFA试验表明两株杂交瘤细胞所分泌的MAb具有良好的反应性和特异性.经抗体亚类鉴定4E3与1G11均为IgM/K.特异性试验表明4E3与1G11这2株MAb均不与牛传染性鼻气管炎病毒、牛副流感病毒3型、牛腺病毒3型反应;其中4E3不与猪瘟病毒反应,而1G11则可与猪瘟病毒发生交叉反应,这种反应特性可试用于BVDV与猪瘟病毒的鉴别诊断.所制备的4E3与1G11 MAb可以用于BVDV抗原的检测,为建立检测BVDV E2蛋白血清抗体的ELISA奠定了基础.     

抗体工程研究进程及在控制病毒感染中的作用

多年来研究人员一直在寻求单克隆抗体在病毒性疾病中的临床应用。鼠源单克隆抗体可能会引发患的免疫反应,降低其疗效,故研究人员相继开发了嵌合抗体、改型抗体、噬菌体抗体及利用基因工程方法改造植物和动物产生人源抗体以应用于临床治疗。抗体工程在控制多种病毒感染性疾病方面已经发挥了一定作用并将发挥重要作用。     

体外展示技术及其在抗体工程中的应用

体外展示技术包括核糖体展示技术、mRNA展示技术、DNA展示技术,是在无细胞蛋白质表达体系内将基因型和表型通过一定的方法连接在一起,体外高通量的筛选多肽和蛋白质的技术。抗体的产生是一个不断选择的过程,利用体外展示技术在体外选择针对某一抗原的抗体分子,并结合基因工程技术对抗体进行改造,以产生高亲和力、高特异性的抗体。体外展示技术的研究和应用已越来越广泛,有望成为下一代的抗体制备技术。     

肿瘤自身抗体标志物的研究进展

肿瘤发生时,机体免疫系统针对肿瘤相关性抗原(tumor associated antigens,TAAs)产生免疫反应和自身抗体。大量研究表明,自身抗体在肿瘤发生早期可在血液中被检测到,因此在肿瘤早期诊断方面具有较大应用潜力。另外,自身抗体水平在肿瘤手术后显著性下降,因此自身抗体也可用于术后监测,并且由于肿瘤的异质性和个体差异,不同病人的自身抗体也可能存在差异,因此需以精准医疗的思想实施个体化监测。但目前,由于缺乏有效的工具,对肿瘤自身抗体的研究还较为落后,系统性地发现和鉴定肿瘤自身抗体存在较大挑战。蛋白质芯片,作为一个涵盖大量不同蛋白的抗原库,是一个全新的工具,为发现肿瘤自身抗体提供了有力的支撑。就肿瘤自身抗体标志物的应用潜力和研究方法进行了总结和评论。     

噬菌体抗体库技术的应用现状

噬菌体抗体库是抗体组合文库技术和噬菌体表面展示技术相结合形成的一项新技术,近年来已经逐渐成为基因工程抗体研究的关键技术,被广泛应用于生命科学的许多方面,本文着重对该在医学微生物学,自身免疫性疾病,肿瘤研究以及疾病诊治等方面的应用情况进行综述,同时也对其应用前景进行预测。     

抗体技术的发展现状及其在肿瘤治疗中的应用

抗体技术有一百多年的历史,单克隆抗体有近30年的历史,但由于抗鼠抗体（HAMA）的形成,使抗体在人体中的应用受到局限,近年来由于DNA重组技术的发展,利用基因工程技术可以实现将鼠抗体人源化或生产人源抗体,克服HAMA,为抗体的临床应用提供了新的研究方法和思路,本分别介绍抗体技术的发展状况及其在治疗肿瘤方面的应用。     

国产羟基磷灰石纯化单克隆抗体的探讨

据文献报道,用羟基磷灰石(HA)柱层析纯化单克隆抗体(MAb)具有简便快速、低成本、高效以及适用于各类和亚类免疫球蛋白等优点。国内近年来已有一些实验室开展这方面的工作,但迄今所见文献中所采用的HA材料均系美国Bio-Rad公司的产品,尚未见采用国产HA纯化MAb的报道。我们以市售国产HA制成层析柱,对本室研制的抗促卵     

单链抗体在抗肿瘤和抗感染免疫治疗中的应用

单链抗体（single-chain antibody fragment, scFv）保持了亲本抗体的抗原识别特异性及亲和活性的最小功能性抗体片段,其良好的可塑性及广泛作用已使之成为研究的热点。scFv相关的研究成果不仅改进了已有的肿瘤和病毒感染诊治方法,还提出了新颖的抗肿瘤、抗感染思路,如靶向肿瘤新生血管及细胞外基质相关蛋白的提出改变了以往仅针对肿瘤细胞的狭隘治疗思维。文章综述了scFv在抗肿瘤和抗感染方面的研究及应用。     

单克隆抗体在淋病奈瑟氏菌研究和感染诊断中的应用

淋病是全球性疾病,对于淋球菌的研究已进入分子水平,本文从以下３个方面综述了单克隆体抗体在淋球菌研究和感染诊断中的应用：１．对于脂寡糖的研究２．对于淋球菌外膜蛋白Ⅰ的研究３．单克隆抗体在淋病流行病学和诊断中的应用。     

大肠杆菌系统表达抗体片段

抗体在生物学研究以及在医学和工业应用方面的作用越来越重要,这是因为几乎所有物质都能产生抗体,并且抗体对靶物质有相当高的专一性和亲合性。抗体在与抗原结合后还有     

基因专一性鸡卵黄抗体(IgY)的研究及应用

用抗原免疫鸡,从鸡卵黄中获取特异多克隆IgY抗体,是一条高产量、低成本的简便快速途径。IgY与哺乳动物抗体IgG相比具有许多突出的优点,使IgY在现代免疫学中已得到广泛应用。采用基因免疫方法制备的基因专一性IgY抗体,在免疫分析、寻找药靶和生物标记物、制备新抗体等方面,必有进一步的应用。     

牙龈卟啉单胞菌血凝素2与氯化血红素结合位点分析

目的 通过竞争性ELISA方法明确牙龈卟啉单胞菌血凝素2(Porphyromonas gingivalis hemagglutinin-2,Pg HA-2)与氯化血红素结合的多肽位点,为牙周病保护性抗体的制备奠定基础.方法 人工合成疑为Pg HA-2氯化血红素结合位点的多肽片段,制备抗Pg HA-2单克隆抗体(MAb QB),通过间接竞争性ELISA,进一步分析血红素特异性结合位点.结果 Pg HA-2氯化血红素结合位点的氨基酸序列为DGFPGDHYAVMISK.MAb QB可以抑制Pg HA-2与氯化血红素结合.结论 明确了Pg HA-2氯化血红素结合位点的氨基酸序列,确定了Pg HA-2氯化血红素结合位点的位置.为今后Pg HA-2氯化血红素结合位点的鉴定、功能结构区分析和多肽疫苗的制备奠定基础.