免疫酶技术在家蚕病理研究上的应用

<正> 免疫酶技术是60年代发展起来的一项灵敏的免疫测定技术。近几年来,我们把免疫酶技术应用于家蚕病理方面,进行了家蚕浓核病毒(DNV)的定位研究和不同来源病毒的鉴定,建立了酶联对流免疫电泳早期诊断技术,取得了良好的结果,现介绍如下。 一、高纯度病毒抗原及其抗血清的制备取浓核病蚕中肠去除内容物,加磷酸缓冲液(0.05mol、pH7.2)制成匀浆,在5℃中12000rpm离心去沉淀,取上清液与等体积的冷氯仿混合,振摇离心(5000rpm)后收集上层病毒     

人肝脏特异的F抗原分离纯化及其抗血清制备

取新鲜的人肝脏,充分洗涤,制备匀浆,上清液经Sephadex-G200、DE52层析,聚丙烯酰胺凝胶电泳,得到电泳纯Ｆ抗原,并免疫制备抗血清.     

从小白鼠血液制备染色体的快速方法

每只小白鼠注射(I.P)0.1毫升秋水仙素(0.6毫升/毫升),四小时后杀死。从心脏取血,用肝素抗凝。取10滴左右血液置于一刻度离心管中,管内预先装好3—5毫升0.7％柠檬酸钠,放在37℃下温浴,摇匀后加一滴稳定的玻璃酸酶(150N.F.单位/毫升)。在37℃下温浴20分钟。用温浴的最后五分钟配制3∶1甲醇-醋酸固定液。温浴完毕时加2滴固定剂并温和地摇匀。600转离心机离心5分钟弃去上清液(留1毫升左右)再加3毫升固定剂,加塞后放置冰箱30分钟。在600转离心机离心5分钟弃去上清液(留1毫升),再加预冷固定液3毫升,用吸管来回搅匀。离心弃去上清液。再加2毫升冷固定剂,并在冰箱中过夜。第二天离心后弃去上清液,用甲醇洗,吸去甲醇,取一     

应用协同凝集技术快速筛选霍乱弧菌粪便标本

<正>对于任何传染病贵在诊断迅速,尤其象霍乱这样传播迅速的疾病。协同凝集这一类快速诊断方法在一些传染病的应用中已肯定是成功的、有效的。 制备10％的葡萄球菌CowanI菌悬液、抗血清致敏。致敏过程:霍乱多价抗血清和小川型(Ogwan)抗血清0.1ml分别加入10％葡萄球菌悬液1ml中,将其混匀,置室温30～45分钟,然后离心;沉淀物中的致敏葡萄球菌在磷酸盐缓冲盐水(含0.1％叠氮钠)中再悬浮,使成2％浓度。试验发现     

用固相放射免疫方法分析流行性乙型脑炎病毒抗原

用固相放射免疫方法对3株流行性乙型脑炎病毒(JEV)进行了抗原分析,其中日本分离的2株(中山予研株,Mie 44-1株),中国分离的1株(A_2株)。为了纯化抗原,先将3株病毒的小鼠免疫血清分别加入到聚脂纤维柱,进行免疫亲合层析,对照抗原同样处理。固相放射免疫测定是将纯化病毒抗原与对照抗原先用超声波(10kc30秒)处理,使之均质化。铁珠(直径为4.2mm)计数后,放入4单位抗原悬液中,4℃下作用60分钟,然后将抗原包被的铁珠加入稀释的小鼠抗血清中,4℃下作用60分钟,用磁性     

反向炭凝法检测水稻普通矮缩病毒带毒体

本文探讨了水稻普通矮缩病毒(RDV)抗血清制备免疫抗体的方法及其对带毒体的检测。用化学纯活性炭为载体,制备RDV抗血清免疫炭抗体,抗血清需要纯化处理,具有结合抗原活性的抗体碎片[F(ab)2]优于免疫丙球蛋白(IgG)。F(ab)2浓度以每毫升约1毫克左右为宜,致敏条件以22—30℃碾磨结合30分钟为优。     

一种用于染色体观察的改良绒毛细胞直接制备法

为弥补羊水检查时间过晚之不足,1984年 Simoni利用绒毛标本直接制备法观察染色体获 得成功,此后,即日益为人们所注目。我们改良 了绒毛细胞直接制备方法,以胶原酶代替乙酸 处理,对绒毛细胞直接制备法（简称乙酸法）和 改良法（简称胶原酶法）进行了比较。大致过程 如下： 取妊娠6-7周人流绒毛组织50mg左 右,严格挑选后,生理盐水洗净,移人含最终浓 度0.5,ug/ ml秋水仙素的RPMI 1640培养液中 孵育1小时（pH7.2, 370C),然后分成两份。一 份按乙酸处理法进行制片：(1)去除培养液,加 3m11.5外拘椽酸钠溶液低渗15分钟;(2）加人 数滴3:1的甲醇：冰乙酸预固定10分钟;(3）吸 弃固定液,重复固定巧分钟;(4)吸弃固定液, 加入1m160并乙酸水溶液,处理2分钟,即追加 纯甲醇2ml; (5)吸取细胞悬液于离心管内离心 (1500-1800rpm); (6）冰水滴片,风干,Giemsa 染色。另一份按改良的胶原酶法制备染色体,大 致如下：(1)弃培养液加人15ng/ml胶原酶4ml, 孵育15-20分钟（370C); (2）加人4m1生理盐 水,离心（1000rpm),分钟,弃上清液,经0.75% 氯化钾4 ml低渗20分钟（370C),用甲醇冰醋 酸固定液lml预固定后,依上法离心,弃上清 液;(3）甲醇冰醋酸（3:1)重复固定15分钟,混 匀后自然沉降,吸上层细胞悬液离心,如此重复 二次后,再固定15分钟,气干法制片。28例实 验结果见表1,无论是可数分裂相,还是完整分 裂相出现率,胶原酶法均比乙酸法为高,二者间 有显著差异。     

大熊猫与各种动物亲缘关系的免疫化学研究

用6只大熊猫(Ailuropoda melanoleuces)的混合血清(雌雄各3只)作抗原,给1只青紫兰雄兔作每隔一周注射1次的连续4次免疫注射。在末次注射后10天,由兔子颈动脉放血,收集抗血清,经琼脂扩散实验测得青紫兰雄兔血清的抗体效价为1:4。将这些血清分装,冰冻干燥,封存于冰箱中,作为本实验的标准抗血清备用。 分别以大熊猫、黑熊(Selenarctos thibetanus)、小熊猫(Ailurus fulgens)、家狗(Canisfamiliaris)、家猫(Felis domestica)、黄鼬(Mvstela sibirica)、刺猬(Erinaceus europaeusdealbatus)、大鼠(Rattus norvegicuss)、黄鼠(Citellus dauricus)、山羊(Capra hircus)……等动物的血清作抗原与上述标准抗血清进行免疫扩散实验、对流免疫电泳实验、微量免疫电泳实验和单向定量免疫电泳实验。 对上述各种动物血清中的蛋白质还作了聚丙烯酰胺凝胶电泳的分析。     

不同免疫方案制备家蚕抗菌肽多抗血清的比较

目的:以His-CecropinXJ融合蛋白、pcDNA3.0-cecropinXJ重组质粒为免疫原,分别采用蛋白皮下免疫、DNA肌肉免疫及使用活体基因导入仪肌肉免疫BALB/c小鼠,制备新疆家蚕抗菌肽的多克隆抗血清,并评价不同免疫方案对抗原免疫原性的影响。方法:采用间接ELISA测定免疫血清中抗新疆家蚕抗菌肽IgG抗体的滴度及亚型分类。用Western blot检测各免疫方案制备的抗血清,与新疆家蚕抗菌肽CecropinXJ抗原结合的特异性。结果:不同免疫方案均可诱导产生针对新疆家蚕抗菌肽不同滴度的多克隆抗血清。使用活体基因导入仪免疫后,可诱导高滴度的抗体产生。结论:以His-CecropinXJ蛋白免疫BALB/c小鼠后,可诱导高滴度的IgG1抗体产生;以pcDNA3.0-cecropinXJ质粒免疫后,可诱导针对IgG2a的抗体产生。     

人免疫缺陷病毒早期蛋白Nef的表达、纯化及免疫原性研究

目的：通过原核细胞表达人免疫缺陷病毒（HIV）Nef抗原,制备特异抗血清,为Nef抗原检测提供技术方法。方法：以HIVBotswana毒株基因组为模板,用PCR法获得Nef蛋白编码基因,将其克隆到pET30a载体中,在大肠杆菌中表达Nef融合蛋白;用纯化的融合蛋白免疫BALB／c小鼠获得抗血清,用真核表达的Nef抗原对其特异性进行分析。结果：构建的Nef融合基因在大肠杆菌中获得表达,相对分子质量约为36x103,免疫BALB／c小鼠获得针对融合蛋白的高效价抗血清,ELISA抗体滴度为1：6400;免疫荧光和Westemblot检测表明,该抗血清能特异地与重组痘苗病毒表达的Nef抗原反应。结论：在大肠杆菌中表达了HIVNef融合蛋白,制备了Nef融合蛋白的高效价小鼠免疫血清,该血清能特异性识别HIVNef抗原,为HlVNef抗原检测提供了技术方法。     

2种β2-受体激动剂抗血清的比较研究

目的:通过比较分析,为β2-受体激动剂的快速免疫学检测方法及最佳免疫抗血清的选择提供依据。方法:分别以偶氮化法和碳二亚胺法将β2-受体激动剂克伦特罗(CL)和沙丁胺醇(Sal)连接到牛血清白蛋白和卵清蛋白上,免疫家兔;4次免疫后,采血制备抗CL和抗Sal的抗血清;用间接ELISA检测抗血清效价,用间接抑制ELISA检测抗血清交叉反应。结果:为抗CL抗血清的效价为1∶2560,抗Sal抗血清的效价为1∶5120。抗CL抗血清对Sal有0.088%的交叉反应,而抗Sal抗血清对CL有200%的交叉反应;就对CL的抑制而言,抗Sal血清比抗CL血清更敏感。结论:在检测β2-受体激动剂CL时,Sal完全抗原可能是制备抗血清的最佳抗原。     

一种快速观察四膜虫纤毛的方法

器材与药品离心机,三用水箱,天平,染色缸。席夫试剂(schiff reagent),漂白液,乙醇二甲苯,磷酸缓冲液(PH7.2)。亮绿(溶剂是95％的乙醇) 步骤 1.取四膜虫浮液3—5ml,离心5分钟(800—1000转/分),去上清液,留沉淀物0.3—0.5ml。 2.用PH7.2磷酸缓冲液洗涤,离心5分钟(800—1000转/分),去上清液,留沉淀物0.3—0.5ml。 3.涂片。用甲醇固定液固定。 4.水解处理。室温下先在1NHCl中处理1分钟,后移至1NHCl(60℃)中处理7—9分钟(水解     

腹水离心石蜡切片联合免疫组化检测CA125、CK7、Ki67对卵巢癌的诊断价值

目的:探讨腹水离心石蜡切片及免疫组织化学在卵巢癌诊断中的价值.方法:对30例腹水标本离心收集细胞沉渣,经自动脱水机脱水后石蜡包埋,切片进行免疫组织化学检测CA125、CK7、Ki67表达.结果:腹水离心石蜡切片细胞形态清晰,着色鲜艳,免疫组织化学阳性定位准确.结论:腹水离心石蜡切片联合免疫组织化学检测CA125、CK7、Ki67对卵巢癌具有临床诊断价值.     

小鼠组蛋白去乙酰化酶2多肽抗血清的制备

目的利用人工合成小鼠组蛋白去乙酰化酶2（histone deacetylase 2,HDAC2）多肽制备特异性抗HDAC2抗血清,用于相关疾病的体内外诊断。方法根据HDAC2基因编码的氨基酸序列合成多肽,与载体偶联后免疫动物,所制备的抗血清用ELISA、Western blot及免疫组织化学方法鉴定。结果 ELISA检测表明所制备的抗血清可同多肽抗原发生阳性反应,效价1∶4 000;Western blot结果显示抗血清可与多肽抗原及APP/PS1转基因小鼠的脑组织发生反应;免疫血清1∶100,1∶200,1∶400,1∶800四个稀释度均能与小鼠脑组织中的HDAC2反应。结论所制备的多肽抗血清可识别组织及血清中的HDAC2,可应用于相关领域的体内外研究。     

脱落酸人工抗原合成及多克隆抗体制备

目的:为了对植物细胞中的脱落酸(ABA)进行定量和定位分析,研究了脱落酸人工抗原的合成以及多克隆抗体的制备。方法:用重氮化法将ABA分别与牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)联结,得到ABA的免疫抗原和包被抗原,并采用紫外全波长扫描和SDS-PAGE对合成的抗原进行了鉴定。以经过鉴定的抗原免疫白兔,制备出ABA的多克隆抗体;采用间接酶联免疫法(ELISA)对抗血清进行效价检测,通过离子交换层析法获得纯化的抗体。结果:ABA与BSA的平均偶联比为5.3∶1,抗血清效价为1∶16000。结论:人工抗原和多克隆抗体制备成功,为采用ELISA和免疫胶体金技术(ICG)检测ABA提供了有效工具。     

小鼠DEAF1多克隆抗体的制备及应用

为研究DEAF1在小鼠胰淋巴结中的内源性表达及调控外周组织抗原基因表达的机制,将DEAF1的原核表达质粒转化至E.coli BL21中,诱导获得重组DEAF1蛋白;经尿素梯度裂解包涵体纯化获得的重组DEAF1蛋白分期免疫Balb/C小鼠,获取鼠抗DEAF1的多克隆抗血清;采用ELISA、Western blot、免疫荧光、免疫沉淀分别鉴定其效价、特异性、敏感性和亲和力。结果表明,抗血清可与抗原发生特异性的免疫反应,可用于检测DEAF1的表达及荧光定位,抗血清与抗原有较高的亲和力。结果证明所制备的多克隆抗血清具有较高的特异性、敏感性和亲和力。     

肾脏 γ 谷氨酰转肽酶的纯化、生化性质及免疫组织化学研究

用Triton X100提取、菠萝蛋白酶处理、硫酸铵沉淀、DEAE Cellulose 52离子交换柱层析及Sephadex G150凝胶柱层析,从人正常肾脏、大鼠肾脏成功地制备了γ谷氨酰转肽酶(γ-GT),其纯化倍数为713.5,比活性264U/mg蛋白,达到了匀质化纯度。用此酶作抗原免疫家兔得到了高效价兔抗人、兔抗鼠γ-GT抗血清,再纯化制成相应的γ-GTIgG,检查其纯度和特异性均给出满意的结果。在此基础上又建立了免疫化学、免疫组织化学的研究方法,并用于实验性肝癌的研究中。     

培养液中纤维素酶的分离纯化

目的:为了研究纤维素酶的特性,使之利用纤维素从而促进纤维素资源化,减少环境污染,该文选用作者实验室筛选出的菌株K7-2培养产生纤维素酶,进行了纤维素酶的分离纯化。方法:将菌株K7-2在30℃、150r/min摇床培养3d,于5 000r/min离心30min,取上清液即为粗酶液,经硫酸铵分级沉淀、Sephadex G-75凝胶过滤层析、DEAE-Sephadex A-25离子交换层析方法进行分离纯化。结果:分离纯化后的酶活是0.0904U/ml,比活力提高4.1120倍。结论:这为进一步研究此纤维素酶的组份、结构和理化特性奠定了基础。     

陕西七纺器蛛和拉土蛛不同组织酯酶同工酶的比较研究

陕西七纺器蛛(Heptathela shaanxiensis),拉土蛛(Latouchia sp.)均于1987年10月采自陕西泾阳。在同条件下采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术进行了不同组织的酯酶同工酶比较。实验方法酶液的制备:将饥饿10天的两种蜘蛛按常规解剖,分别取各组织置于研钵内,根据样品重量之差异,分别加入40%蔗糖溶液1—3ml,匀浆过滤,离心(3500rpm×15′)。取上清液作酶源,贮存于4℃冰箱备用,点样时加入适量0.1%澳酚蓝作电泳的指示染料。酯酶同工酶的聚丙烯酰胺疑胶电泳分离和染色、脱色:基本参照邱琼华等(1987)的方法。用日本20M光密度计(波长570nm,狭缝0.4cm)扫描…     

绿僵菌属血清学的初步研究

本文采用凝集试验和免疫电泳的方法对不同来源的七株绿僵菌属真菌进行了免疫学对比研究。抗原是孢子悬液和菌丝体清液,通过对家兔接种抗原而获得抗血清。每一种抗原与其同源抗血清和异源抗血清进行交叉试验,并对凝集试验的结果以及免疫电泳反应产生的沉淀弧数目和免疫电泳图谱加以对比分析,试验结果表明:不同菌株间存在着明显的抗原类似性,同时各菌株间也表现出一定的抗原专一性。根据试验数据对供试菌株进行血清学分型的结果与形态学分类相符合。