鲑生长激素的基因操作宿主由大肠菌杆转向酵母菌

为用基因操作制造鲑生长激素,所用宿主由大肠杆菌的实用化研究,已在日本协和发酵公司开始。该公司从美国菲利普(Phillips)石油公司引进了甲醇同化酵母菌巴斯德毕赤酵母(Pichia Pastoris)的基因操作技术和高浓度培养技术,并着手共同研究。 这次的引进表明,用大肠杆菌工业生产具有活性的鲑生长激素(SGH)看来是困难的。SGH是疏水性高、难溶于水的蛋白,用大肠杆菌制造的重组SGH也难于提纯。     

大洋渔业公司证实金枪鱼生长激素在大肠杆菌中表达

日本大洋渔业公司与京都大学已共同证实金枪鱼生长激素cDNA的克隆化,和在大肠杆菌的表达。这项成果已于1988年4月1～4日在东京召开的日本水产学会上发表。关于cDNA的克隆化已在1987年的学会上发表。他们已把编码成熟型金枪鱼生长激素(187个氨基酸、分子量2.1万)的基因区整合人表达载体,并导入大肠杆菌。其结果,发现20％的菌体蛋白可以表达。表达是用使用针对精制     

用基因工程方法制成人生长激素

去年七月,J A Martial等人和美国基因技术公司研究小组分别实验成功用遗传工程方法制造人生长激素。但他们所用的方法却不同。Martial等人先分离生长激素mRNA,经反转录法合成cDNA,cDNA经分子扩增后,插入表达性载体。这样大肠杆菌生产的是生长激素前体。这种前体需切掉多余的肽腱,才能     

胶囊化的生长激素对虹鳟的生长促进作用提高

日本北里大学水产学部教授川内浩司等、东京大学海洋研究所教授平野哲也和协和发酵小组把大麻哈鱼生长激素封入在肠道选择性地溶解的胶囊,再经口投喂给虹鳟鱼,提高了生长激素的吸收.还确认了胶囊化生长激素的生长促进效果.该小组已报告过口服生长激素对鱼类生长的促进作用,但断定大部分生长激素被消化酶分解了.从那时起寻找高效率吸收方法是研究焦点之一.     

日本首次克隆鲑生长激素

在1984年12月举行的日本细胞生物学会第七届年会上,公布了一项遗传工程新成果:由Kyowa Hakko公司和Kitazato大学组成的联合研究组,在世界上首次成功地利用基因并接技术,用大肠杆菌大量克隆了提纯自鲑垂体的生长激素。这项研究是在大约一年前开始进行的。据报道,实验者每隔4天将1微克天然激素注射给当年的虹鳟鱼,连续注射7次,到第40天时测得试验鱼的平均增重为对照鱼的1.6倍(由始     

生长激素及其基因转移对鱼类生长和渗透压的调节作用

生长激素及其基因转移对鱼类生长和渗透压的调节起着重要作用。转生长激素基因鱼表现出明显的快速生长效应。生长激素促进了鲑科鱼类对海水的适应能力。本文对此进行了综述,并讨论了生长激素及其基因转移对鱼类生长和渗透压调节作用的生理机制、生长激素与胰岛素样生长因子以及甲状腺激素的关系。     

生长激素及其基因转移对鱼类生长和

生长激素及其基因转移对鱼类生长和渗透压的调节起着重要作用.转生长激素基因鱼表现出明显的快速生长效应.生长激素促进了鲑科鱼类对海水的适应能力.本文对此进行了综述,并讨论了生长激素及其基因转移对鱼类生长和渗透压调节作用的生理机制、生长激素与胰岛素样生长因子以及甲状腺激素的关系.     

鲤鱼生长激素基因的改造及其在大肠杆菌中的表达

用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）改造了锂鱼生长激素基因,扩增出编码锂鱼生长激素成熟肽的序列,并将此序列克隆到ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ Ⅱ ＫＳ质粒中,序列分析后,亚克隆到大肠杆菌表达载体ｐＢＶ２２０中。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和薄层扫描,结果表明锂鱼生长激素基因已大肠杆菌中获得表达。锂鱼生长激素成熟肽的分子量为２２０００道尔顿,表达率占细胞总蛋白的１８％以上％。     

鲑鱼生长激素基因分泌型表达质粒的构建

生长激素(GH)是动物垂体前叶分泌的一种多肽类激素.应用分子重组及PCR等技术,构建了一种鲑鱼生长激素基因分泌型表达质粒pOsGH153,使编码鲑鱼生长激素成熟肽的序列克隆在大肠杆菌分泌型表达载体PIN-Ⅲ-ompA内,直接位于编码大肠杆菌外膜蛋白A信号肽序列的下游,在Lpp-Lac杂合启动子控制下,经IPTG诱导,分子量约23 000的鲑鱼生长激素在大肠杆菌中获得高效表达,该产物具有天然鲑鱼生长激素的免疫活性,直接分泌到细胞周质,而信号肽被自动剪除.     

水产养殖动物遗传连锁图谱及QTL定位研究进展

自1997年美国农业部启动5种水产养殖动物基因组计划以来,在不到10年的时间里,世界各国都相继开展了本国主要水产养殖动物基因组研究。截至2005年底,有近17种海淡水养殖动物公布了遗传连锁图谱：属于高密度连锁图谱的有虹鳟和大西洋鲑（标记数超过1000）;属于中密度遗传连锁图谱的有罗非鱼、沟鲶、黑虎虾、日本牙鲆和欧洲海鲈（标记数为400-1000）;属于低密度遗传连锁图谱的有泰国的胡鲶,中国的栉孔扇贝、鲤鱼,日本的黄尾鲕,美国的牡蛎等近10种养殖种类（标记数少于400）。水产养殖动物遗传连锁图谱的构建和发展,促进了一些与经济性状（如生长、抗逆、发育等）相关的数量性状位点（QTL）的定位研究。然而,QTL定位研究目前只在具有中高密度遗传连锁图谱的鲑科鱼类（虹鳟、大西洋鲑和北极嘉鱼）、罗非鱼、沟鲶和日本牙鲆等种类中开展,而且定位研究仍处在初级水平。遗传连锁图谱的高分辨率和QTL在图谱上的精确定位,是今后能否实现对主要水产养殖动物的经济性状进行遗传操作的技术保证,同时也是实现分子标记或基因辅助育种在水产养殖动物中成功运用的制胜法宝。     

水产养殖动物遗传连锁图谱及QTL定位研究进展

自1997年美国农业部启动5种水产养殖动物基因组计划以来，在不到10年的时间里，世界各国都相继开展了本国主要水产养殖动物基因组研究。截至2005年底，有近17种海淡水养殖动物公布了遗传连锁图谱：属于高密度连锁图谱的有虹鳟和大西洋鲑(标记数超过1 000)；属于中密度遗传连锁图谱的有罗非鱼、沟鲶、黑虎虾、日本牙鲆和欧洲海鲈(标记数为400—1 000)；属于低密度遗传连锁图谱的有泰国的胡鲶，中国的栉孔扇贝、鲤鱼，日本的黄尾shi，美国的牡蛎等近10种养殖种类(标记数少于400)。水产养殖动物遗传连锁图谱的构建和发展，促进了一些与经济性状(如生长、抗逆、发育等)相关的数量性状位点(QTL)的定位研究。然而，QTL定位研究目前只在具有中高密度遗传连锁图谱的鲑科鱼类(虹鳟、大西洋鲑和北极嘉鱼)、罗非鱼、沟鲶和日本牙鲆等种类中开展，而且定位研究仍处在初级水平。遗传连锁图谱的高分辨率和QTL在图谱上的精确定位，是今后能否实现对主要水产养殖动物的经济性状进行遗传操作的技术保证，同时也是实现分子标记或基因辅助育种在水产养殖动物中成功运用的制胜法宝。     

激素和活性多肽

961017 用胶束高效液相层析法分析大肠杆菌发酵液中的重组人生长激素[英]/Strege,M.A.…//J.Chromatogr.-1995,705(1).-155～161[译自DBA,1995,14(17),95-10070] 描述了用反相HPLC法(利用含有n-丙醇和SDS的流动相、胶束条件(pH6.4)检测大肠杆菌发酵液中重组甲二磺酰天冬氨酰生长激素的方法。采用一具有可变波长UV检测器的两泵系统进行层析。     

鲑点石斑鱼皮肤抗菌活性蛋白的纯化及抗菌活性(英文）

近年来在多种生物体中都发现有抗菌活性蛋白和多肽。由于其具有生物化学多样性,抗病毒、微生物、真菌、原生动物、肿瘤,促进伤口愈合等生物学活性,而引起研究者的极大兴趣。抗菌活性蛋白和多肽在动物的先天免疫中具有重要作用,它们直接作用于细菌,并将其杀死。鲑点石斑鱼(Epinephelusfario)是中国南方水产养殖中重要的海水鱼。近年来,由于细菌和病毒引发的病害造成鲑点石斑鱼大量死亡,但其抗菌活性蛋白及多肽目前还未见报道。本研究发现鲑点石斑鱼皮肤具有抗菌活性成分,鲑点石斑鱼皮肤匀浆物经胰蛋白酶水解后抗菌活性丧失,说明该活性是由蛋白质引起的。经离子交换层析及凝胶过滤层析,从鲑点石斑鱼皮肤中分离纯化到抗菌活性蛋白(Efap)。SDS-PAGE显示,Efap为单链蛋白,分子量约41kD。该成分能同时抑制革兰氏阳性菌,如金黄色葡萄球菌、滕黄微球菌、枯草牙胞杆菌和革兰氏阴性菌,如溶藻弧菌、副溶血弧菌、河流弧菌、多杀性巴氏杆菌、嗜水气单胞菌、大肠杆菌和铜绿假单胞菌。革兰氏阴性菌中,溶藻弧菌、副溶血弧菌、河流弧菌和多杀性巴氏杆菌对Efap较敏感,MIC<20mol/L,其他3种菌敏感性较差,MIC>20mol/L。另外,Efap显示出较强的抗金黄色葡萄球菌的活性,MIC为5—10mol/L。Efap的广谱抗菌性,说明其在鲑点石斑鱼免疫防御中具有一定的作用。     

编码人生长激素的DNA序列在大肠杆菌中的直接表达

编码人生长激素的DNA通过用化学合成的DNA与酶促制备的CDNA连接而建立。这一“杂化物”基因在乳糖操纵子控制下在大肠杆菌中表达,产生的肽在大小和免疫学性质上具有成熟的人的生长激素的特性。 人生长激素(HGH)是垂体前叶合成的具有191个氨基酸的蛋白质。垂体机能减退 的侏儒因HGH缺陷而身材矮小,在儿童期使用人生长激素可以治疗这一缺陷症。另外,HGH在治疗各种创伤疾病如骨折、皮肤烧伤、溃疡等被证实是有效的。由于生长激素具种属专一性,人的尸体成为HGH的唯一来源。 生长激素mRNA的初级翻译产物是一个蛋白前体,含有与生长激素N末端相接的一段信号肽。这种信号或“前”序列是分泌蛋白的特征。对于大鼠生长激素(RGH),已经鉴定了由RGH mRNA制备的CDNA序列中前序列的26个氨基酸残基。由人生长激素cDNA序列获得的信息,我们设计并建立了一个细菌质粒,它可以在微生物细胞中指导合成大量的成熟HGH。     

激素和活性多肽

920526在大肠杆菌中表达鸡生长激素及其缺失变体〔俄〕/Gorbulev,V.G.…了Biotekhnologiya一19ox,i一20~25仁译自DBA,1991,10(12),91一06760〕 介绍了重组质粒的构建,该质粒在trp启动子调控下编码全长鸡生长激素(CGH,家禽生长激素)及其缺失变体的生物合成。同时介绍了用大肠杆菌DH一1生产上述蛋白。以质粒pCGHex为基础,构建了含CGH cDNA的质粒PtrpCGH、ptrp CGH一乙一3和ptrp CGH一乙一7,它们分别编码全长CGH、去掉N一端最初3个氨基酸的CGH和去掉N一端最初7个氨基酸的CGH。在基本培养基中加入户引噪丙烯酸进行诱导,转化的…     

激素和活性多肽

910869 间隔序列和终止序列对猪生长激素在大肠杆菌中合成的影响[英]/Hwang,L.H.S.…// Biotechnol.Lett.-1990,12(5).-335～340[译自DBA,1990,9(15),90-08726]为在大肠杆菌JM103(对启动子Ptac)t DCB-1(对启动子PL)中生产猪生长激素,建构了含Ptac或PL启动子、合成核糖体     

在大肠杆菌中温度诱导高效表达猪生长激素

本实验构建了温度诱导的表达猪生长激素的表达载体,转化大肠杆菌N4830后,经温度诱导,获得了高效表达．由SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及Westerm blot证实表达产物为猪生长激素,经扫描估测猪生长激素的表达量占大肠杆菌细胞全蛋白的30％左右。     

科技文摘

美国华盛顿等大学的科学家已将产生生长激素的人类基因移植到兔子、绵羊和猪体内。在兔子和猪体内这些基因已成功地行使它们的生理功能,制造出了人类生长激素。多数动物都不能接受外来基因,不能把外来基因接合到自己的染色体上。然而,在华盛顿大学科学家进行的试验中,猪和兔子后代的11—13％接受了外来基因,这些外来基因能否正常地遗传下去目前尚不清楚。