成人外周血来源树突状细胞体外诱导培养动态监测

目的:分析体外诱导培养树突状细胞(dendritic cells,DCs)表面分子及成熟度的动态变化;方法:利用流式细胞仪(fluorescence activated cell sorter,FACS)检测分析DCs表面成熟标志分子CD83和T细胞辅助分子CD58、CD54、CD40、CD80、CD86、HLA-DR、HLA-ABC表达水平;结果:体外诱导培养5 d细胞即高表达DCs标志分子CD11c,细胞成熟度与细胞表面T细胞辅助分子的表达水平随培养天数的增加有一定提高,但显著低于大肠杆菌LPS刺激的DCs;结论:诱导培养6 d DCs表型为CD83 low、CD58low、CD54 low、CD40 low、CD80 low、CD86 low、HLA-DRhigh、HLA-ABChigh,为不成熟DCs.     

不同分化阶段树突状细胞肌动蛋白微丝结合蛋白的表达变化

研究不同分化阶段树突状细胞(dendritic cells,DCs)重要肌动蛋白微丝结合蛋白的表达变化。人外周血经密度梯度离心和免疫磁珠法分离获得CD14+单核细胞,用细胞因子将单核细胞(monocytes,MOs)诱导分化为未成熟DCs(immature DCs,im DCs)和成熟DCs(mature DCs,m DCs)。分别提取不同分化阶段DCs的总蛋白和总RNA,实时定量PCR和蛋白质芯片检测部分细胞骨架微丝(filament actin,F-actin)结合蛋白的在基因和蛋白水平的表达变化。单核细胞经im DCs向m DCs分化的过程中,一些F-actin的单体隔离蛋白、加帽蛋白、交联蛋白、解聚蛋白和成核蛋白在基因和蛋白水平发生了不同程度的上调或下调。一些重要的F-actin结合蛋白在DCs不同分化阶段具有不同的表达水平,DCs的结构和功能受到这些蛋白的协同作用和精密调控,是细胞形态发生显著变化的结构基础,这对于深入理解DCs的免疫调节功能来说具有重要意义。     

阿萨希毛孢子菌对人外周血单核源树突状细胞表型和功能的影响

目的通过体外研究热灭活阿萨希毛孢子菌(Trichosporon asahii,T.asahii)孢子对健康人外周血单核源树突状细胞(dendritic cells,DCs)的表型和功能的影响,探讨DCs在T.asahii感染中可能发挥的作用。方法体外诱导培养正常人外周血DCs,与不同浓度的热灭活T.asahii孢子进行孵育,DCs与T.asahii浓度比分别为1∶1、1∶5和1∶10,RPMI-1640及脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激组分别作为空白对照及阳性对照,在显微镜下观察各组DCs形态的变化;瑞氏-姬姆萨染色观察实验组DCs对T.asahii的吞噬情况并计算吞噬率;流式细胞术检测各组DCs表面共刺激分子表达情况。结果诱导孵育过程中DCs形态发生明显改变;24 h时实验组部分DCs内可观察到不止一个被吞噬的T.asahii孢子,吞噬率组间差异有统计学意义(P0.05);与空白对照组相比,实验组DCs形态发生明显改变,且表面共刺激分子CD80、CD86、CD83表达水平明显升高(P0.05),但升高水平低于LPS刺激组,差异有统计学意义(P0.05)。结论人外周血DCs吞噬热灭活的T.asahii孢子后,形态发生改变,表面分子表达水平升高,DCs进一步成熟。     

草鱼树突状细胞的分离鉴定及益生芽孢杆菌对其免疫功能的影响

为揭示草鱼(Ctenopharyngodon idellus)树突状细胞(Dendritic cells)的生物学特性及益生芽孢杆菌对其免疫功能的影响, 研究通过草鱼体外细胞培养技术分离获得草鱼DCs, 对其形态学特征、生物学功能及膜表面标记分子的表达进行了分析鉴定; RT-PCR检测了益生芽孢杆菌对草鱼DCs免疫相关细胞因子表达的影响。结果表明草鱼DCs具有典型的树突状形态, 可有效地激活T淋巴细胞的增殖并具有迁移能力。LPS刺激可促进其成熟过程, 显著提升膜表面标记分子CD80/86、CD83的表达。这表明草鱼DCs和哺乳动物DCs在形态和功能上具有高度相似性。RT-PCR结果显示, 在体外条件下使用紫外照射灭活的益生枯草芽孢杆菌对草鱼DCs进行刺激后, 抗炎性因子IL-4, IL-10的表达水平显著提升(P<0.05), 并在12h时达到峰值。这表明枯草芽孢杆菌可通过促进树突状细胞分泌抗炎性因子来影响其免疫功能。以上结果为进一步研究鱼类树突状细胞的生物学特性及益生芽孢杆菌对其免疫功能的影响提供了重要的依据。     

融合蛋白CTP-FoxM1诱导C57BL/6小鼠骨髓来源树突状细胞的活化

树突状细胞(dendritic cells,DCs)疫苗负载的肿瘤抗原可以使DCs大量表达表面分子II类组织相容性抗原(major histocompatibility complex class-II,MHC-II)及共刺激分子CD40、CD80、CD86,促进Th1(T helper 1)型细胞因子的分泌,从而可以将肿瘤抗原充分递呈给T淋巴细胞,诱导机体产生杀伤肿瘤细胞的免疫应答。其中,肿瘤抗原是否能充分活化DCs是机体发挥抗肿瘤免疫应答的关键。该研究以融合蛋白CTP-Fox M1(cytoplasmic transduction peptide-forkhead box M1)为研究对象,探讨其对C57BL/6小鼠骨髓来源DCs的活化作用。首先,分别将胞质转导肽(cytoplasmic transduction peptide,CTP)、Fox M1(forkhead box M1)抗原相关基因连接入p COLD-TF-DNA,构建重组原核表达质粒p COLD-TF-CTP-Fox M1,转化感受态大肠杆菌BL21,IPTG(isopropylβ-Dl-thiogalactopyranoside)诱导表达,经亲和纯化、Western blot验证得到融合蛋白CTP-Fox M1。然后,用CCK-8试剂盒检测经不同浓度的融合蛋白CTP-Fox M1处理48 h后的DCs的存活率;用激光共聚焦显微镜观察融合蛋白CTP-Fox M1在DCs的定位情况;流式细胞仪检测DCs表面MHC-II类分子和共刺激分子CD40、CD80、CD86的表达情况;ELISA法检测DCs培养上清中细胞因子白介素-12(interleukin-12,IL-12)的分泌水平。结果显示:CTP-Fox M1对DCs的生长有一定的抑制作用,且与其浓度有关,浓度为1μg/m L的融合蛋白CTP-Fox M1处理组的DCs存活率(80.93%±8.36%)明显高于浓度为2μg/m L融合蛋白CTP-Fox M1处理组DCs的存活率(70.13%±5.38%,P0.001)和4μg/m L融合蛋白CTP-Fox M1处理组DCs的存活率(62.97%±4.06%,P0.001)。在激光共聚焦显微镜下可以观察到该融合蛋白能够在DCs胞质内定位,与对照组相比,该融合蛋白可以上调DCs表面MHCII类分子和共刺激分子CD40、CD80、CD86的表达量(P0.01,P0.05)及细胞因子IL-12的分泌量(P0.001)。结果提示,融合蛋白CTP-Fox M1能促进DCs的活化,对肝癌的免疫治疗有一定的潜能,为下一步探索融合蛋白CTP-Fox M1负载的DCs是否能够在体内发挥免疫效应奠定了一定的基础。     

草鱼CD8α和CD207的表达及抗细菌免疫的功能研究

为探讨树突状细胞(Dendritic cells, DCs)表面重要的表型分子CD8α和CD207在草鱼(Ctenopharyngodon idella) DCs抗细菌免疫应答中的作用,实验从草鱼DCs的cDNA中扩增CD8α和CD207胞外区,构建重组表达质粒pET-32a-CD8α/CD207,并转化到感受态细胞Transetta (DE3),表达纯化后制备CD8α和CD207多克隆抗体。利用qPCR、Western Blot及流式细胞术揭示草鱼CD8α和CD207在抗细菌免疫过程中发挥的功能。结果显示,制备的草鱼CD8α和CD207多克隆抗体既可以识别原核表达的重组蛋白,也能识别鱼体内和培养细胞的内源性蛋白。从功能上看,灭活嗜水气单胞菌处理草鱼DCs后,在24h内, CD8α和CD207的表达量均有显著上调(P<0.05);且CD8α和CD207分子在草鱼DCs呈递抗原刺激混合淋巴细胞增殖这一过程中发挥重要作用。因此,草鱼DCs表现出与哺乳动物相似的保守免疫表型和功能,研究结果为阐明草鱼DCs介导的适应性免疫调节机制奠定基础。     

新疆野生及栽培一枝蒿多糖对树突状细胞免疫功能的影响

研究和比较新疆野生与栽培一枝蒿多糖对骨髓来源树突状细胞(dendritic cells,DCs)成熟和功能的影响。超声法制备野生及栽培一枝蒿粗多糖;Sevage法除蛋白;蒽酮-硫酸法测定多糖含量;流式细胞术检测DCs的成熟;ELISA法检测IL-12和TNF-α的表达水平。结果显示,野生及栽培一枝蒿多糖含量分别为26.18%和22.14%,去除蛋白质后多糖含量分别为30.94%和27.06%;野生及栽培一枝蒿多糖均可以显著增强小鼠骨髓来源CD11c+DCs表面分子CD40,CD86及CD80的表达(P0.05);显著促进IL-12和TNF-α的表达(P0.05);显著降低DCs吞噬FITC-Dextran的能力;且相同剂量对DCs的免疫活性无显著性差异(P0.05);除蛋白和不除蛋白的野生及栽培一枝蒿多糖的免疫活性均无显著差异(P0.05)。新疆野生和栽培一枝蒿多糖含量差异较小,并均可以促进小鼠骨髓来源DCs的成熟和功能,且差异不大。     

新疆野生及栽培一枝蒿多糖对树突状细胞免疫功能的影响北大核心CSCD

研究和比较新疆野生与栽培一枝蒿多糖对骨髓来源树突状细胞(dendritic cells,DCs)成熟和功能的影响。超声法制备野生及栽培一枝蒿粗多糖;Sevage法除蛋白;蒽酮-硫酸法测定多糖含量;流式细胞术检测DCs的成熟;ELISA法检测IL-12和TNF-α的表达水平。结果显示,野生及栽培一枝蒿多糖含量分别为26.18%和22.14%,去除蛋白质后多糖含量分别为30.94%和27.06%;野生及栽培一枝蒿多糖均可以显著增强小鼠骨髓来源CD11c+DCs表面分子CD40,CD86及CD80的表达(P<0.05);显著促进IL-12和TNF-α的表达(P<0.05);显著降低DCs吞噬FITC-Dextran的能力;且相同剂量对DCs的免疫活性无显著性差异(P>0.05);除蛋白和不除蛋白的野生及栽培一枝蒿多糖的免疫活性均无显著差异(P>0.05)。新疆野生和栽培一枝蒿多糖含量差异较小,并均可以促进小鼠骨髓来源DCs的成熟和功能,且差异不大。     

人咽鳞癌Fadu细胞RNA负载人树突状细胞后体外诱导特异性CTL的研究

目的:探讨咽鳞癌细胞总RNA转染的树突状细胞(DC)疫苗体外诱导特异性抗肿瘤免疫的能力.方法:分离人脐血单个核细胞,经重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组人IL-4(rhIL-4)诱导不成熟DC(iDC),提取人咽鳞癌细胞FaDu总RNA后,转染入人iDC,成为FaDu RNA/DC疫苗,用流式细胞仪检测DC表面分子CD40、CDS0、CD83、CD86、HLA-DR的表达,混合淋巴细胞反应测定DCs刺激同种异基因T细胞增殖能力.用LDH法评估转染肿瘤总RNA的DC瘤苗的细胞毒性T淋巴细胞反应.结果:与转染前比较,人咽鳞癌细胞FaDu总RNA转染后脐血单核细胞来源DCs表面CD40、CD80、CD83、CD86、HLA-DR分子水平明显升高(P均<0.05);可显著促进T细胞增殖,在体外能诱导高效而特异的抗下咽癌免疫效应(P<0.05).结论:人咽鳞癌细胞的总RNA转染的DC肿瘤疫苗能诱导CD8+,CD4+T细胞免疫,是较有临床应用前景的下咽癌免疫治疗方法.     

GM-CSF体外诱导培养C57BL/6J小鼠BMDCs的动态观察及鉴定

本研究旨在通过培养并观察C57BL/6J小鼠骨髓来源树突状细胞(BMDCs)集落、形态、表型的动态变化,为BMDCs的形态、表型等方面提供参考数据。取C57BL/6J小鼠骨髓,用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)诱导和培养BMDCs,在第3、6、9、12天拍照、HE染色观察BMDCs的集落、形态;FACS分析第3、6、9、12天以及LPS刺激后BMDCs的CD11c、CD80和CD86的表达;扫面电镜拍照LPS刺激后BMDCs的树突与形态。发现GM-CSF诱导和培养的C57BL/6J小鼠BMDCs在第3天形成明显的集落、第6天集落释放较多的BMDCs;显微镜下HE染色显示,第3天可见BMDCs有突起、第6天明显,第12天有明显突起的细胞数量增多;FACS分析显示,随着培养时间的增加,BMDCs的CD11c、CD80、CD86的表达逐渐上调,第12天表达较明显,LPS刺激能提高CD80、CD86的表达;扫描电镜显示,LPS刺激的BMDCs有明显的树突状突起。因此GM-CSF诱导和培养的C57BL/6J小鼠BMDC具有典型的树突状突起、表达CD11c、CD80、CD86等树突状细胞(DCs)分子标记,LPS刺激能促进CD11c、CD80、CD86的表达。     

骨髓间充质干细胞通过JAK／STAT3信号通路抑制树突状细胞成熟

骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,bMSCs）具有自我更新、支持造血、多向分化和低免疫原性等特点,在调控树突状细胞（dendritic cells,DCs）成熟的过程中发挥重要作用。为了探讨bMSCs调控DCs成熟的机制,本研究通过分离培养正常捐献者bMSCs,并分离获取外周静脉血单个核细胞,诱导未成熟的树突状细胞（immature dendritic cells,imDCs）和成熟的树突状细胞（mature dendritic cells,mDCs）生成。根据Genebank中人STAT3全长基因序列,设计针对STAT3的siRNA。根据培养条件不同设计实验分组：正常bMSCs与imDCs共培养（阴性对照组）,转染siRNA的bMSCs与imDCs共培养（siRNA组）、加入JAK/STAT通路抑制剂AG490的bMSCs与imDCs共培养（AG490组）、加入TNF-α诱导的mDCs（阳性对照组）共4组,共培养72 h,流式细胞术分析DCs表型变化,ELISA检测培养液上清中IL-12水平变化。结果显示,阴性对照组不表达CD40、CD80、CD83、CD86和HLA DR标志树突细胞成熟的分子,而表达CD11b,其表型与imDCs一致;而siRNA组和AG490组的DCs表达CD40、CD80、CD83、CD86和HLA-DR等标志分子,而不表达CD11b,其表型与TNF-α诱导成熟的mDCs表型一致;siRNA组、AG490组和阳性对照组的IL-12水平较阴性对照组的IL-12水平显著升高（P＜0.05）,但siRNA组、AG490组和阳性对照组之间无明显差异（P＞0.05）。以上结果表明,通过siRNA和抑制剂AG490阻断bMSCs中JAK/STAT3通路促进了imDCs的成熟,提示bMSCs通过JAK/STAT3通路参与调控imDCs成熟。     

树突状细胞与马尔尼菲青霉酵母体外相互作用的研究

本文探讨了树突状细胞(DCs)在抗马尔尼菲青霉感染免疫中的作用。用细胞因子 rhGM-CSF 和rhIL-4诱导人外周血单核细胞分化为树突状细胞, 观察DCs的形态, 并用流式细胞仪进行DCs的表型测定, ELISA方法检测培养上清液IL-12p70的浓度, 混合淋巴细胞反应检测DCs刺激T淋巴细胞的增殖能力, 实时荧光定量PCR检测趋化因子受体CCR7、CXCR4的mRNA的表达。倒置显微镜下可见诱导获得的DCs细胞形态不规则, 表面伸展出大量树突。与马尔尼菲青霉酵母共同培养24 h后DCs的胞内含有大量的酵母细胞; 细胞表型CD86、CD83、HLA-DR和CD40的表达明显增高; 刺激T淋巴细胞增殖的能力增强; 趋化因子受体CCR7和CXCR4的mRNA表达量增加且能够产生IL-12p70但产生的量低于LPS刺激组。DCs能吞噬加热灭活的马尔尼菲青霉酵母, 并趋于成熟, 抗原呈递能力增加, 但是产生IL-12p70的量较低, 可能造成宿主抗马尔尼菲青霉酵母的细胞免疫功能的不足。     

树突状细胞与马尔尼菲青霉酵母体外相互作用的研究

本文探讨了树突状细胞(DCs)在抗马尔尼菲青霉感染免疫中的作用.用细胞因子rhGM-CSF和rhIL-4诱导人外周血单核细胞分化为树突状细胞,观察DCs的形态,并用流式细胞仪进行DCs的表型测定,ELISA方法检测培养上清液IL-12p70的浓度,混合淋巴细胞反应检测DCs刺激T淋巴细胞的增殖能力.实时荧光定量PCR检测趋化因子受体CCR7、CXCR4的mRNA 的表达.倒置显微镜下可见诱导获得的DCs细胞形态不规则,表面伸展出大量树突.与马尔尼菲青霉酵母共同培养24 h后DCs的胞内含有大量的酵母细胞;细胞表型CD86、CD83、HLA-DR和CD40的表达明显增高;刺激T淋巴细胞增殖的能力增强;趋化因子受体CCR7和CXCR4的mRNA表达量增加且能够产生IL-12p70但产生的量低于LPS刺激组.DCs能吞噬加热灭活的马尔尼菲青霉酵母,并趋于成熟,抗原呈递能力增加,但是产生IL-12p70的量较低,可能造成宿主抗马尔尼菲青霉酵母的细胞免疫功能的不足.     

小反刍兽疫病毒Nigeria75/1疫苗毒及其N蛋白对山羊PBMCs免疫效应的影响

小反刍兽疫(PPR)是羊、骆驼等小反刍动物的一种急性、烈性、接触性A类传染病,发病率和致死率极高.目前,PPR在全球仍呈现区域性流行和多地散发势态.为探讨PPRV及N蛋白体外诱导山羊外周血单个核细胞(PBMCs)在不同时间对PBMCs免疫应答效应的影响.本研究将PPRVNigeria75/1疫苗毒(1 MOI)、重组N蛋白(10μg/mL)和RPMI 1640(阴性对照)体外刺激PBMCs 48h、72h、96h.采用CCK-8法检测PBMCs细胞增殖情况;qRT-PCR及ELISA检测炎症因子包括IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-a和IFN-γ的mRNA表达水平及分泌情况;流式细胞术检测T细胞CD4+和CD8+的表达、及单核来源树突状细胞(DCs)表面分子CD40、CD86、CD80的表达、以及检测PPRV感染PBMCs引起的细胞凋亡.研究发现:与对照组相比,PPRV能够抑制PBMCs的体外增殖,显著促进炎症因子IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ的表达(P＜0.05).并且PPRV感染PBMCs产生细胞凋亡,促进CD4+T细胞和CD8+T细胞表达.另外PPRV体外刺激DCs,CD40、CD86、CD80的表达显著升高(P＜0.05),提示PPRV具有刺激DCs细胞成熟与分化的功能.进一步研究发现PPRV N蛋白体外刺激PBMCs能引起与PPRV作用相同的免疫效应.本研究表明PPRV Nigeria75/1疫苗毒体外感染PBMCs主要引起炎症反应与细胞凋亡、促进单核来源DCs成熟与分化,并且N蛋白参与PPRV引起的各项免疫功能.     

粗根荨麻多糖对人脐血单核细胞源树突细胞表面分子表达的影响

研究粗根荨麻多糖在体外对人脐血单核细胞向树突细胞分化及成熟的作用。用淋巴细胞分离液分离脐血获得脐血单个核细胞,将获得的单核细胞分为3组,实验组:在含有粗根荨麻多糖(200 mg/L)的RPMI1640完全培养液中培养;阴性对照组:在无药物的RPMI1640完全培养液中培养;阳性对照组:在含有细胞因子(IL-4、GM-CSF、TNF-α)的RPMI1640完全培养液中培养;收集第10 d细胞用流式细胞术检测DCs成熟表型(CD1a、CD80、CD83、CD86、HLA-DR)。结果表明,与阴性对照组比较,实验组和阳性对照组CD80、CD83、CD86、HLADR、CD1a的表达明显增加。粗根荨麻多糖可诱导脐血单核细胞分化成熟的DCs。     

未成熟树突状细胞与成熟树突状细胞的细胞骨架调控相关基因表达的差异分析

分析未成熟树突状细胞(immature dendritic cells,im DCs)向成熟的树突状细胞(mature dendritic cells,m DCs)分化的过程中,细胞骨架的调控相关基因及信号通路的表达变化,为进一步理解不同分化阶段树突状细胞(dendritic cells,DCs)的生物物理学特性、迁移能力和免疫学相关功能的改变。利用CEO数据库获得经CD14+单核细胞(monocytos,monos)诱导而成的im DCs和m DCs的m RNA的表达数据(芯片编号:GSE15076),通过R语言软件对原始数据进行处理,筛选差异表达基因(Log|FC|≥2,p0.05),利用STRING online-工具对差异表达基因进一步筛选(可信度≥0.4);Cytoscape软件构建蛋白质相互作用网络图(protein-protein interaction network,PPI),通过Cluster ONE对筛选后的差异表达基因进行聚类分析,筛选功能相关性密切的差异表达基因,并利用DAVID在线分析进一步进行GO分析和KEGG信号通路分析。m DCs相对于im DCs差异表达的基因共3 351个,上调基因1 801个,下调基因1 550个,其中C-C趋化因子受体活性、G-蛋白偶联的嘌呤核苷酸受体活性和异源三聚体G蛋白复合物等与细胞骨架调控密切相关。主要涉及的信号通路包括趋化因子/趋化因子受体信号通路、Rap1信号通路、Jak-STAT信号通路和PI3K-Akt信号通路等,其中的相关基因与细胞骨架的调控关系密切。这对进一步深入理解DCs的生物物理学特性、迁移能力和免疫学功能有一定的帮助。     

卵白蛋白诱导的WHBE兔树突状细胞甘露糖受体的表达及功能研究

该文研究了卵白蛋白诱导的WHBE(white hair black eyes)兔外周血来源树突状细胞(dendritic cells,DCs)甘露糖受体(mannose receptor,MR)的表达及功能,以阐明其对变应原易感的机制。分离WHBE兔外周血单核细胞,以20 ng/m L粒细胞–巨噬细胞集落刺激因子(granulocytemacrophage colony stimulating factor,GM-CSF)和20 ng/m L IL-4(interleukin-4)在体外联合诱导培养6 d,获得的细胞显示典型的树突状细胞形态特征。流式细胞术检测DCs表面分子CD86和人白细胞DR抗原(human leukocyte antigen-DR,HLA-DR)的表达,结果显示,WHBE兔和日本大耳白(Japanese white,JW)兔外周血DCs经卵白蛋白(ovalbumin,OVA)诱导后,CD86和HLA-DR表达水平均升高,其中,WHBE兔CD86水平高于JW兔。荧光定量PCR检测结果显示,OVA诱导后,两个品系兔外周血DCs的MR m RNA相对水平均显著升高(P0.05),且WHBE兔显著高于JW兔(P0.05)。抗原摄取实验发现,DCs经OVA刺激24 h后,抗原摄取能力低于对照组,MR抑制剂能显著降低DCs的抗原摄取率(P0.05,P0.01)。WHBE兔DCs抗原摄取率和平均荧光强度(mean flourscence indensity,MFI)均高于JW兔相同处理组,其中MFI值呈现极显著性差异(P0.01)。该研究结果表明,OVA诱发后,WHBE兔DCs可能通过其表面共刺激分子CD86、抗原识别受体MR的高表达,使抗原递呈功能增强,介导Th2型细胞过度活化,导致气道变态反应性炎症。WHBE兔MR的表达及功能特点可能是影响WHBE兔DCs对变应原敏感性的关键因素。     

树突状细胞受曲霉菌抗原冲击后的变化

目的探讨树突状细胞(DCs)在曲霉菌免疫中的作用以及曲霉菌抗原冲击对DCs功能的影响。方法小鼠骨髓制备DCs,于小鼠尾静脉接种,以3H-TdR掺入法检测DCs刺激小鼠脾脏T细胞分化能力,ELISA方法检测IFN-γ和IL-12的浓度,电镜观察DCs的形态,同时进行DCs的表型测定。结果电镜下可见DCs细胞形态不规则,表面伸展出大量树突,与曲霉菌共同培养后胞内含有大量的烟曲霉孢子,部分孢子的膜被破坏;与烟曲霉孢子共培养24h后,DCs细胞表形CD40、CD80、CD86的表达明显增高,产生IL-12p70约(700.40±93.75)pg/ml,明显高于对照组(141.96±52.06)pg/ml;烟曲霉抗原冲击DCs回输小鼠的脾脏T细胞增殖能力明显增强,体外接受烟曲霉抗原24h产生IFN-γ(1084.33±238.04)pg/ml,明显高于单纯DCs接种小鼠的脾脏T细胞(345.98±32.75)pg/ml(p<0.01)。结论DCs能吞噬并破坏加热灭活的烟曲霉孢子,并趋于成熟,抗原呈递能力增加。     

青钱柳多糖对小鼠骨髓来源树突状细胞表面分子表达的影响

为探讨青钱柳多糖（CPC）对小鼠骨髓来源树突状细胞（BMDCs）细胞形态及表面分子的影响,首先采用细胞因子诱导法,以贴壁法获得贴壁单核细胞,添加重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rmGM—CSF）和重组白细胞介素-4（rmIL-4）进行体外诱导,倒置显微镜及透射电镜观察细胞形态的变化;流式细胞术检测培养第6dDCs的表面标志CD80,CD86和MHCⅡ类分子的表达的变化。经CPC刺激24h后,采用流式细胞术检测DCs表面MHCⅡ类分子表达的变化。结果发现：经rmGM—CSF和traiL-4诱导获得的DCs随着培养时间的延长,细胞形态发生改变,逐渐变成具有树状突起的DCs。经LPS刺激后的DCs能够发生典型的DCs的成熟,而培养第6天的DCs具有典型的DCs表型特征,可用于后续进一步实验。与阴性对照相比,CPC显著促进树突状细胞表面MHCⅡ的表达,在浓度（10～200μg／mL）范围内呈现剂量依赖性。初步表明CPC可以促进树突状细胞的成熟。     

单核细胞与未成熟树突细胞的细胞骨架相关的核心差异基因表达的生物信息学分析

为进一步深入理解不同分化阶段树突状细胞(dendritic cells,DCs)的生物物理学特性和免疫学功能的差异。从CEO数据库获得CD14~+单核细胞(monocytes,mon)及其诱导而成的未成熟DCs(immature DCs,im DCs)的m RNA表达数据(芯片编号:GSE15076),利用R语言软件(RGui 3.2.3)解析原始数据并筛选差异基因。进一步利用STRING online工具筛选核心差异基因(可信度≥0.4),Cytoscape软件构造蛋白质相互作用网络图。对STRING online工具筛选核心差异基因进行京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)分析。实时荧光定量PCR技术检测mon及im DCs部分核心差异基因CCNB1、CDK5、IL-6和TNF在基因水平上的表达情况。im DCs相对于mon表达的差异的基因共3 371个(im DCs与mon对比,表达变化倍数≥2,p值0.05),其中上调基因为2 396个,下调基因为975个,通过进一步筛选后获得上调基因655个,下调基因110个,主要涉及m TOR信号通路、细胞代谢、细胞粘附等功能。其中上调基因中CDK5、CCNB1等差异基因与细胞骨架改变密切相关,而下调基因中IL-6、TNF、CXCR4等差异基因与细胞骨架改变密切相关,这对进一步深入理解im DCs独特的生物物理学特性和免疫学功能来说具有重要意义。