胰岛素诱导的低血糖大鼠下丘脑增食欲素-A的表达

目的：探讨急性低血糖应激对大鼠下丘脑增食欲素-A（orexin—A）的表达影响。方法：胰岛素皮下注射建立急性低血糖大鼠模型,检测外周血中葡萄糖和胰岛素水平的变化。采用免疫组织化学染色观察下丘脑orexin-A表达的改变和灰度值测量,观察其染色强度。结果：低血糖禁食组大鼠下丘脑orexin-A的表达明显增加（P〈0．05）,而低血糖进食组orexin-A表达无明显改变。灰度分析显示低血糖禁食组染色强度最高,与对照组比较有明显统计学差异（P〈0．05）。结论：急性血糖的降低可以增强大鼠下丘脑orexin-A的表达,而摄食行为可抑制此效应。     

禁食不同时段下丘脑穹窿周区orexin-A的表达

目的探讨禁食不同时段大鼠下丘脑穹窿周区orexin—A的表达及是否与摄食有关。方法观察禁食前后大鼠体重变化,采用免疫组织化学染色法观察禁食不同时段下丘脑穹窿周区orexin-A的表达变化,灰度值测量观察各组orexin—A的染色强度。结果大鼠体重随禁食时间的延长而逐渐降低,各组大鼠禁食前后体重变化有统计学差异（P〈O．01）;Orexin-A主要分布于下丘脑穹窿周区,禁食组orexin—A阳性神经元计数明显多于对照组（P〈O．05）,但不同禁食组间orexin-A阳性神经元计数比较没有统计学差异（P〉O．05）;禁食48h组染色强度最深,与对照组和禁食24h、72h组有明显统计学差异（P〈0．05）。结论禁食可以促进orexin-A的表达,禁食48h应该是一种理想的促进orexin-A活化的刺激方式,orexin-A系统可能参与摄食及能量代谢的调节。     

腹腔注射2-DG对大鼠下丘脑orexin-A神经元表达的影响

目的：探讨腹腔注射2-脱氧-D-葡萄糖（2-DG）对大鼠下丘脑增食欲素-A （ore xin-A）神经元的影响。方法：12只健康雄性SD大鼠,随机分为正常对照组（3只）、生理盐水对照组（3只）及腹腔注射2-DG组（6只）,2-DG剂量400 mg/kg,动物存活2 h,抽取脑脊液后灌注固定。实验结束后,采用免疫组织化学方法观察下丘脑orexin-A的表达、以及orexin-A与Fo s的双标情况,采用ELISA方法检测orexin-A在脑脊液中的含量。结果：[H TK]2-DG组的orexin-A阳性神经元数量和双标细胞阳性率（双标细胞占orexin-A阳性细胞的百分率）均高于对照组和生理盐水组（P<0.05）;并且2-DG组动物脑脊液中的orexin-A含量也明显高于其他两组（P<0.05）。结论：腹腔注射2-DG可激活大鼠下丘脑orexin-A神经元,orexin-A可能参与其诱导的急性应激反应。     

Orexin-1受体参与调节老年大鼠异氟醚麻醉苏醒延迟

目的:探索orexin能神经系统是否参与调节老年大鼠异氟醚麻醉觉醒延迟及其具体机制。方法:选择雄性SD大鼠,将其分为老年大鼠组(n=6,20月龄,体重600~800g)和青年大鼠组(n=6,3~4月龄,体重230~250 g)。采用翻正反射恢复时间作为麻醉觉醒时间,记录异氟醚麻醉下老年大鼠和青年大鼠各自的麻醉觉醒时间;通过免疫荧光染色和细胞计数确定老年大鼠和青年大鼠神经元数目,放射免疫法检测两组大鼠血浆orexin-A含量;Western blot检测老年大鼠和青年大鼠orexin-1和-2受体含量。结果:老年大鼠异氟醚麻醉觉醒时间明显长于青年大鼠(P0.05);老年大鼠orexin能神经元的数目与青年大鼠相比差异无统计学意义(P0.05),但其血浆orexin-A含量显著高于青年大鼠(P0.05);老年大鼠orexin-1受体在蛋白质表达中明显低于青年大鼠(P0.05),而orexin-2受体的表达与青年大鼠相比差异无统计学意义(P0.05)。结论:在老龄化过程中,虽然血浆中orexin-A含量代偿性增加,但是由于全脑中orexin-1受体含量的减少,使其并不能充分发挥促觉醒作用,这可能是导致老年人麻醉苏醒延迟的原因之一。     

DVC orexin-A通过调控ghrelin受体信号通路改善顺铂所致大鼠胃功能紊乱

目的:探讨迷走神经复合体(Dorsal vagal complex,DVC)内orexin-A对顺铂所致胃功能紊乱的影响及可能机制。方法:随机选取30只大鼠并将其分为3组(n=10):对照组(NS组);24 h顺铂治疗组;48 h顺铂治疗组。24 h顺铂治疗组和48 h顺铂治疗组大鼠分别在腹腔注射顺铂后24 h和48 h处死大鼠,对照组大鼠腹腔注射生理盐水(Normal saline,NS)。采用定量实时PCR检测各组大鼠下丘脑orexin-A mRNA的表达,ELISA测量大鼠脑脊液中P物质水平;DVC内微量注射orexin-A和ghrelin受体拮抗剂后,检测大鼠食物和高岭土的摄入量。结果:顺铂可显著减少大鼠下丘脑orexin-A mRNA表达,增加其脑脊液内P物质的浓度。外源性orexin-A可改善顺铂引起的厌食症和异食癖。orexin-A以上的效应可被DVC内预先注射ghrelin受体拮抗剂部分逆转。结论:orexin-A可能通过ghrelin神经肽系统改善顺铂在化疗过程中诱导的胃功能紊乱。     

Orexin-A通路对胃运动的调控研究

目的:探讨下丘脑外侧核(LHA)-伏隔核(NAcc)orexin-A神经和功能通路构成及该通路对胃运动的影响及潜在机制。方法:将健康成年雄性Wistar大鼠随机分为逆行追踪组和胃运动组:逆行追踪组大鼠采用逆行追踪技术结合免疫荧光组织化学染色法,观察下丘脑外侧核-伏隔核间是否存在orexin-A神经通路;胃运动组大鼠通过在体胃运动研究,观察伏隔核内微量注射不同浓度orexin-A对大鼠胃运动幅度和频率的影响,以及电刺激下丘脑外侧核后,大鼠胃运动的变化及机制。结果:荧光逆行追踪结合荧光免疫组织化学染色结果显示:下丘脑外侧核内有荧光金和orexin-A双重标记的神经元。胃运动研究结果显示:伏隔核内微量注射orexin-A,大鼠胃运动幅度和频率显著增加,并呈现显著剂量依赖关系(P0.05),伏隔核预先微量注射SB-334867,可反转该效应(P0.05)。电刺激下丘脑外侧核,大鼠胃运动幅度和频率显著增强(P0.05)。同样,伏隔核内微量注射SB-334867,再电刺激下丘脑外侧核,电刺激导致的胃运动增强效应显著减弱(P0.05)。结论:下丘脑外侧核-伏隔核存在orexin-A神经和功能通路,该通路可能通过orexin-A受体介导参与胃动力和能量代谢调控。     

Orexin能神经元在依托咪脂麻醉中的促觉醒作用

目的:观察orexin能神经元在依托咪脂麻醉中的促觉醒作用。方法:选择雄性SD大鼠36只,体重230～250g。将18只SD大鼠随机分为脂肪乳剂组(60 mg·kg~(-1)·h~(-1)),依托咪脂麻醉(50 mg·kg~(-1)·h~(-1))30 min组和60 min组(每组n=6),用放射免疫法检测3组大鼠血浆中orexin含量;3天后,将脂肪乳剂组大鼠颈椎脱臼处死后灌注取脑,另外两组在依托咪脂麻醉下灌注取脑,采用免疫荧光双标染色,分别观察3组大鼠orexin神经元活性。另取18只SD大鼠随机分为乳酸林格氏液组,orexin-A 30 pmol组和100pmol组(每组n=6),记录大鼠翻正反射消失时间为麻醉诱导时间及翻正反射恢复时间为觉醒时间。结果:与脂肪乳剂组相比,依托咪脂麻醉30 min和60 min后,血浆orexin-A含量下降(P0.05),有活性的orexin神经元数目减少(P0.01);与依托咪脂麻醉30 min组相比,60 min组有活性的orexin神经元数目减少(P0.05),但血浆orexin-A含量与30 min组无差异(P0.05);与乳酸林格氏溶液组相比,基底前脑区微注射orexin-A 30 pmol或100 pmol对麻醉诱导无影响,但能显著缩短依托咪脂麻醉觉醒时间(P0.05,P0.01);但orexin-A 30 pmol组和100 pmol组诱导和觉醒时间比较均无统计学差异(P0.05)。结论:依托咪脂麻醉抑制大鼠下丘脑orexin神经元的活性,orexin-A对依托咪脂麻醉具有促觉醒作用。     

第四脑室注射Orexin-A对大鼠饮食摄取条件性位置偏爱的影响

目的:探讨第四脑室注射orexin-A(OXA)对大鼠饮食摄取条件性位置偏爱的影响。方法:将30只大鼠随机分成3组,即对照组,低剂量组和高剂量组,第四脑室分别注射生理盐水(NS)、orexin-A或orexin-A受体拮抗剂SB334867,观察大鼠按压杠杆获取蔗糖的次数和最高频率的变化。再选择30只大鼠,第四脑室注射orexin-A和SB334867,观察大鼠对高脂饮食(HF)食物的摄入量。另选取30只大鼠第四脑室注射orexin-A或SB334867,将大鼠置于条件位置偏爱箱来检测大鼠对HF条件性位置偏爱的变化。结果:与对照组相比,24小时禁食大鼠,第四脑室注射orexin-A,可显著增加大鼠按压杠杆获取蔗糖的次数和最高频率(P0.05)。而SB334867可显著降低大鼠按压杠杆获取蔗糖次数以及最大频率(P0.05)。第四脑室注射orexin-A,可使大鼠HF摄入量显著增加(P0.05),第四脑室注射SB334867,不影响大鼠HF摄入量,但会抑制普通饮食的摄入(P0.05)。第四脑室注射orexin-A能增强对HF饮食位置偏爱性的表达,注射SB334867后会显著抑制大鼠对HF饮食位置偏爱性的表达(P0.05)。结论:第四脑室注射Orexin-A可影响大鼠摄食行为,增加高脂饮食的摄入量,增强对HF饮食位置偏爱性的表达。     

大鼠室旁核注射orexin-A对体重的影响

目的:探讨大鼠室旁核(PVN)注射orexin-A对体重的影响。方法:大鼠室旁核(PVN)微量注射orexin-A,用大脑置管埋管、组织化学染色等方法探讨PVN注射orexin-A对其体重的影响。结果:与安慰剂组大鼠相比,PVN注射orexin-A组大鼠体重明显减轻(P0.05),而orexin-A组和安慰剂组摄食量无明显差异(P0.05)。注射结束后6天,orexin-A处理大鼠的体重仍显著低于注射前(P0.05),而安慰剂组大鼠则比注射前显著增重(P0.05)。药物注射可显著降低机体脂肪,但并不特异存在于注射orexin-A或安慰剂的大鼠身上。Orexin-A组和安慰剂组大鼠的肌肉量和脂肪量均显著降低(P0.05),但注射orexin-A的大鼠降低更明显。与安慰剂组相比,orexin-A处理后的摄食转化率显著降低(P0.05)。结论:大鼠室旁核(PVN)注射orexin-A可通过增加活动量产生负能量平衡,引起体重减轻。     

性早熟雌性Sprague-Dawle大鼠下丘脑Lin28a和Lin28b表达异常

目的:研究正常雌性Sprague-Dawle(SD)大鼠不同性发育阶段及雌激素诱导性早熟后下丘脑Lin28a和Lin28b的表达及意义。方法:1)于雌性SD大鼠出生后15日(postnatal day 15,PND15)、PND23、PND35荧光实时定量PCR分析下丘脑Lin28a和Lin28b mRNA的表达,同时以ELISA法检测血清黄体生成素(LH)和雌二醇(E2)水平变化;2)苯甲酸雌二醇(estradiol benzoate,EB)诱导的性早熟大鼠随机分为EB-1组和EB-2组,分别于阴道开口(vaginal opening,VO)时及PND56两个时间点处死,相应的发育阶段的大鼠用无菌芝麻油(sesame oil,OIL)作为对照分为OIL-1和OIL-2组;荧光实时定量PCR分析下丘脑Lin28a和Lin28b mRNA的表达,ELISA法检测LH和E2水平变化,并观察性早熟对大鼠阴道开口、体重、顶臀径、胫骨长等生长发育指标的影响。结果:1)PND15、PND23和PND35组下丘脑Lin28a和Lin28b mRNA表达、血清LH和E2水平无统计学差异(P0.05);2)EB-1组下丘脑Lin28a和Lin28b mRNA表达高于OIL-1组(P0.05),血清LH和E2水平与OIL-1组相比无统计学差异(P0.05);EB-2组下丘脑Lin28a和Lin28b mRNA表达高于OIL-2组(P0.05),血清LH和E2水平低于OIL-2组(P0.05);3)与OIL-2组比较,EB-2组VO时间明显提前(P0.01),体重、顶臀长、胫骨长差异无统计学差异(P0.05)。结论:外源性雌激素引起的性早熟可能导致下丘脑Lin28a和Lin28b表达异常。     

肠易激综合征模型WHBE兔神经-体液-内分泌系统调节的变化

目的观察肠易激综合征（IBS）模型WHBE兔神经内分泌激素和电解质水平的变化,探讨神经-体液-内分泌系统在IBS中的作用。方法以湿热环境应激加小剂量致泻剂诱导WHBE兔建立IBS模型,在造模9d和14d时取血分离血清,检测血清中5-羟色胺（5-HT）、多巴胺（DA）、促肾上腺皮质激素（ACTH）、皮质醇（COR）、β-内啡肽（β-EP）激素和K^＋、Na^＋、cl^-含量的变化,并以JW兔作对照。结果与正常对照组比,造模9d时WHBE兔的5-HT、DA、ACTH、β-EP、COR均显著升高（P〈0．05,P〈0．01）,Na^＋、K^＋含量均显著降低（P〈0．01）,而JW兔ACTH、β-EP、COR均显著升高（P〈0．05,P〈0．01）,K^＋含量显著降低（P〈0．05）;造模14d时WHBE兔5-HT、ACTH、β-EP均显著升高（P〈0．05,P〈0．01）,JW兔ACTH显著升高（P〈0．05）;相关分析显示,IBS模型中血清中5-HT、COR与Na^＋、K^＋浓度呈显著负相关（P〈0．05,P〈0．01）,血清中DA、β-EP水平与Na^＋、K^＋、Cl^-浓度呈显著负相关（P〈0．05,P〈0．01）,ACTH水平则与K^＋浓度呈显著负相关（P〈0．01）。结论IBS的发生不仅与HPA轴兴奋性升高有关,亦与体液因素有关,故神经-体液-内分泌系统参与了WHBE兔IBS的发生过程。     

D-半乳糖致亚急性衰老大鼠尿液排泄情况观察及其多尿机制探讨

目的观察D-半乳糖(D-gal)致亚急性衰老大鼠在尿液排泄方面的特点并探讨其多尿症状机制。方法在初筛合格的SD大鼠颈背部皮下注射浓度为5%的D-gal生理盐水溶液125mg/(kg·d)连续8周。观察动物在造模期间和停止造模后两周内24h总尿量及水负荷后排尿情况的变化;通过测定模型动物尿中K+、Na+、CL-浓度,血中ALD、ADH、ANP浓度及肾脏病理形态学观察,探讨模型动物24h总尿量增加的机制。结果与正常对照组相比较,模型组动物24h总尿量明显增加;水负荷后6h内排尿潜伏期明显缩短,排尿次数明显增多,但总尿量没有明显差异;模型动物尿中Na+、CL-浓度明显升高,K+浓度明显降低;血浆ALD、ADH含量显著降低,ANP含量显著增加,肾脏出现一系列硬化特征。结论 D-gal致亚急性衰老大鼠出现的总尿量增加和排尿次数增多的情况可能与其ADH、ALD、ANP合成与分泌异常及肾脏病理形态学改变有关。     

去势大鼠阴茎海绵体胱硫醚γ裂解酶与硫化氢的表达

目的观察去势大鼠阴茎海绵体胱硫醚γ裂解酶（Cystathionine-γ-lyase,CSE）/硫化氢（Hydrogen sulphide,H2S）的变化,进一步探讨勃起功能障碍的发病机制。方法雄性SD大鼠72只分4组：对照组、假手术组,去势组和去势炔丙基甘氨酸（PAG,CSE阻断剂）组,检测基础条件下和阿扑吗啡（Apomorphine,APO）刺激后的海绵体内压（Intracavernous pressure,ICP）及勃起率;激光共聚焦显微镜检测CSE在大鼠勃起不同时期阴茎海绵体组织中的表达,敏感硫电极测定H2S在勃起不同时期的含量。结果与假手术组比较,去势组和去势PAG组ICP与勃起率下降（P〈0.01）;且去势PAG组较去势组ICP明显下降（P〈0.01）;阿朴吗啡刺激后,与假手术组比较,勃起前去势组和去势PAG组CSE蛋白表达降低（P〈0.01）,勃起中去势各组较假手术组CSE蛋白表达降低（P〈0.01）,且去势PAG组较去势组CSE蛋白表达明显降低（P〈0.01）;勃起后各组间CSE蛋白表达变化无差异。勃起前和勃起中去势各组较假手术组H2S含量下降（P〈0.05）,且勃起中去势PAG组较去势组H2S含量明显下降（P〈0.01）：勃起后去势组和去势PAG组较假手术组H2S含量下降（P〈0.01）。结论去势大鼠勃起功能障碍与CSE和H2S表达下降有关。     

福辛普利对血管紧张素Ⅱ下调大鼠肾小管上皮细胞klotho基因表达的干预作用

目的:研究福辛普利(fosinopril,Fos)对klotho基因表达的影响,探讨Fos对AngⅡ下调klotho基因表达的影响机制。方法:大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)与干预药物共培养。按Fos时间梯度0(对照组),3,6,12,24h和浓度梯度0(对照组),10-9,10-8,10-7,10-6,10-5mol/L分组培养,用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测klotho mRNA表达水平;设A.对照组,B.AngII(10-7mol/L)组,C.Fos(10-5mol/L)组,D.Fos(10-5mol/L)+AngII(10-7mol/L)组,E.Fos(10-5mol/L)干预12h后+AngII(10-7mol/L)共培养组,培养24h,用RT-PCR和免疫组化法检测klotho mRNA和蛋白表达。结果:①Fos对klotho mRNA表达呈时效依赖关系(P0.05),而量效关系不明显(P0.05);②AngII可抑制klotho mRNA和蛋白表达,给予Fos和AngII共同作用,或Fos预先干预后均能抑制AngII下调klotho mRNA表达,组间比较差异具有显著性意义(P均0.05)。结论:Fos对klotho mRNA表达存在时效依赖关系,Fos可能对klotho mRNA和蛋白表达起上调作用,并能抑制AngⅡ对klotho mRNA和蛋白的下调表达。     

伏隔核微注射orexin-A 对大鼠摄食和活动的影响

目的:探讨伏隔核微注射orexin-A后,大鼠摄食和活动的变化。方法:采用SD大鼠(250-280g),用脑立体定位仪在伏隔核植入微量注射管。大鼠随机分组,分别微注射乳酸格林液(Ringer’s),orexin-A 100pmol和500pmol。观察微注射后大鼠0-1h,1-2h,2-4h摄食和0-30min,30-60min,60-90min,90-120min活动性变化。结果:Orexin-A微注射后,大鼠0-1h,1-2h摄食量增加;30-60min,60-90min,90-120min的活动性显著增加(P<0.05 vs对照组)。结论:伏隔核是orexin-A刺激大鼠增加摄食量,提高其活动性的作用点。     

拉米夫定联合阿德福韦酯治疗乙型肝炎的疗效及对HBV耐药基因突变的影响

目的探讨拉米夫定联合阿德福韦酯治疗慢性乙型肝炎的疗效,并利用反向点杂交技术检测其对HBV基因耐药突变的影响。方法156例慢性乙型肝炎患者随机分为2组：对照组70例采用拉米夫定治疗,治疗组86例采用拉米夫定联合阿德福韦酯治疗。采用实时荧光定量PCR和ELISA检测2组治疗前和治疗后48周的HBV-DNA载量和HBeAg并采用PCR-反向点杂交技术（PCR-RDB）检测2组治疗48周后的HBV耐药基因突变情况。结果对照组及治疗组在经过48周治疗后HBV-DNA载量较治疗前都明显下降（P 〈0. 05）,治疗组HBV-DNA载量明显低于对照组（P〈0.05）。治疗组经过48周治疗后HBeAg的阴转率为54.9%,明显高于对照组15.0% （P 〈0.05）。对照组44例未出现耐药突变,25例拉米夫定耐药突变中rtL180M突变6例,rtM204V/I突变11例,rtL180M ＋ rtM204V/I混合突变8例;阿德福韦酯HN236T耐药突变1例。治疗组77例未出现耐药突变;5例拉米夫定耐药突变中rtL180M突变1例,rtM204V/I突变2例,rtL180M ＋ rtM204V/I混合突变2例;阿德福韦酯耐药突变中rtN236T突变1例;拉米夫定和阿德福韦酯交叉耐药rtN236T ＋ rtM204V/I混合突变3例。对照组耐药突变率为37. 1%（26/70）明显髙于治疗组的10.5%（9/86）（P〈0.05）。结论拉米夫定联合阿德福韦酯对治疗慢性乙型肝炎方面有效并在减少HBV耐药基因突变方面具有一定的作用。     

血清肺表面活性蛋白A动态变化与非小细胞肺癌患者放射性肺炎发生的相关研究

目的：探讨接受放疗的非小细胞肺癌（NSCLC）患者血清中肺表面活性蛋白A（PS-A）水平的动态变化与放射性肺炎（RP）发生的关系。方法：对68例接受三维适形放疗的Ⅲ期肺癌患者采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测于放疗前、放疗剂量达40～50 Gy时及放疗后4周血清中PS-A水平。结果：25例患者发生RP。RP者中放疗前PS-A为（38.6±20.8）ng/mL,放疗中升高达（51.4±19.3）ng/mL（P〈0.05）,放疗后PS-A高于放疗前[（78.2±21.5）ng/mL;P〈0.05]。在无RP者中放疗前PS-A与放疗中、后均相似（P〉0.05）。RP者与无RP者中放疗前PS-A相似（P〉0.05）,放疗中及放疗后前者PS-A明显高于后者（P〈0.05）。结论：PS-A水平变化与RP发生密切相关,动态监测其变化可早期预测RP发生,可作为急性放射性肺损伤易感性指标。     

Centrally administered orexin-A activates corticotropin-releasing factor-containing neurons in the hypothalamic paraventricular nucleus and central amygdaloid nucleus of rats: possible involvement of central orexins on stress-activated central CRF neurons

We examined the effects of centrally administered orexin-A on corticotropin-releasing factor (CRF)-containing neurons in the hypothalamic paraventricular nucleus (PVN) and the central amygdaloid nucleus (CeA) of rats, using dual immunostaining for CRF and Fos. Ninety minutes after intracerebroventricular administration of orexin-A, approximately 96% and 45% of CRF-containing neurons expressed Fos-like immunoreactivity (LI) in the PVN and the CeA, respectively. We also examined the effects of immobilized stress and cold exposure on orexin-A-containing neurons in the rat hypothalamus using dual immunostaining for orexin-A and Fos. After immobilized stress for 20 min and cold exposure at 4 degrees C for 30 min, approximately 24% and 15% of orexin-A-containing neurons expressed Fos-LI, respectively. These results suggest that orexins in the central nervous system may be involved in the activation of central CRF neurons induced by stress.