中枢注射抗Orexin抗体对禁食大鼠摄食的抑制作用

目的:探讨中枢注射抗Orexin抗体对禁食大鼠摄食的抑制作用。方法:采用免疫组织化学法和蛋白质免疫印迹分析法,对Orexin抗体的特异性进行了检测,分析Orexin阳性神经元和阳性神经纤维在大脑中的分布。给予24 h禁食大鼠中枢注射抗Orexin抗体,计算其对大鼠食物摄入量的影响。结果:蛋白质免疫印迹分析显示,Orexin抗体能够检测到合成的Orexin-A。免疫组织化学分析显示,Orexin阳性神经元存在于外侧下丘脑区域和穹窿周核,Orexin阳性神经纤维大量投射至弓状核、下丘脑室周核和下丘脑室旁核、菱形丘脑核、丘脑室旁核、缰内侧核和纹质丘脑、中脑的中央灰质区、蓝斑核和中缝核、脑桥和髓质的网状结构、对疑核和迷走神经复合体。与注射羊血清相比,给予45μg/10μL抗Orexin抗体侧脑室注射则抑制了大鼠的食物摄入量(P0.05)。高剂量抗Orexin抗体能显著地抑制大鼠摄食,并且呈剂量依赖关系(P0.05)。结论:中枢注射抗Orexin抗体对禁食大鼠摄食具有抑制作用,并呈剂量依赖关系。     

Orexin-A通路对胃运动的调控研究

目的:探讨下丘脑外侧核(LHA)-伏隔核(NAcc)orexin-A神经和功能通路构成及该通路对胃运动的影响及潜在机制。方法:将健康成年雄性Wistar大鼠随机分为逆行追踪组和胃运动组:逆行追踪组大鼠采用逆行追踪技术结合免疫荧光组织化学染色法,观察下丘脑外侧核-伏隔核间是否存在orexin-A神经通路;胃运动组大鼠通过在体胃运动研究,观察伏隔核内微量注射不同浓度orexin-A对大鼠胃运动幅度和频率的影响,以及电刺激下丘脑外侧核后,大鼠胃运动的变化及机制。结果:荧光逆行追踪结合荧光免疫组织化学染色结果显示:下丘脑外侧核内有荧光金和orexin-A双重标记的神经元。胃运动研究结果显示:伏隔核内微量注射orexin-A,大鼠胃运动幅度和频率显著增加,并呈现显著剂量依赖关系(P0.05),伏隔核预先微量注射SB-334867,可反转该效应(P0.05)。电刺激下丘脑外侧核,大鼠胃运动幅度和频率显著增强(P0.05)。同样,伏隔核内微量注射SB-334867,再电刺激下丘脑外侧核,电刺激导致的胃运动增强效应显著减弱(P0.05)。结论:下丘脑外侧核-伏隔核存在orexin-A神经和功能通路,该通路可能通过orexin-A受体介导参与胃动力和能量代谢调控。     

侧脑室注射orexin 对顺铂诱导大鼠异食癖的影响*

目的:研究化疗后止呕药联合侧脑室注射orexin能否改善顺铂诱导的异食癖与食欲减退,进一步探索吡嘧司特联合orexin抗呕吐的机制。方法:1腹腔注射止呕药并侧脑室置管给予orexin,观察大鼠高岭土摄取及摄食改变。2EIA法测量脑脊液中P物质含量。结果:1顺铂中高剂量组高岭土摄入增加、摄食和体重减少,呈量效依赖关系(P0.05~0.01)。2恩丹西酮早期抑制高岭土摄入(P0.05)。联合用药后延长该效应且晚期增加摄食(P0.05)。3阿瑞吡坦晚期抑制高岭土摄入,呈量效依赖关系(P0.05~0.01),联合用药后第4天,高岭土摄取减少、摄食增加(P0.05)。4吡嘧司特晚期抑制高岭土摄入,呈量效依赖关系(P0.05~0.01)。高剂量吡嘧司特晚期增加摄食(P0.05)。联合用药后第4、5天,高岭土摄入减少,第1、4、5天摄食增加(P0.05)。5注射顺铂脑脊液中P物质浓度升高(P0.05)。联合用药能够降低P物质浓度(P0.05)。结论:联合应用orexin能够延长止呕药作用期并改善顺铂引起的食欲减退。吡嘧司特通过减少P物质的含量,抑制高岭土摄入。     

Orexin 和P物质对顺铂诱发大鼠异食癖的影响

目的:观察食欲素(Orexin)和P物质(SP)对顺铂诱发大鼠异食癖的影响。方法:雄性Wistar大鼠被随机分为对照组和顺铂处理组,顺铂处理组给予大鼠顺铂(3或6 mg/kg,腹腔注射),对照组给予等量生理盐水。记录顺铂大鼠摄食高岭土量、摄食量的改变;Real-time PCR法观察顺铂对大鼠下丘脑Orexin和延髓中SP前体-前速激肽原A(PPT-A)m RNA表达的影响;分别和联合应用SP受体(NK1受体)拮抗剂阿瑞匹坦和Orexin-A对顺铂大鼠异食癖和摄食量的作用。结果:皮下注射3 mg/kg(低剂量组)的顺帕后大鼠高岭土摄入量和摄食量与对照组相比无明显差异(P0.05),而注射6 mg/kg(高剂量组)顺铂后,大鼠高岭土摄入量与对照组和低剂量组相比显著增加(P0.05);高剂量的顺铂作用12 h时,大鼠延髓内PPT-A的m RNA表达有轻微增加,但无统计学差异(P0.05),24 h后,延髓内PPT-A的m RNA表达量显著增加(P0.05)。在此后持续观察的5天中,顺铂可持续引起延髓中PPT-A的mRNA表达增高,在第5天时PPT-A的m RNA仍维持166.23±16.92%的高表达。高剂量顺铂抑制大鼠下丘脑中Orexin的mRNA表达,24 h时Orexin降低幅度最明显,为对照组的34.81±7.22%(P0.05)。此后检测的5天,Orexin浓度均低于对照组;将阿瑞匹坦和orexin联合应用,大鼠高岭土摄入量较单独应用阿瑞匹坦或orexin明显减少,摄食量显著增加(P0.05)。结论:P物质和orexin通路对顺铂化疗大鼠的异食癖和摄食量调控具有协同作用。     

顺铂化疗对下丘脑、血浆ghrelin和orexin 表达的影响

目的:观察顺铂化疗对下丘脑、血浆ghrelin、orexin表达和摄食量的影响。方法:Real-time PCR、ELISA法观察顺铂对大鼠下丘脑、血浆ghrelin、orexin表达及摄食量的影响;19名接受顺铂经导管动脉灌注化疗(TAI)的肝细胞患者(HCC),ELISA法检测化疗前和化疗后血浆ghrelin、orexin的变化,用直观类比标度(VAS)(0-10)评估食欲和摄食量。结果:每日腹腔注射顺铂6 mg/kg,1-5 d大鼠摄食量均显著减少(P0.05),且1-4 d血浆酰化ghrelin显著降低(P0.05),5d时浓度仍低于对照组,但无统计学意义。血浆非酰化ghrelin和总的血浆ghrelin没有明显变化(P0.05),而1-5天血浆orexin水平均明显降低(P0.05);顺铂注射1 d后,大鼠下丘脑ghreilin和orexin的mRNA表达量均显著减少(P0.05),ghrelin mRNA变化持续3 d,orexin mRNA在化疗后5 d仍低于对照组(P0.05);肝细胞癌患者化疗后1至8 d的摄食量明显降低,1 d和2 d时的血浆酰化ghrelin显著低于化疗前水平(P0.05)。3 d时逐渐恢复,化疗后3 d、4 d和7 d时血浆酰化ghrelin浓度与化疗前无统计学差异(P0.05)。血浆非酰化ghrelin和总的血浆ghrelin没有明显变化(P0.05);化疗后1~4 d时血浆orexin浓度均显著降低(P0.05),化疗后7 d时orexin基本恢复到化疗前水平(P0.05)。结论:顺铂可降低大鼠下丘脑和血浆ghrelin、orexin的mRNA表达,HCC的TAI会降低血浆酰化ghrelin、orexin、和摄食量。     

侧脑室注射Orexins对大鼠摄食的影响及机制

目的:探讨侧脑室注射orexins(食欲素)、NPY(神经肽Y)、MCH(黑色素聚集激素)和甘丙肽对大鼠摄食的影响及其机制。方法:将成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组、侧脑室注射组和室旁核(PVN)注射组。通过套管将orexin-A、orexin-B、NPY、MCH和甘丙肽分别注射至侧脑室和PVN内,随后测量大鼠食物摄入量,并检测PVN、弓状核(ARC)和VMH内c-fos的表达。结果:与对照组比较,侧脑室注射NPY、MCH和orexin-B 2 h后,大鼠摄食量显著增多(P0.05)。相较于orexin-B和MCH,NPY对摄食的影响更显著(P0.05)。与NS对照组比较,侧脑室注射甘丙肽和orexin-A 1 h后,大鼠摄食量显著增多(P0.05)。与NS对照组比较,侧脑室注射orexin-A可显著增加c-fos在PVN和ARC中的表达,在VMH中效应较弱(P0.05)。与NS对照组比较,PVN注射NPY能显著增加大鼠2 h摄食量(P0.05),PVN注射orexin-A能显著增加大鼠2 h和4 h摄食量(P0.05)。结论:orexins与可促进大鼠摄食,此效应可能通过下丘脑参与摄食调控中枢PVN和ARC而实现的。