高效液相色谱法测定山楂叶中熊果酸含量的研究

本文建立了一种可靠性高、重现性好的高效液相色谱(HPLC)测定山楂叶中熊果酸含量的方法,在测定中采用富集和固相萃取组合纯化工艺去除干扰物质。高效液相色谱测定条件为Hypersil(ODS)色谱柱,流动相为甲醇:0.2%磷酸二氢钠(90∶10,V/V),检测波长210nm,流速0.8mL/min。熊果酸浓度在100~800μg/mL与峰面积存在良好线性关系(r2=0.9992),该方法准确可靠,日内稳定性标准偏差在0.6%~1.5%,日间稳定性标准偏差在0.7%~2.6%。为不同产地山楂叶中熊果酸含量建立有效的分析方法。     

RP-HPLC法测定枇杷叶中熊果酸和齐墩果酸的含量

目的:建立枇杷叶中熊果酸和齐墩果酸的含量测定方法.方法:采用RP-HPLC法测定,色谱柱为ZorbaxODS柱,用甲醇-1%醋酸水溶液(88:12)为流动相,检测波长为215 nm.结果:熊果酸和齐墩果酸的平均回收率分别为98.1%,97.3%(n=3),RSD分别为1.78%,1.93%(n=3).结论:本法准确、灵敏、快速,可作为枇杷叶药材及其制剂的质量控制方法之一.     

响应面法优化泡桐叶中熊果酸的超声波提取工艺

为探讨泡桐叶中熊果酸的超声波提取工艺,通过中心复合设计-响应面法研究乙醇浓度(X1)、液固比(X2)、超声波提取时间(X3)对泡桐叶中熊果酸提取得率的影响。结果表明,各因素对熊果酸得率的影响顺序为乙醇浓度(X1)超声波提取时间(X3)液固比(X2);超声波辅助提取泡桐叶中熊果酸的最优工艺条件为:乙醇浓度89%,液固比31 m L/g,超声时间37 min;在此条件下,熊果酸得率为14.80 mg/g,与预测值相近,二次回归模型预测性良好。     

不同pH值与电位耦合对牛血清白蛋白包被酒石酸长春瑞滨纳米粒制备工艺的影响

在反溶剂法制备纳米粒过程中,pH值在一定程度上会对其产生影响。本文通过在不同酸碱环境下运用反溶剂法制备牛血清白蛋白包被酒石酸长春瑞滨纳米粒,进而借助于电位耦合作用来研究纳米粒制备工艺。研究结果表明:当pH=4.5至7.5时,酒石酸长春瑞滨和牛血清白蛋白带有异种电荷,而当pH=2.5,3.5,8.5,9.5时它们均带有同种电荷。当pH=7.5时,牛血清白蛋白带有负电荷即-8.52 mV,酒石酸长春瑞滨带有正电荷即+4.48mV。此时得到牛血清白蛋白包被酒石酸长春瑞滨纳米粒粒径为193.3 nm,Zeta电位为-30.86 mV,而且在该pH下对纳米粒制备工艺进行了优化,最终它的载药量和包封率达到了45.6%和90.6%。     

HPLC-DAD法测定血满草中熊果酸和齐墩果酸的含量(英文)

建立了HPLC-DAD法测定血满草中熊果酸和齐墩果酸含量,并进行方法学考察。采用HPLC-DAD进行分析,fusion-RP C18柱(4.6 mm×250 mm,4μm),甲醇-0.2%磷酸水溶液(90∶10)为流动相,检测波长210 nm,体积流量1.0 mL/min。同时采用微波辅助提取、回流提取、索氏提取、冷浸提取、超声提取五种方法对血满草中熊果酸和齐墩果酸含量进行测定并比较不同方法所得结果的差异,还比较了血满草不同部位中熊果酸和齐墩果酸的含量差异。测定结果表明熊果酸进样量在3.6～8.4μg范围内,齐墩果酸进样量在3.2～16μg范围内,呈良好线性关系。血满草中熊果酸和齐墩果酸平均回收率分别为98.3%和101.4%(n=5),相对标准偏差分别为1.13%和0.72%(n=5)。五种方法比较得出索氏提取得熊果酸和齐墩果酸含量最高;血满草花中熊果酸和齐墩果酸含量最高,而根中含量最低。该方法使血满草中熊果酸和齐墩果酸达到基线分离,操作简便,结果稳定可靠。     

牛血清白蛋白在聚乙二醇/葡聚糖双水相体系中分配特性的研究

采用考马斯亮蓝G250染色法测得室温下BSA在PEG/dextran双水相体系中的分配系数。以BSA在PEG/dextran体系的下相富集为目标,研究了PEG的分子量、浓度、dextran浓度以及所加入中性盐的种类与浓度、体系pH诸因素对其分配特性的影响。实验结果表明,在PEG4000/dextran体系中,采用PEG质量分数9%-dextran质量分数9%的浓度组成,同时在pH=7.0,NaC l浓度为0.2 mol.L-1或pH6.0,NaC l浓度为0.34 mol.L-1的工艺条件下萃取BSA均可达最小分配系数,其值为0.014。     

红花叶总黄酮提取纯化工艺优化及抗急性肝损伤活性研究CSCD

通过单因素试验和Box-Behnken响应面法优化红花叶总黄酮(total flavonoids from Carthamus tinctorius L.leaf,TFCTLL)的提取、纯化工艺。以总黄酮提取率为评价指标,考察料液比、乙醇浓度、提取时间和提取次数四个提取因素的最佳水平。并采用AB-8大孔树脂对获得的TFCTLL进一步富集纯化。结果确定最佳提取工艺为料液比1∶27、乙醇浓度80%、提取时间65 min、提取次数2次。纯化工艺确定选用AB-8大孔树脂、用95%乙醇洗脱、pH=7,富集纯化后得到的TFCTLL纯度为61.42%。采用UPLC-TOF-Q-MS法共鉴定了TFCTLL中木犀草苷等4个化学成分。以CCl_(4)诱导小鼠急性肝损伤模型,实验结果表明TFCTLL给药组小鼠血清中ALT、AST和TBA含量较模型组显著降低,小鼠肝组织病变程度减轻。证明其具有抗急性肝损伤的药效活性。本研究可为红花非药用部位资源的充分利用提供数据支撑。     

HPLC法同时测定鸡矢藤中熊果酸和齐墩果酸的含量

目的：建立高效液相色谱法同时测定鸡矢藤中熊果酸和齐墩果酸的含量。方法：色谱柱为DiamonsilTM C18（250×4.6 mm,5滋m）,流动相为甲醇-0.05mol.L-1磷酸溶液（93∶7）为流动相,检测波长210 nm,进样量10滋L。结果：熊果酸在21.28滋g.mL-1～212.8滋g.mL-1范围内线性关系良好（r=0.9997）,平均回收率为97.79%（RSD=1.30%）;齐墩果酸在24.02滋g.mL-1～240.2滋g.mL-1范围内线性关系良好（r=0.9996）,平均回收率为98.36%（RSD=1.11%）。结论：该方法简便、灵敏、准确,可用于鸡矢藤药材的质量评价。     

鱼腥草多糖的制备及其体外抗病毒活性研究

以不同方法制备鱼腥草多糖,探究其体外抗EV71、RSV、CV-B3三种病毒的活性。分别采用胃蛋白酶解法、胃蛋白酶解-Sevag结合pH=4、胃蛋白酶解-Sevag结合pH=7试剂法制备多糖,并检测其含量;采用CPE法考察不同提取工艺的多糖和鱼腥草水提物对EV71、RSV和CV-B3的体外抗病毒作用。鱼腥草不同冻干产物—水提物、酶法提取多糖、酶法-Sevag pH=7提取多糖、酶法-Sevag pH=4提取多糖得率分别为1.87%、1.01%、0.83%、0.88%,多糖含量分别为18.21%、22.68%、29.03%、23.07%;对EV71的治疗指数为24.05、2.73、12.59、6.39(阳性药利巴韦林的治疗指数为43.16),治疗效果为水提物≈酶法-Sevag pH=7提取多糖酶法-Sevag pH=4提取多糖酶法提取多糖;对RSV的治疗指数分别为2.46、5.43、15.57、9.72(利巴韦林为19.76),治疗效果为酶法-Sevag pH=7提取多糖酶法-Sevag pH=4提取多糖酶法提取多糖水提物,对CV-B3的治疗指数为2.81、5.34、17.86、5.98(利巴韦林为18.39),治疗效果为酶法-Sevag pH=7提取多糖酶法-Sevag pH=4提取多糖≈酶法提取多糖水提物。说明鱼腥草水提物和3种方法制备的多糖对EV71、RSV和CV-B3均具有一定的体外抗病毒活性。     

正交实验优选沟眶象甲壳素的超声波提取工艺

以沟眶象干粉为原材料,通过单因素实验和正交实验优化了沟眶象甲壳素的超声波辅助酸碱法提取工艺。在不同条件下,研究超声处理的时间、功率、温度以及柠檬酸、氢氧化钠的浓度和固液比对甲壳素提取的影响,确定了沟眶象甲壳素的最佳提取工艺条件:氢氧化钠质量分数9%、固液比1︰16、温度65℃、时间50 min、超声功率60%;柠檬酸质量浓度1.8 g/L、时间25 min、固液比1︰12、室温、超声功率100%。在此工艺条件下得到的甲壳素样品得率为16.50%,比传统酸碱法提取甲壳素的得率减少2.69%,但优化后的超声波辅助酸碱法所用时间仅占传统酸碱法的4.31%,因此超声波辅助酸碱法具有明显的优势。     

熊果酸衍生物的合成及其对肺癌细胞活性抑制的研究

目的：探讨合成的熊果酸衍生物对肺癌LTEP-α-2肿瘤细胞增殖的抑制作用。方法：熊果酸经氧化、肟化和腙化合成为3-氧代熊果酸、3-肟基熊果酸和3-（2＇,4＇-二硝基）-苯腙熊果酸。采用MTT法检测熊果酸及其衍生物对肺癌LTEP-α-2细胞的体外抗肿瘤活性。结果：熊果酸及其衍生物对肺癌LTEP-α-2细胞有抑制作用,且3-肟基熊果酸对肺癌LTEP-α-2细胞抑制作用高于其他化合物,其抑制率为90.0%,IC50为7.4μg/m L。结论：熊果酸衍生物3-肟基熊果酸抗肺癌LTEP-α-2肿瘤细胞活性高于熊果酸的活性。     

壳聚糖载体的改性及其用于固定化漆酶的研究

利用有机酸改性壳聚糖,并用交联法制备酸化的壳聚糖载体,然后用改性壳聚糖载体固定漆酶。甲酸、乙酸改性壳聚糖的最适条件:壳聚糖与甲酸、乙酸的质量摩尔比(g/mol)分别为100∶1、100∶1.5,戊二醛的质量分数为1%,缓冲溶液的pH分别是4.4、5.0,反应时间为3h;壳聚糖与酒石酸、草酸的质量摩尔比(g/mol)分别为100∶0.5、100∶2,戊二醛的质量分数为2%,缓冲溶液的pH分别是3.6、4.2,反应时间为4.5h。不同有机酸改性的壳聚糖用于漆酶的固定,其酶活都有不同程度的提高,尤其用酒石酸改性的壳聚糖载体效果最好,其酶活提高了57%。     

决明子营养价值分析及蛋白提取工艺研究

以大决明子为原材料,基于氨基酸比值系数法,对决明子的营养价值进行了分析;并以碱性缓冲液为提取剂,进行决明子蛋白提取工艺研究,探讨了缓冲液浓度及pH值、料液比、浸泡时间对蛋白提取率的影响,最后用正交试验确定大决明子蛋白的最佳提取工艺。结果表明决明子的营养价值高于大豆和紫花苜蓿,与南瓜接近略低于鸡蛋;提取工艺条件最佳为50 mmol/L、pH值=8.0的KH2PO4-NaOH缓冲液,料液比1 g：50 mL,浸泡提取时间12h。此条件下决明子蛋白的提取率为93.3%。     

Antileishmanial activity of isolated triterpenoids from Pourouma guianensis.

The inhibiting activity of triterpenoids isolated from the methanolic extract of Pourouma guianensis (Moraceae) leaves is described for promastigotes and intracellular amastigotes of Leishmania amazonensis. Whereas the fractions containing apigenin, friedelin, epi-friedelinol, arjunolic acid, hyptatic acid B, stigmasterol and sitosterol were of no or relatively low inhibitory activity, fractions containing tormentic acid, 2alpha,3beta-dihydroxyursan-12-en-28-oic acid, 2alpha,3beta-dihydroxyolean-12-en-28-oic acid, oleanolic acid and ursolic acid were very potent in inhibiting promastigote growth at 100 microg/ml. Of the eleven isolated compounds, however, only ursolic acid and oleanolic acid showed high activity against intracellular amastigotes (IC50 value = 27 microg/ml and 11 microg/ml, respectively), which was superior to the control drug Glucantime (IC50 value = 83 microg/ml). The antileishmanial activity of oleanolic acid was directed against the parasite and not due to activation of nitric oxide intermediates by macrophages, but this triterpenoid also significantly inhibited the phagocytic capacity of those cells at concentrations above 40 microg/ml, indicating a cytotoxic effect. These results indicate that Pourouma guianensis contains many triterpenoids and some, such as ursolic and oleanolic acids, may serve as lead compounds for new antileishmanial drugs, but chemical modifications may be necessary to avoid unselective cytotoxicity.     

Inhibitory effect of ursolic acid purified from Origanum majorana L on the acetylcholinesterase

We screened 139 herbal spices in search of the acetylcholinesterase (AChE) inhibitor from natural resources. AChE inhibitors, which enhance cholinergic transmission by reducing the enzymatic degradation of acetylcholine, are the only source of compound currently approved for the treatment of Alzheimer's Disease (AD). Among these herbs, edible plants and spices, the ethanol extract from Origanum majorana L. showed the highest inhibitory effect on AChE in vitro. By sequential fractionation of Origanum majorana L. the active component was finally identified as ursolic acid (3 beta-Hydroxyurs-12-en-28-oic acid). The ursolic acid of Origanum majorana L. inhibited AChE activity in a dose-dependent and competitive/non-competitive type. The Ki value (representing the affinity of the enzyme and inhibitor) of Origanum majorana L. ursolic acid was 6 pM, and that of tacrine was 0.4 nM. The concentration required for 50% enzyme inhibition of the active component (IC50 value) was 7.5 nM, and that of tacrine was 1 nM. This study demonstrated that the ursolic acid of Origanum majorana L. appeared to be a potent AChE inhibitor in Alzheimer's Disease.     

Synthesis and preliminary evaluation of new ursolic and oleanolic acids derivatives as antileishmanial agents

A series of new ursolic and oleanolic acids derivatives was synthesized via ursolic or oleanolic acids, previously extracted from South American Ilex species. These new compounds were tested for in vitro antiparasitic activity on Leishmania amazonensis and Leishmania infantum strains. Some of these compounds showed activity against the promastigote forms of L. amazonensis or L. infantum, with IC(50) ranging from 5 to 12 microM. As expected, most of the compounds showed a significant level of cytotoxicity against monocytes (IC(50) = 2-50 microM). From a structure-activity relationships point of view, these pharmacological results enlightened mainly the importance of an acetylation at position 3 of the oleanolic acid skeleton in the activity against the L. amazonensis strain, and of a bis-(3-aminopropyl)piperazine moiety on the carboxylic function of ursolic acid against the L. infantum strain.     

熊果酸改善自然衰老大鼠糖脂代谢紊乱与自噬能力的研究

为研究熊果酸对自然衰老大鼠糖脂代谢紊乱和自噬功能影响。实验取22月龄SD雄性大鼠25只,随机分为3组,即老年模型组(n=9),熊果酸低剂量组(UA-L):灌胃给予熊果酸10 mg/kg(n=8),熊果酸高剂量组(UA-H):灌胃给予熊果酸50 mg/kg(n=8);另取8只3月龄SD青年大鼠作为青年对照组,均给予常规正常饮食饮水并记录摄食量和体重变化。用酶法和ELISA法检测血浆葡萄糖、甘油三酯和胰岛素并计算HOMA-IR指数,测定肝脏甘油三酯;油红"O"染色观察肝脏脂质沉积情况;Western blot法检测肝脏自噬相关蛋白及线粒体质量相关蛋白的表达。结果显示熊果酸(50 mg/kg)并不影响大鼠食物摄入量、体质量,但是逆转了老年大鼠血浆甘油三酯、胰岛素和HOMA-IR的升高,降低了肝质量、肝脏TG含量、改善了肝脏脂质沉积(P<0.05),与此同时老年大鼠肝脏自噬相关蛋白LC3B/3A,Beclin1和线粒体质量控制蛋白PGC-1α,Drp1的表达显著升高,但对P62、Pink1的表达无影响。根据以上实验结果推测熊果酸可以提高胰岛素敏感性,改善老年大鼠脂肪肝,增强肝细胞自噬,提高线粒体质量。