缺失plcg1基因引起成纤维细胞PI—3K信号上调

磷脂酶C－γ1（phospholipase C－γ1,PLC－γ1）与磷脂酰肌醇3－激酶（phosphatidylinositol-3 kinase,PI-3K）是生长因子调控细胞生长与增殖的两个重要信号中介。为探讨PLC－γ1在表皮生长因子（EGF）介导的细胞分裂信号中的代偿机制,用磷脂酶C（phospholipase C,PLC）特异性抑制剂U73122及PI－3K牧场划必抑制剂wortmannin处理剔除PLC－δ1基因plcg1(PLC-γ1^-/-）及野生型（PLC－γ1^ / )小鼠胚胎成纤维细胞,发现未经处理情况下两种细胞的克隆形成能力、细胞活力及EGF引起的DNA合成能力相似,且均可被U73122与wortmannin抑制,但与PLC－γ1^ / 细胞相比,PLC－γ1^－／－更依赖于PI－3K,而对PLC的依赖性却减小。Western印迹也表明EGF刺激后PI－3K的p85α亚单位酷氨酸磷酸化程度比野生型显著增高,PI－3K信号通路的激活出现上调,且PLC－γ1^-/-中无基近亲PLC－γ2的代偿表达。因此PLC－γ1^-/-中PLC－γ1的功能可能被PI－3K通路代偿,而PLC－γ2或其他PLC同工酶并不代偿其功能。结果表明EGF介导的信号能路的冗余性及PLC－γ1信号通路的可代偿性。     

Glypican—3基因的研究进展

磷脂酰有醇蛋白聚糖（ｇｌｙｐｉｃａｎ）是由蛋白质、脂质和糖三者共价连接的复杂糖复合物,广泛存在于细胞表面,通过糖基磷脂酰肌醇（ＧＰＩ）锚定在细胞膜上,目前已发现５种ｇｌｙｐｉｃａｎ,其中ｇｌｙｐｉｃａｎ－３是胚胎过度生长综合征的致病基因。ｇｌｙｐｉｃａｎ－３在原发性肝癌中过度表达。ｇｌｙｐｉｃａｎ－３和肿瘤细胞耐药性有关。     

细胞凋亡中的关键蛋白酶—Caspase—3

在哺乳动物细胞凋亡执行阶段起重作用的一系列半胱氨酸蛋白酶基因相继被克隆。Ｃａｓｐａｓｅ－３（又称ＣＰＰ３２,Ｙａｍａ,ａｐｏｐａｉｎ）被认为是各种凋亡刺激因子激活的ｃａｓｐａｓｅ家族中的关键蛋白酶,活性ｃａｓｐａｓｅ－３可作用于一些其他ｃａｓｐａｓｅ成员,并降解凋亡细胞中的某些蛋白质。Ｃａｓｅｐａｓｅ－３抑制物是细胞凋亡抑制剂,有希望成为治疗因细胞过度死亡所致相关疾病的重要分子。     

14-3-3 蛋白

介绍了14－3－3蛋白的基本结构和功能,并简要概述了14－3－3蛋白在信号转导,细胞周期调控以及前体蛋白的折叠与运输过程中的作用机理。     

山羊胎儿肝脏3β—羟基甾体脱氢酶／Δ^4—Δ^5异构酶（3β—HSD）cDNA的克隆

3β－羟基甾体脱氢酶／Δ^4-Δ^5异构酶（3β－HSD）是哺乳动物体内广泛存在的一类参与甾体激素代谢的氧化还原酶,且具有异构酶活性。3β－HSD催化3β－羟基甾体的脱氢及随后的Δ^5-3-甾酮产物的异构化反应,以产生α,β－非饱和酮,3β－HSD在甾体激素代谢中起着重要作用。本文以胎羊肝为材料,首次获得了山羊胎肝的3β－HSD的cDNA,并进行了3β－HSD在肝脏组织的表达分析。参照牛,啮齿类的3β－HSD CDNA的高同源区设计引物,以2－3月雌性胎羊肝脏mRNA为模板,经RT－PCR获得416 bp cDNA片段（Fig.a),然后以其为探针筛选胎羊肝λgt10cDNA文库最后获得3－端缺失的3β－HSD cDNA克隆,并推导了其氨基酸序列（Fig.s)。同源分析表明山羊胎肝3β－HSD的氨基酸序列与牛卵巢,人I型3β－HSD的同源性分别为96％,78％和73％（Fig.3),提取雌性胎羊,雄性胎羊及母体羊肝脏的总RNA,同时做RT－PCR,表明3β－HSD在不同个体肝脏中的表达存在差异,雌性胎羊和母体孕羊肝脏中都有3β－HSD的表达,而在雄性胎羊肝脏中,则未检测到表达信号（Fig.4)。     

合成酮内酯类3—脱氧—3—羰基—红霉内酯B糖多孢红霉菌M的构建

大环内酯类抗生素基因工程是近年来研究的一个新领域,迄今已合成了100多种新的聚酮类化合物。以糖多孢红霉菌A226基因组DNA为模板,用重叠PCR方法扩增出去除KR6酶域DNA的约3.2kb DNA片段,克隆于pWHM3载体,构建了同源重组质粒pWHM2201。PEG介导原生质体转化法将pWHM2201转入糖多孢红霉菌A226,并整合于染色体红霉素合成基因位点。整合体在R3M斜面上生长两代后,制备原生质体涂R3M平皿。利用PCR鉴定筛选出8株KR6敲除的突变体糖多孢红霉菌M（1－8）。ZabsPec Fab质谱鉴定,证实糖多孢红霉菌M1合成了3－脱氧－3－羰基－红霉内酯B,一种新的酮内酯类化合物。     

MMP—26及其抑制剂—4在正常人细胞滋养层细胞与绒癌细胞系JEG—3中的表达

基质金属蛋白酶（MMPs)及其组织抑制（TIMPs)的平衡对于维持正常生理过程（如胚胎植入）是至关重要的。MMPs和TIMPs之间平衡机制调节的缺失将会导致肿瘤的转移和发展,近年来,MMP－26和TIMP－4相继被克隆鉴定,但是它们的功能,尤其是在正常胎盘建成和绒癌的功能仍属空白,本应用免疫细胞化学,免疫印迹,酶谱分析,RTPCR和Northen blot等方法检测了二在人早孕细胞滋养层细胞（Cyto)和绒癌细胞系JEG－3中的表达,免疫细胞化学和免疫印迹研究显示,MMP－26在JEG－3中的表达显高于在Cyto中的表达,TIMP－4在JEG－3中的表达显高于在Cyto中的表达（P＜0．05）;酶谱分析表明：Cyto中MMP－26水解明胶的活性明显低于JEG－3中MMP－26和TIMP－4的mRNA表达,并且MMP－26 mRNA在JEG－3中的表达显高于在Cyto中的表达（P＜0．05）,以上结果表明,MMP－26和TIMP－4在与正常妊娠和肿瘤转移浸润等有关组织重建过程中起着一定的作用。     

β—1,—3葡聚糖的结构与功能

β－１,３－葡聚糖是一类具有抗癌及免疫调节等生物活性的生物大分子其高级结构为单股和３股螺旋体,它的生物活性,理化特性与其分子结构有一定对应关系。     

764—3对血管平滑肌细胞增殖的影响

为寻找新型有效的AⅡ拮抗剂,本实验应用细胞计数,^3H-TdR掺入,逆转录－聚合酶链反应及放射免疫实验方法,研究了中药单体764－3对卒中易感型自发性高血压大鼠（SHRsp)及其对照（WKY大鼠）主动脉平滑肌细胞（ASMC）增殖的影响及其作用机制,结果表明：764－3可显著抑制ASMC增殖,并有剂量依赖性,20mg/L的764－3可极显著地抑制SMC上AⅡ受体（AT1）的mRNA表达（SHRsp下降76．3％,WKY大鼠下降61．6％）,并可降低SHRsp ASMC内AⅡ含量（下降20％）,推测764－3对ASMC增殖的抑制作用可能部分地是由于降低了AT1受体的基因表达引起,比较其对两种大鼠ASMC的抑制效率,发现它对SHRsp的ASMC的作用更强。     

M1白血病细胞中PI—3激酶参与IL—6诱导的Stat3激活

Ｗｏｒｔｍａｎｎｉｎ是ＰＩ－３激酶的特异性抑制剂,它可拮抗ＩＬ－６对Ｍ１小鼠急性髓系白血病细胞生长的抑制作用,但Ｗｏｒｔｍａｎｎｉｎ本身对Ｍ１细胞的生长地胶阻滞电泳分析（ＥＭＳＡ）表明ｗｏｒｔｍａｎｎｉｎ选择性减低ＩＬ－６对Ｓｔａｔ３的激活作用而Ｓｔａｔ３有ＩＬ－６诱导的Ｍ１细胞生长停止与终末分化中占重要地位。这些结果说明ＰＩ－３激酶确实参与ＩＬ－６的信号转导并参与Ｓｔａｔ３的激活。     

PSD—95对NMDA受体信号转导的整合作用

PSD－95是新近在谷氨酸能突触的突触后致密物（PSD）中发现的一种特殊蛋白质,含有3个N末端的PDZ结构域,一个SH3结构域和一个C末端的GK结构域。PSD－95通过不同结构域与其它蛋白相互作用,不仅能够串集NMDA受体及其信号通路中的相关蛋白分子,组成受体－信号分子－调节分子－靶分子复合物,还可通过突触前后粘附分子的相互作用,参与突触连接的形成和维持,在介导和整合NMDA受体信号转导中具有关键性作用。     

接头蛋白c-Crk的结构和功能

接头蛋白c-CrK是原癌基因c-CrK表达的产物,参与了受体酪氨酸激酶和整合蛋白等多种分子的信号转导。C-CrK是最初发现于禽类病毒中的v-CrK在组织细胞中的同源物,通过mRNA选择性剪接产生两种形式的蛋白质c-CrKI和c-CrKⅡ,在各种组织中广泛表达。C-CrK分子在N端包含有一个SH2结构域,在C端两个SH3结构域。CrKL是CrK家族的另一个成员,但由不同的基因编码,其结构与c-CrKII十分相似。C-CrK蛋白质本身不具备任何酶活性,它通过SH2和SH3结构域连接蛋白质,使得不能直接相互作用的信号分子发生相互作用。c-CrK II的SH2结构域可以与含有磷酸化酪氨酸YXXP模体的蛋白质结合,如桩蛋白(paxillin)、Cas、c-Cbl和自身磷酸化的酪氨酸蛋白激酶受体等。SH3结构域与蛋白质中富含脯氨酸的PXLPXK模体结合,如C3G和DOCKl80等信号分子。由于c-CrK能够同众多的蛋白质信号分子结合,使得c-CrK广泛参与细胞内不同信号途径的信号转导。     

鼠透明带3(ZP3)融合蛋白表达以及抗血清制备

鼠透明带3（mZP3)作为精子的初级受体,是鼠透明带中的一种主要糖蛋白,抗鼠透明带3抗体能够阻断精卵的结合,达到不育的效果,因此mZP3是免疫避孕研究的重要候选抗原。从小鼠卵巢中提取总RNA,分离mRNA,反转录获得cDNA,将cDNA连接到测序载体pUCm-T质粒上,通过序列测定和分析得到正确的mZP3 cDNA。经内切酶EcoR I和XhoI处理,将mZP3 cDNA克隆至融合蛋白表达载体pGEX-4T-1中,在T4 DNA连接酶的作用下构建融合表达载体pGEX-mZP3,转化大肠杆菌BL－21菌株,利用IPTG诱导后获得可溶性的蛋白质产物,经过SDS－PAGE鉴定,表达的融合蛋白GST－mZP3分子质量约为72kD左右,纯化的融合蛋白免疫兔子,获得效价为1：1000的抗血清,Western blot检测抗血清具有针对mZP3融合蛋白的专一性,为进一步开展mZP3的免疫功能检测的研究奠定 了基础。     

用酵母单杂交系统筛选与人ε—珠蛋白基因表达相关的基因

人体胚胎型ε－珠蛋白基因5‘旁侧一个沉默子（－392－－177bp）对关闭该基因在胎儿期的表达起重要作用。DNaseⅠ足谠法分析已表明在沉默子区内存在着一个明显的蛋白质因子结合位点（－278－－235bp）。为了筛选与沉默子DNA特异结合的蛋白质因子,将该保护区域的DNA序列作为靶序列,采用酵母单杂交系统对人胎儿肝cDNA表达文库进行筛选,并对获得的克隆进行序列分析。初步的结果表明,已分离到了人核糖体大亚基蛋白3(ribosomal protein L3,RPL3）的全长cDNA克隆。体外凝胶电泳阻抑分析及竞争实验亦证明该蛋白质与沉默子DNA存在相互作用。提示RPL3可能通过与沉默子DNA的结合参与调节ε－珠蛋白基因的关闭。     

金属硫蛋白—3研究进展

金属硫蛋白－3（MT－3）是近年来发现的一种脑特异性金属硫蛋白。本文综述了其在分布、蛋白结构及基因调控方面的特点;着重介绍了其在中枢神经系统中的功能及结构与功能关系的研究进展;总结了国外对其与老年痴呆症的可能关系的研究。     

修复相关基因Smad3的研究进展

修复相关基因Smad3及其产物对创面愈合非常重要。Smad3基因的失控可能是创面愈合延迟,不愈合或过度愈合（增生瘢痕形成）的真正原因, Smad３蛋白通过介导β转化生长因子（TGF－β）的细胞内信号传递和调节角化细胞及单核细胞的功能,发挥其生物学活性。     

学习过程中MF—CA3与PP—CA3突触传递效应的变化

应用慢性电极埋植技术以电生理学结合行为学的方法,探查在学习过程中大鼠海马ＣＡ３区两种不同输入突触（ＭＦ－ＣＡ３突触和ＰＰ－ＣＡ３突触）塑性变化及其相互关系。结果如下：（１）在分辨反应的建立过程中,在ＣＡ３区由ＭＦ诱导（ＭＦ－ＣＡ３）的群体锋电位和由ＰＰ诱地（ＰＰ－ＣＡ３）的群休锋电位,两者的峰值同步增大,同步达最高水平,且ＰＳ峰值达最高水平先于行为反应达学会标准;（２）在自然消退过程中,两者的ＰＳ     

胶原酶—3活性在大鼠动情周期及胚泡着床中的变化

大鼠动情周期以及胚胎着床过程中,子宫内膜会发生结缔组织的降解与重构。胶原酶3（MMP－13）是降解纤维类胶原的主要蛋白水解酶类之一。其活性在这些过程中的变化值得研究。采用液体闪烁计数测定^3H标记胶原的方法,对大鼠动情周期及早期妊娠子宫中胶原酶3（MMP－13）的活性进行了测定。结果表明：在动情周期中,激活型MMP－13在间情期最低,酶原型及激活型的MMP－13在动前期达高峰,动情后期酶原型和激活型MMP也明显高于间情期（P＜0．05）（Fig.1)。妊娠第1、2天酶原型的MMP－13的活性显著高于第3－7天,第3、4天酶原型和激活型MMP－13的活性均低于妊娠第1、2天（P＜0．05）;而第5天酶原型MMP－13的活性却显著高于第4、6两天（P＜0．05）,激活型MMP－13的活性也高于第4天（P＜0．05）（Fig.2）。着床部位酶原型MMP－13的活性明显高于非着床部位（P＜0．05）,而激活型MMP－13的活性则无明显差异（P＞0．05）（Fig.3）。大鼠假孕早期子宫中MMP－13的活性变化与正常早期妊娠相似,但其活性却明显低于正常早期妊娠（Fig.4）。结果提示:粝鼠子宫中MMP－13参与大鼠动情周期及早期妊娠过程,尤其是在胚胎着床过程中可能起着重要作用。     

14-3-3蛋白与植物细胞信号转导

14-3-3蛋白通过直接蛋白质-蛋白质相互作用对植物代谢关键酶、质膜H^＋ -ATP酶等发挥广泛调节作用。越来越多证据显示14-3-3蛋白通过与转录因子和其他信号分子结合参与调控植物细胞信号转导。对植物细胞中14-3-3蛋白调控信号转导途径,尤其是植物细胞对胁迫响应的调控机制进行了综述。     

长期施肥对NO3^——N深层积累和土壤剖面中水分分布的影响

研究了旱地农业系统中,长期不同施肥条件下,降水对NO3^--N积累、剖面水分分布以及N有收量、回收率影响及其相互之间的关系。结果表明,降水和氮肥施用量显著影响作物产量。施用氮肥在土壤剖面中造成NO3^--N深层积累,其中NPM处理累积层位于60－120cm,累积量相当于3.0年的年度施肥量（120kg·hm^-2）,NP处理累积层位于80－140cm,相当于1.4年施肥量。随着降水的年际间波动,进化论在丰水年、平水年还是干旱年,NPM处理耗水量＞NP处理＞M处理＞P,CK处理。12年不同施肥造成了土壤剖面水分差异。冬小麦播种前不同施肥处理0－100cm水分剖面分布差别不大,NPM处理、NP处理（除丰水年外）,土壤100－300cm含水量迅速降低,干旱年M处理缓慢降低,P和CK处理在任何年份变化都不大,氮肥回收率随着降水的波动也呈现相应的高低变化,NPM、NP处理的高低波动幅度最大。NPM、NP处理NO3^-－N累积与N素回收率的降低、土壤水分亏缺基本吻合。由此也反映了水分－作物－施肥三者之间存在的内在制约关系。