山羊胎儿肝脏3β—羟基甾体脱氢酶／Δ^4—Δ^5异构酶（3β—HSD）cDNA的克隆

3β－羟基甾体脱氢酶／Δ^4-Δ^5异构酶（3β－HSD）是哺乳动物体内广泛存在的一类参与甾体激素代谢的氧化还原酶，且具有异构酶活性。3β－HSD催化3β－羟基甾体的脱氢及随后的Δ^5-3-甾酮产物的异构化反应，以产生α，β－非饱和酮，3β－HSD在甾体激素代谢中起着重要作用。本文以胎羊肝为材料，首次获得了山羊胎肝的3β－HSD的cDNA，并进行了3β－HSD在肝脏组织的表达分析。参照牛，啮齿类的3β－HSD CDNA的高同源区设计引物，以2－3月雌性胎羊肝脏mRNA为模板，经RT－PCR获得416 bp cDNA片段（Fig.a)，然后以其为探针筛选胎羊肝λgt10cDNA文库最后获得3－端缺失的3β－HSD cDNA克隆，并推导了其氨基酸序列（Fig.s)。同源分析表明山羊胎肝3β－HSD的氨基酸序列与牛卵巢，人I型3β－HSD的同源性分别为96％，78％和73％（Fig.3)，提取雌性胎羊，雄性胎羊及母体羊肝脏的总RNA，同时做RT－PCR，表明3β－HSD在不同个体肝脏中的表达存在差异，雌性胎羊和母体孕羊肝脏中都有3β－HSD的表达，而在雄性胎羊肝脏中，则未检测到表达信号（Fig.4)。