一种无桥的水平板型凝胶电泳

凝胶电泳是研究核酸、蛋白质等生物大分子的一项重要技术,也是DNA的限制性核酸内切酶切割片段的分析、分离、纯化的一种不可缺少的方法。虽然垂直(管柱型及板型)凝胶电泳早已被广泛应用,但它不能用低浓度琼脂糖凝胶分离大分子DNA。水平板型凝胶     

蛋白质凝胶过滤色谱上样方法的改进

凝胶过滤色谱因其操作方法简单,重复性强等特点在生物大分子的分离纯化中被广泛使用。特别在基因工程蛋白质类药物的精细纯化中起着难以替代的作用。但由于蛋白质凝胶过滤色谱要求样品上样体积较小及洗脱流速较小时才能获得理想的分辨率,这使得凝胶过滤色谱经常成为蛋白质大规模纯化工艺中的限速步骤。本介绍一种改进的上样方法,在不降低分辨率的前提下,可将单位时间内凝胶过滤柱的产量提高两倍。     

生物大分子分离纯化技术的重大突破──灌注层析系统

生物大分子分离纯化技术的重大突破──灌注层析系统夏小燕（北京化工学院）傅仲华（中国科学院发育生物研究所）现代生物大分子分离纯化技术的发展,促进了生命科学,医学及医药工业的发展,液相色谱仪是生物分子分离纯化的重要工具,而其中分离介质尤为重要。     

柱串联法在凝胶过渡色谱中的应用一例

凝胶过滤色谱因其操作方法简单、重复性强等特点在大分子的分离化中被广泛使用,特别在基因工程蛋白质类药物的精细纯化中起着难以替代的作用。将Superdex75凝胶柱与SephacrylS-100凝胶柱串联在一起进行凝胶过滤,分离一种用普通凝胶过滤色谱难以分离的样品,成功地将分辨率（Rs）由0．71提高到1．70,得到了基线分离。     

《生物化学实验技术》

本书是《生物实验室系列》中的一本,是一部综合性著作,内容覆盖了有关生物化学实验技术的诸多领域,从原始取材到生物大分子结构与功能的研究、从基本原理到实验操作都作了深入而详实的全面阐述。全书包括生物制备和分析检测方法;免疫学方法在生化实验中的应用;还用较大篇幅着重叙述了生物大分子的分离纯化及其结构与性质的研究．作为一本实验技术类的图书,     

血浆蛋白分离纯化的进展——亲和技术的重要作用

从血浆中分离纯化各种药用蛋白质仍然是生物技术的重要产业。分离纯化技术的进展使得一血多用成为可能 ,大大降低了产品成本。其中 ,亲和技术扮演了重要的角色。经过 2 0多年的进展 ,亲和层析已经从实验室走进产业化 ,以其高选择性、高活性回收率和高纯度等特点 ,成为纯化蛋白质等生物大分子最有效的技术之一。在血浆分离中 ,以乙醇沉淀或离子交换层析预处理后血浆组分为原料 ,用亲和层析可高效地获得目标血浆蛋白。综述了近年来各种亲和层析在血浆蛋白分离制备中的应用 ,并展望了血浆蛋白分离纯化发展的趋势。     

介绍一种制备管状梯度凝胶的装置

梯度凝胶电泳分离生物大分子具有分辨力高、区带清晰的特点,特别适于分离γ-谷氨酰转肽酶一类膜结合蛋白。此外还可利用浓度梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳测定分子量。目前这种方法多是用垂直平板凝胶。本文介绍一套自制管状梯度凝胶的装置和制备凝胶的方法。用这种方法,既节省试剂     

以噬菌体作为配基的一种新型亲和材料的制备方法研究

目的:针对亲和层析材料制备困难的问题,本文拟研究以聚丙烯酰胺冷凝胶为基质,以噬菌体展示多肽为配基制备亲和材料方法的可行性.方法:以低温聚合制备的聚丙烯酰胺冷凝胶作为基质,将筛选噬菌体展示人肝脏cDNA文库获得的噬菌体作为配基,通过两种不同的化学键合方法键合于凝胶表面,制备亲和材料.通过高效液相色谱法(HPLC)分析此亲和材料对药物分子是否具有亲和能力.结果:聚丙烯酰胺冷凝胶具有较大的孔径及良好的亲水性,适用于生物大分子如噬菌体的键合,键合特异噬菌体展示多肽的凝胶材料与键合未筛选噬菌体文库的亲和材料比较,对药物分子具有明显的高亲和力.结论:以展示特异多肽的噬菌体为亲和配基,以聚丙烯酰胺冷凝胶为基质,通过化学键和方法制备亲和材料是具有可行性的,此种亲和材料在生物分子纯化特别是药物分析纯化、蛋白质分离纯化以及细胞分离分析等方面将具有一定的应用前景.     

关于“分子筛”提法的一点意见

凝胶层析(又称为凝胶过滤或分子排阻层析)是近年来发展起来的一种研究生物大分子的相当普遍的技术。它是根据被研究物质的分子量的不同,因而从凝胶柱上流出的先后次序不同的原理,来分离由不同分子量的物质组成的混合物,所以人们又称之为“分子筛层析”,把凝胶介质在层析中的物理作用称为“分子筛作用”。在涉及到凝胶层析技术的一些文献中,“分子筛”的提法是比较普遍的,但是从凝胶层析分离大分子物质的过程看,“分子筛”这一提法似乎不够确切。     

我国生物制造分离过程技术与装备研究进展

<正>生物产物的分离与纯化是生物制造过程的重要单元,关系生化产品的质量与制造成本。大多数生化产品需要综合利用多个分离纯化技术才能确保终端产品质量达标。近年来,我国在相关介质、技术和装备的研究与应用方面取得了长足进步。文章针对生物大分子蛋白、生物乙醇和丁醇、发酵调味品、1,3-丙二醇、呈味核苷酸二钠等典型生物发酵产品的分离纯化。重点介绍了我国近年     

密度梯度离心技术在分子生物学研究中的应用

密度梯度离心技术是随着分子生物学的飞速发展而建立起来的一种重要的实验技术,广泛应用于核酸,蛋白、酶等生物大分子和生物膜、细胞大颗粒,亚细胞颗粒的分离、纯化及分析。可以说七十年代分子生物学研究中许多重大的成果都和这种技术的应用分不开。密度梯度离心大致可分二大类,一类是速率区带密度梯度离心,这类离心主要是利用生物大分子或亚细胞颗粒不同的沉降常数,在离心后分布在不同的预先铺制好的介质密度区,从而达到分离、纯化的目的。离心密度介质主要用蔗糖也可用甘露糖、甘油,多聚糖类、中性硅胶油等。这类离心技术广     

纤维素微球色谱介质制备、孔结构调控及聚合物改性

作为色谱技术的核心,高效色谱介质的研制与开发是提高生物大分子纯化效率的重要手段之一.纤维素微球是最早应用于生物分离的色谱介质之一.这主要是因为纤维素的基本结构为多糖化合物,表面含有大量羟基,易于修饰功能配基,且非特异性吸附弱,特别适合不稳定生物大分子的分离纯化.本文综述了纤维素微球色谱介质的研究新进展.首先简要介绍了纤...     

凝胶法生长溶菌酶晶体的研究

凝胶介质可以排除或削弱晶体生长过程中重力引起的对流和沉淀现象,用凝胶法生长生物大分子晶体是一种新的探索。使用类似于悬滴汽相扩散的方法,凝胶中生长出单个较大的外形发育完善且高度对称的鸡蛋清溶菌酶晶体。ＭＰＤ在凝胶中对溶菌酶结晶与溶液中具有相似的抑核作用。排循照像实验表明,凝胶法生长的晶体具有较强的衍射能力。     

组合式电渗析装置

从大分子样品溶液中去除小分子盐类成分主要是利用膜分离技术。其原理是利用样品溶液中溶质分子的大小、形状和性质等的差别对各种薄膜表现出不同的可透过性而达到分离的目的。主要包括透析法、超滤法、反渗透法和电渗析法等。其中电渗析法是在透析膜的两侧加电极,使可透过膜的与不可透过膜的带电溶质在电场中相对移动而彼此分开的方法。这种方法用于大分子溶液的脱盐和纯化具有快速简便的优点。本实验室根据上述原理及实际工作需要,研制出一套组合式电渗析装置,具体制作方法如下:     

介绍一种蛋白、配体快速分离的方法——离心柱法

在我们的实验工作中,将生物大分子与配体分离或除去盐份,改变蛋白的缓冲体系的工作,可以说是每天都离不开。透析和分子筛层析等是常用的好方法。但透析方法的缺点是需要时间较长,对于不够稳定的样品也不适用。用分子筛柱可以较快分离,但普通柱层析方法往往导致样品的稀释而不可避免地造成损失。这里介绍一种快速、回收率高且不稀释样品的凝胶柱分离方法。由于这个方法首先由美国纽约城公共     

海岛棉(Gossypium barbadense)DNA的提纯

介绍一种从棉花(Gossypium barbadense)种子中分离天然状、大分子和高纯度DNA的方法。首先,用有机溶剂(醇、醚和酮)抽提除去脂肪、类脂、棉毒素及其它色素,然后,用胰蛋白酶(Trypsin)和去垢剂(SDS)进行处理脱蛋白;最后,用4％珠状琼脂糖凝胶(Sepharose4B Gel)柱层析分离纯化DNA:此方法简便、有效,一般适用于含大量内源多酚类化合物、色素和类脂植物材料中DNA的抽提和纯化。     

膜色谱技术及其在生化快速分离分析中的应用

生物技术为人类提供越来越多的具有特殊疗效的生化药品,如干扰素、白细胞介素、细胞集落刺激因子等等。在科研及生产过程中,存在着大量的蛋白质、多肽和核酸等生物大分子的分析、分离和纯化工作,迫切需要高效、快速的分析、分离和制备方法,特别是用于临床的生化药品,不仅要达到很高的纯度,而且还要在分离过程中最大限度地保持其生物活性。据统计,生物工程产品的分离纯化成本占其全部成本的６０－８０％。国外在这方面正...     

利用FPLC系统结合自装层析柱纯化兔血清IgG

为了建立一种简便、成本低的纯化兔血清IgG的实用方法,采用FPLC系统结合实验室常规手段填充的Sephacryl-S200凝胶柱和DEAE-Sephadex A-50离子交换柱进行兔血清IgG的纯化,结果表明,在流速为0．5ml／min时,此方法可以纯化得到高纯度的兔IgG;脱盐柱Sephadex G-25重复实验证明此实验方法具有很好的稳定性;并且与商品化的层析柱相比,成本大为下降;此方法主要的不足之处是层析柱的流速较低,为0．5ml／min左右。该方法可以推广到其他生物大分子的纯化中去。     

碘化钾梯度离心在制备噬菌体DNA中的应用

通过氯化艳梯度离心除去细菌DNA及细 菌残渣来分离纯化噬菌体颗粒是一种方便而有 效的方法〔ZJ。其唯一缺点是氯化艳价格昂贵。 Blin等人〔13报道说,可用碘化钾梯度离心法从 琼脂糖电泳凝胶中回收DNA, Smith 13,发展了 Blin法,在碘化钾溶液中加人I MM Na2S20,以 防止碘离子的氧化,使DNA稳定不受干扰。 最近,我们把该法应用于分离纯化兄噬菌体的 重组体DNA,结果表明在噬菌体颗粒的梯度 离心纯化过程中,完全可以用碘化钾替代氯化 艳。     

透明质酸制备的研究进展

透明质酸(Hyaluronic acid简称HA)是一种国际上公认的生物大分子保湿剂,用于眼科显微手术、关节炎治疗、高级化妆品等领域.目前,透明质酸的生产方法逐渐由动物组织提取法转向微生物发酵法.细菌发酵法生产透明质酸具有产量不受原料资源限制、成本低、产量高、有较高的相对分子量,分离纯化工艺简便,易于大规模生产等特点成为透明质酸生产的发展方向,应当进一步深入研究.综述了透明质酸的化学结构、理化性质、应用及生产方法等方面的研究现状,并预测了其以后发展趋势.