依赖于DNA的RNA聚合酶的研究——Ⅵ.白血病615和正常615小鼠肝细胞的RNA聚合酶B免疫学特性比较研究

本文比较了白血病615(L615)和正常615小鼠肝细胞RNA聚合酶B的免疫学特性。在免疫扩散实验中,抗615B酶抗血清和抗L615B酶抗血清分别对615 B酶和L615 B酶的离体转录活性有明显抑制作用,但两种抗血清分别对与其对应的酶抑制作用强。用抗615 B酶抗血清的IgG分别与两种B酶进行免疫沉淀反应,它们的沉淀物凝胶电泳图谱显示能发生特异性结合反应。IgG与615 B酶的沉淀物电泳图中存在着一条明显的条带,而这一条带在IgG与L615B酶的沉淀物电泳图中却消失了。     

依赖于DNA的RNA聚合酶的研究 Ⅲ.615小鼠和白血病615小鼠(L615)肝细胞RNA聚合酶B的比较研究

研究了正常的615小鼠和白血病615小鼠(L615)肝细胞的RNA聚合酶B,发现两种肝细胞的RNA聚合酶B都可能存在着结合状态和游离状态的形式。在电泳图中L615 RNA聚合酶B有两条电泳区带是615 RNA聚合酶B所没有的。两种B酶的最适铵离子浓度都是90mM;最适锰离子浓度为2mM;镁离子的激活作用在10mM以下时,酶活性随镁离子浓度增高而增强。两种RNA聚合酶B对α-鹅膏蕈碱的抑制作用都非常敏感,而L615 B酶更敏感一些。两种RNA聚合酶B都适于利用变性的单链DNA作转录模板。     

依赖于DNA的RNA聚合酶的研究Ⅱ.615小鼠肝细胞核RNA聚合酶A、B、C的提取、分离和鉴定

本文报道了从615小鼠肝细胞核提取和分离A、B、C三种RNA聚合酶的方法。在80mM硫酸铵离子浓度下,B酶能选择性地吸附在DEAE-纤维素DE52上,从而和A、C酶分开,用500mM硫酸铵洗脱,呈现单一的峰。在50mM硫酸铵离子浓度下,将A、C酶吸附在DEAE-SephadexA25上,经50-500mM硫酸铵线性梯度洗脱,得到A酶和c酶两个峰。测定了这三种酶对α-鹅膏蕈碱的敏感性。A酶是抗α-鹅膏蕈碱的(在最高浓度为200微克/毫升时,酶活完全不受抑制);B酶在α-鹅膏蕈碱浓度为0.2微克/毫升时,活性受到50％以上的抑制;C酶在α-鹅膏蕈碱浓度为100微克/毫升时,活性受到50％以上的抑制。用提取的B酶免疫母鸡,获得了抗B酶的抗血清,这种抗血清在双向免疫扩散实验中和B酶之间产生沉淀反应,而和A酶或C酶之间不产生沉淀反应。     

RNA聚合酶的模板特异性

研究了多种动物、植物、酵母及细菌RNA聚合酶对不同DNA模板的转录活性,结果表明,各种RNA聚合酶都表现出对同源模板比对异源模板具有更高的转录活性;对热变性DNA比对天然DNA有更高的转录活性。用混合DNA作为转录模板时,玉米RNA聚合酶B和615小鼠RNA聚合酶B都能优先转录其同源模板。     

DNA指导的RNA聚合酶的研究1. 615小鼠肝RNA聚合酶B (11)的提取和鉴定

本文叙述了从‘15小鼠肝中提取和纯化RNA聚合酶B (11)的程序。这种酶在性质和结构上与已 报道的其他真核生物的同类酶基本一致。其DEAE一纤维素DE52洗脱部分在280 nm光吸收测定和 3H-UTP掺人活性测定都表明它是单一的峰，在不变性的聚丙烯酚胺凝胶电泳上也是一条电泳带；在变 性电泳条件下，它由11条电泳带组成，其中有两个大亚基，其分子量分别为220,000和125,000道尔 顿。这种酶对a-鹅膏覃碱的抑制作用非常敏感，III盯ml，鹅膏苹碱可以抑制RNA合成的50%.     

依赖于DNA的RNA聚合酶研究 VII.玉米胚RNA聚合酶B性质的研究

真核细胞的RNA聚合酶的研究已经有很 多报道〔3,41。但是以高等植物为材料研究RNA 聚合酶远不如其他真核生物多，在植物细胞中 RNA聚合酶B（或11）的含量比RNA聚合酶A 和C要丰富，而且性质也比较稳定IS]，这对研究 RNA聚合酶B的性质和它在结构基因表达中 的作用是很有利的。我们以玉米自交系黄早4 为材料，提取了RNA聚合酶B。本文将报道植 物RNA聚合酶B的分离和纯化，并研究这种酶 的性质和功能。     

依赖于DNA的RNA聚合酶研究 Ⅶ.玉米胚RNA聚合酶B性质的研究

真核细胞的RNA聚合酶的研究已经有很多报道。但是以高等植物为材料研究RNA聚合酶远不如其他真核生物多,在植物细胞中RNA聚合酶B(或Ⅱ)的含量比RNA聚合酶A和C要丰富,而且性质也比较稳定,这对研究RNA聚合酶B的性质和它在结构基因表达中     

大肠杆菌RNA聚合酶的分子研究进展

大肠杆菌是生物工程研究中最重要的外源基因表达系统,许多真核生物及病毒基因表达的早期研究都是在大肠杆菌中进行的,在外源基因表达的全过程中,依赖于DNA的RNA聚合酶在基因的转录中担负了重要的角色,随着＊＊A聚合酶各亚单位结构和功能研究的深入,人们对于RNA聚合酶的研究取得了今人瞩目的进展,本文就RNA聚合酶的分子水平研究进展作～介绍。IRNA聚合酶全酶（H010－enzyme）原核生物的依赖｝yDNA的RNA的聚合酶（以下简称ANA…一般由几种不同的亚单位组成。大肠杆菌RNAP至少含有四种不同的亚单位a、p、日’和a,一般以两…     

高等真核生物RNA聚合酶B免疫方法研究

在真核生物中,关于依赖于DNA的RNA 聚合酶（依赖于DNA的RNA聚合酶A, B,C,以 下统简称为A酶、B酶、C酶）免疫特性的研究 对于了解酶的结构、功能、在细胞中的分布以及 在生物进化过程中的变化都具有重要意义。在 A酶、C酶以及低等真核生物的B酶的研究中 都有不少成功的报道^[4-10]。然而,也有许多作 者报道,用高等真核生物的B酶免疫兔子、豚鼠 都未获得B酶的抗血清^[4,7-10].     

大肠杆菌中依赖于DNA的RNA聚合酶的提取

在细菌和其他动植物细胞中都普遍存在着一种以DNA作为模板,利用四种核糖核苷三磷酸作为底物来合成RNA的酶,这种酶叫做依赖于DNA的RNA聚合酶[E.C.2.7.7.6]。从细菌中提取这种酶的方法不少,但以Cham-berlin和Berg以及Burgess的方法使用最为普遍。我们主要参照Burgess氏的方法以大肠杆菌K12(E.coli K 12)中提取RNA聚合酶,并稍加改变。     

DNA连接酶、RNA连接酶、多核苷酸激酶和DNA聚合酶的同时分离纯化

本文报道从T4amN82噬菌体诱导的大肠杆菌E.coliB 同时分离和纯化四种酶的一般方法。先用硫酸链霉素沉淀把RNA连接酶,DNA连接酶与多核苷酸激酶和DNA聚合酶加以分离。然后用DEAE纤维素柱层析把DNA连接酶与RNA连接酶加以分离,用DEAE-Sephadex-A50柱层析把多核苷酸激酶与DNA聚合酶加以分离。本文着重介绍T4DNA聚合酶的分离纯化。     

艾氏腹水癌患鼠腹水中一种高分子量DNA结合蛋白的分离

 本文利用免疫吸收法和免疫亲和层析法,从艾氏腹水癌患鼠腹水DNA结合蛋白中,分离得到了一种高分子量DNA结合蛋白。在免疫双扩散反应中,它与抗艾氏腹水癌患鼠血清DNA结合蛋白的兎抗血清反应形成一条沉淀线,但与正常小鼠血清DNA结合蛋白的兎抗血清不形成沉淀线。该DNA结合蛋白样品用2-巯基乙醇还原后,经SDC-PAGE分析,测得其分子量约为41000。     

小鼠白血病细胞核RNA在与DNA杂交反应中的变化

可移植性L615小鼠白血病模型是通过将津638病毒注人纯系615小鼠皮下后引起脾细胞恶变,再经同系移植而建立的,为了探索肿瘤细胞基因表达的特点,了解肿瘤的分子生物学发生机制,本文应用RNA-DNA杂交反应和竞争杂交技术,对615小鼠正常脾细胞和L615白血病细胞在体外迅速转录的核RNA进行了比较研究。     

UvrD解旋酶通过牵动RNA聚合酶反向运动促进DNA修复

<正>以往的研究表明,UvrD解旋酶与核苷酸的切除修复功能相关,但其机制并不明确。美国纽约大学的Epshtein等人在近期的研究中揭示了大肠杆菌UvrD解旋酶在核苷酸切除与修复中所扮演的具体角色。大肠杆菌UvrD解旋酶与RNA聚合酶在转录延长过程相结合,利用其解旋/延长活性,强制使RNA聚合酶沿DNA链反向滑动。通过诱导RNA聚合酶的反向运动,UvrD使DNA原先被遮盖住的损伤区域暴露,从而使核苷酸切除修复的相关酶能够     

依赖于DNA的RNA聚合酶与体外转录的研究II．酵母变异株20B一12RNA聚合酶B的纯化及鉴定

从酵母变异株20B—12经过超声波处理,硫酸铵沉淀、DEAE纤维素、磷酸纤维素和DEAE-Sephadex 层析等步骤,纯化依赖于DNA的RNA聚合酶B,在聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈二条有聚合酶B活力的区带。其中不合有Dnase、Rnasc和蛋白酶活力,无内源DNAo50μg/ml 的a-鹅膏华碱抑制聚合酶活力达90％以上。最适(NH4),SO4．浓度为40mM。最适 Mn2+浓度为2mM。 Mg2+对酶B无激活作用。变性DNA对酶B较天然DNA有更高的效率。     

玉米雄性不育的基因表达与调控——Ⅱ.对克隆化玉米线粒体DNA有高转录活性的玉米RNA聚合酶B的制备

前文我们已报道了玉米RNA聚合酶B对克隆化玉米mtDNA的离体转录。本文介绍对克隆化玉米线粒体DNA(mtDNA)有高转录活性的玉米RNA聚合酶B的制备方法。从萌发5天的玉米芽中提取RNA聚合酶的粗提物,再经过离心、硫酸铵沉淀、DEAE-纤维素及     

原核生物小RNA的研究及其进展

原核生物中的小RNA（small RNA,sRNA）长度通常在50—250nt之间,一般在细胞内不被翻译,对基因转录后水平的调控发挥着关键作用。最初在大肠杆菌中发现,通过计算机预测和实验技术分析,查明的种类现已近140种,其作用机制包括;与目标mRNA的翻译起始位点或前导链结合分别抑制或促进翻译;或者模拟其他核酸的二级结构,去除mRNA结合蛋白对翻译的阻抑作用,促进翻译。此外,在转录水平上,SRNA还能模拟开放的启动子结构与RNA聚合酶结合阻止转录。     

依赖于DNA的RNA聚合酶与体外转录的研究——Ⅱ.酵母变异株20B-12 RNA聚合酶B的纯化及鉴定

从酵母变异株20B-12经过超声波处理、硫酸铵沉淀、DEAE纤维素、磷酸纤维素和DEAE-Sephadex层析等步骤,纯化依赖于DNA的RNA聚合酶B,在聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈二条有聚合酶B活力的区带。其中不含有DNase、RNase和蛋白酶活力,无内源DNA。50μg/ml的α-鹅膏蕈碱抑制聚合酶活力达90％以上。最适(NH_4)_2SO_4浓度为40mM。最适Mn~(2 )浓度为2mM。Mg~(2 )对酶B无激活作用。变性DNA对酶B较天然DNA有更高的效率。     

不同来源RNA聚合酶对霍乱弧菌分型噬菌体VP3启动子的作用

目的:研究不同来源的RNA聚合酶对预测的霍乱弧菌分型噬菌体VP3启动子的作用。方法:以含有预测的VP3启动子区的片段取代质粒pRL-null的T7启动子区,以海肾萤光素酶基因Rluc为报告基因,在霍乱弧菌N16961内检测霍乱弧菌RNA聚合酶对克隆的启动子区的作用;将上述重组质粒和表达VP3 RNA聚合酶的质粒共转化大肠杆菌JM109,检测大肠杆菌和VP3的RNA聚合酶对克隆的启动子区的作用。结果:N16961的RNA聚合酶不能识别并作用于启动子P1、P2、P5、P6、P10和P12,JM109的RNA聚合酶可能识别并作用于启动子P7和P11;只有P2、P7、P8、P9、P13、P16和P17在JM109内可以被克隆表达的VP3 RNA聚合酶识别转录。结论:宿主菌N16961与非宿主菌JM109的RNA聚合酶识别转录VP3启动子的能力不同,可能与噬菌体的宿主特异性有关;VP3的RNA聚合酶对大部分有活性的VP3启动子具有直接启动转录作用,但部分启动子可能需要VP3或宿主蛋白的辅助作用才能表现出更强的活性;VP3启动子对VP3 RNA聚合酶的特异性也不同,P1、P2和P12对VP3的RNA聚合酶具有高度特异性,P7和P11的特异性较弱。     

高等真核生物RNA聚合酶B免疫方法研究

在真核生物中,关于依赖于DNA的RNA聚合酶(依赖于DNA的RNA聚合酶A、B、C,以下统简称为A酶、B酶、C酶)免疫特性的研究对于了解酶的结构、功能、在细胞中的分布以及在生物进化过程中的变化都具有重要意义。在A酶、C酶以及低等真核生物的B酶的研究中都有不少成功的报道。然而,也有许多作