碳裂解提取质粒DNA的改进

碱裂解提取质粒DNA是分子生物学实验中常用的方法,但通常方法所提取的质粒往往含有大量的RNA和其他杂质,本文适时加入较高浓度的RNA和适当延长冰浴时间,结果得到了几乎没有RNA和其他杂质的高纯质粒DNA,不仅达到了分子生物学实验要求,而且可用作抗原检测抗dsDNA抗体,该法揉作简单,经济,实用。     

碱裂解法提取重组质粒DNA及PCR验证

目的:筛选获得高质量质粒,为进一步克隆、测序奠定基础.方法:采用常规的碱裂解法从大肠杆菌重组质粒中提取质粒DNA,核酸检测仪测定提取质粒DNA产量和纯度,并用前期DDRT-PCR时采用的引物进行PCR验证性实验,琼脂糖凝胶电泳检测,并对电泳图谱加以分析和鉴定.结果:利用常规的碱裂解法提取重组质粒,通过酚和氯仿的抽提,可以有效地去除蛋白质杂质,用含有Rnase抑制剂的无菌水溶解质粒提取效果最好,得到的质粒DNA无RNA污染,纯度比较高,OD260/OD280比值介于1.8～2.0之间,OD260/OD230比值大于2.0,经PCR反应验证后与预计相符.结论:通过该方法获得的重组质粒纯度和浓度都比较高,且PCR验证与预计相一致,可以满足后续分子生物学实验的要求.     

大肠杆菌质粒DNA提取方法的优化

目的:简化操作流程,缩短提取时间,降低试验对操作者的危害。方法:该方法去除酚、氯仿等有害试剂,采用LiCl沉淀去除质粒制备物中小片段核酸(包括DNA和RNA);工程菌生长至对数期时通过加入氯霉素后不仅方便质粒DNA的提取过程中蛋白质的去除,而且可使质粒的拷贝数进一步增加,提高质粒DNA产量的目的。结果:实验改进方法所提取的质粒DNA产量高于常规方法,达到20μg/mL。结论:改进方法提取的质粒DNA,其下游的内切酶消化,PCR、重组质粒鉴定、转化大肠杆菌等实验的结果和重复性都令人满意,完全可用于一般的分子生物学研究。     

苏云金芽孢杆菌大型质粒DNA的小量提取

以苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种、猝倒亚种及以色列亚种为材料,介绍了低拷贝大型质粒DNA的小量提取方法,该法采用PEG 6000进行质粒纯化,省略了苯酚和氯仿抽提过程。实验证明,该法结果稳定,提取的质粒DNA产量和质量均符合大多数分子生物学实验的要求。     

农杆菌质粒DNA提取方法的优化

目的：为了减化操作过程,减少药品对操作人员有直接或间接危害,提高农杆菌质粒DNA的产率和实验结果的稳定性。方法：对常规碱裂解法进行了改动,改进的方法通过加大菌液的收集量,利用LiCl沉淀RNA,简化操作流程和严格反映环境条件,并且在操作过程中去除了酚、氯仿等对人体有害的试剂。结果：提取时间缩短,结果稳定,产率在1．5μg／μL以下。结论：用这种方法提取的质粒可以满足大多数分子生物学常规实验如DNA的酶切、PCR鉴定的要求。     

甘蔗基因组DNA小量提取与大量提取方法研究

甘蔗的叶片中含有大量的多糖、多酚类和RNA等物质,对甘蔗分子生物学实验带来了极大的影响.本研究利用改良的CTAB对甘蔗基因组DNA进行小量提取法与大量提取方法的研究,本方法操作简单,DNA完整性好、产量高、纯度高可满足大部分分子实验的需要.     

微量法鼠疫菌质粒DNA抽提的优化

旨在分析微量法抽提鼠疫菌质粒DNA的效果,探讨其在鼠疫菌分子生物学实验研究中的应用价值.采用微量法分别提取鼠疫菌EV76株,假结核耶尔森菌PstII株及大肠杆菌V517株质粒DNA,琼脂糖凝胶电泳对质粒DNA抽提结果进行分析.结果显示,微量法能在较短时间内获取开环较少的闭合环状鼠疫菌质粒DNA,经琼脂糖凝胶电泳图示其电泳条带清晰、亮度均一.微量法鼠疫菌质粒DNA抽提效率和纯度较好,抽提结果稳定,重复性良好.经微量法抽提的质粒DNA符合多数鼠疫菌分子生物学试验的要求,可广泛应用于鼠疫菌分子生物学试验研究中.     

科学出版社科学出版中心生物分社新书推介2008-05精编分子生物学实验指南（第五版）

本书是知名度很高、不断更新的《最新分子生物学实验方法汇编》（Current Protocols in Molecular Biology）系列的精编版本。新版对原有内容进行了修订和更新,包括：大肠杆菌、质粒和噬菌体,DNA的制备和分析,DNA和RNA的酶学操作,RNA的制备和分析,重组DNA文库的构建,重组DNA文库的筛选,DNA序列测定,     

一种快速提取小麦叶片总RNA的方法

从植物组织中提取高质量的RNA是进行植物分子生物学研究的必要前提和关键.同种植物不同器官的组织由于组成分的差异,提取RNA的方法也存在不同的难点.在苯酚法和氯化锂沉淀法的基础上,改进并提出了一种适合小麦叶片总RNA的快速提取方法,消除了蛋白质、DNA、多糖、多酚等污染.该方法提取的小麦叶片总RNA,完整性好、纯度高,可用于RT-PCR、N orthern杂交、RACE等实验操作,而且简单经济、快速、实验结果稳定,重复性好,还适合富含多糖和脂质的植物组织总RNA的提取.     

甜叶菊RNA分离方法研究

甜叶菊组织中酚类、萜类和多糖等代谢产物含量较高,RNA难分离,易降解,使用现有的方法提取甜叶菊组织RNA产率低、质量差,无法应用于实验操作.本文针对甜叶菊组织次生代谢物多的特点,以传统的CTAB法(cetyl trimethyl ammonium bromide)为基础,分别采用不同的方法进行RNA抽提和纯化.结果发现采用CTAB-LiCl法提取的RNA完整性好,且纯度高;传统的CTAB法提取的RNA完整性好,但有DNA和其它杂质的污染;高盐溶液法提取的RNA降解比较严重,同时还有杂质污染.结论说明CTAB-LiCl法适用于多糖类植物RNA的分离.     

A method for plasmid purification directly from yeast

A rapid technique for purifying plasmids from yeast Saccharomyces cerevisiae is described that yields high-quality DNA suitable for bacterial transformation, yeast transformation, and direct DNA sequencing. The method requires only small culture volumes and proprietary bacterial plasmid miniprep kits that allow one to simultaneously prepare a large number of samples in a very short period of time while avoiding the use of toxic organic chemicals. Both yeast single-copy CEN/ARS and high-copy 2micro shuttle plasmids can be isolated using this method. This technique is useful for plasmid purification from yeast two-hybrid experiments as well as yeast genetics and molecular biology experiments.     

一种提取质粒DNA的改良方法

本文详细介绍了一种改良碱裂解法提取质粒ＤＮＡ的方法,该法采用ＮＨ４Ａｃ代替苯酚和氯份的抽提过程,得率高,质量好,完全达到了分子生物学常规实验的要求,如酶切、连接、转化大肠杆菌、ＰＣＲ等,甚至用于序列测定和植物遗传转化,该法重复性好,操作简单、实用．     

高效回收苏云金杆菌质粒DNA的方法研究

介绍三种简易、快速和高效回收苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis,简称Bt)质粒DNA的方法。这些方法省时、经济、适用范围广,回收的Bt质粒DNA质量高,可直接用于各种分子克隆操作。     

Rapid isolation of substrate-quality plasmid DNA without CsCl-dye density gradients

The isolation of plasmid DNA produced in transformed bacterial cells is essential for many molecular biology techniques. Two drawbacks to the widely used CsCl-ethidium bromide method of preparation are the need for ultracentrifuge time and the generation of ethidium bromide waste. In this article we describe a method for the quick isolation of plasmid DNA without the use of an ultracentrifuge or ethidium bromide.     

氧化硅包裹的磁性纳米粒子纯化质粒DNA

质粒的分离纯化在分子生物学实际工作中占有重要地位.本文采用氧化硅包裹的磁性纳米粒子,平均粒径为20 nm左右,在外加磁场的作用下,从细胞粗提掖中快速分离质粒DNA.用这种方法成功地从大肠杆菌DH5α浓缩和纯化得到了pUC19质粒,该质粒具有生物活性,可直接用于限制性酶切和细胞转化等分子生物学下游操作.     

The Selection of Recombinant Binary Plasmids Generated by Gateway® LR Cloning in the Escherichia coli Strain C2110

Gateway^® cloning is widely used in molecular biology laboratories. Various binary vectors used for Agrobacterium-mediated plant transformation have been modified as destination vectors that are convenient for the sub-cloning of targeted genes from Entry plasmids. However, when the destination and Entry plasmids have the same antibiotic resistance genes for bacterial selection, the non-recombinant Entry plasmid in the LR reaction mixture can compete with the recombinant destination plasmid during bacterial transformation and selection. Methods for the effective selection of recombinant destination plasmids are highly desirable. In this study, we demonstrated that Escherichia coli strain C2110, which is defective in DNA polymerase I (pAL1), could be used to select a recombinant binary destination plasmid with a RK2 replication origin, while the replication of the Entry plasmid with a ColE1 replication origin was inhibited. Plasmid DNA isolated from C2110 by a traditional mini-prep kit was used for restriction enzyme digestion, DNA sequencing, and Arabidopsis protoplast transfection. The binary plasmid in C2110 was also efficiently mobilized into Agrobacterium tumefaciens via the tri-parental conjugation method.     

基于质粒DNA匹配问题的分子算法

给定无向图,图的最小极大匹配问题是寻找每条边都不相邻的最大集中的最小者,这个问题是著名的NP-完全问题.1994年Adleman博士首次提出用DNA计算解决NP-完全问题,以编码的DNA序列为运算对象,通过分子生物学的运算操作解决复杂的数学难题,使得NP-完全问题的求解可能得到解决.提出了基于质粒DNA的无向图的最大匹配问题的DNA分子生物算法,通过限制性内切酶的酶切和凝胶电泳完成解的产生和最终接的分离,依据分子生物学的实验手段,算法是有效并且可行的.     

一种改良的质粒DNA小量提取法

对碱裂质粒小量法进行了改进,并且在提取过程中增加了ＬｉＣｌ处理。实验证明这种方法结果稳定,提取的质粒ＤＮＡ产量高、质量好,符合大多数分子生物学常规实验的要求。     

The use of cetyltrimethylammonium bromide for the rapid isolation from Staphylococcus aureus of relaxable and non-relaxable plasmid DNA suitable for in vitro manipulation

Plasmid DNA was isolated from Staphylococcus aureus by a rapid method that depends on the precipitation of DNA from cleared lysates by cetyltrimethylammonium bromide at low salt concentrations. The method was validated by its ability to provide DNA for restriction analysis of a highly relaxable plasmid species that is not isolated by more traditional techniques. The DNA can be digested with restriction endonucleases and used for transformation without further purification. The method also provides the basis for analysing staphylococcal plasmids that display a high frequency of deletion after transfer. Simple modifications of the technique allow plasmid DNA to be isolated from other bacteria and the rapid purification of DNA samples before in vitro manipulation.