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研究哺乳动物早期胚胎发育与分化的ES细胞途径 总被引:3,自引:0,他引:3
ES细胞即胚胎干细胞,它是由哺乳动物附植前早期胚胎的内细胞团细胞体分离培养而建立的。其特点是只生长,不分化,并保持发育的多能性。作为一种理想的模型系统与有用的工具,可用于研究哺乳动物早期胚胎的发育与基因的表达。 相似文献
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胚胎干细胞向造血细胞分化研究 总被引:2,自引:0,他引:2
胚胎干(embryonic stem,ES)细胞是来源于囊胚的内细胞团(inner cell mass,ICM),具有发育的全能性或多能性,能嵌合到早期胚胎,在体内可以参与各种组织发育甚至包括生殖细胞;在体外分化培养条件下,可以顺序分化出各种组织细胞,与体内完整胚胎发育过程相符合,而且可以通过调节ES细胞某些基因的表达而调节其分化。因此,ES细胞是研究哺乳动物早期胚胎发育、细胞分化及其关键基因鉴定的理想模型。另外,胚胎生殖脊(embryonic germ,EG)细胞系也具有同样的生物学特性,它是由早期胚胎的原始生殖脊(primordial germ,PG)细胞建株而来。最近研究显示:ES细胞在体外不但可以分化为所有造血细胞系,而且还可以分化为具有长期增殖能力的造血干细胞。作者就胚胎干细胞向造血细胞和造血干细胞分化及其诱导因子和调控基因的表达作一综述。 相似文献
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胚胎性干细胞定向诱导分化——新崛起的细胞工程 总被引:1,自引:0,他引:1
胚胎性干细胞(ES)细胞)是一类稳定地在体外自我增殖、具有发育全能性和产生属于三个胚层范畴分化细胞、甚至参与体内个体完整发育的早期胚胎细胞。包括人类在内的各种哺乳类ES细胞分离建系成功,结合体外基因操作和细胞分化诱导条件选择等综合途径,有可能控制ES细胞导向产生单一类型的功能性分化细胞。这种全能ES细胞生物学技术已成为一项崛起的细胞工程。在新世纪10-15年内将对分子细胞生物学、发育生物学和人体胚 相似文献
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郑瑞珍 《中国生物工程杂志》1994,14(2):18-27
胚胎干细胞研究进展郑瑞珍(中国科学院发育生物学研究所北京100080)一、前言胚胎干细胞(EmbryonicStemcell,ES)是从早期胚胎的内细胞团分离来的,能在体外培养的一种高度未分化的细胞,在某种意义上也可以说它是一种具有发育全能性的细胞。英国的Evans和Kaufman最早于1981年[1]用延缓着床的胚泡首次建立了小鼠胚胎干细胞。 相似文献
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小鼠胚胎体外培养条件的研究 总被引:1,自引:1,他引:0
为了探讨小鼠胚胎在体外发育过程中的最佳方案,我们将从超排昆明小鼠取出的543枚受精卵经过不同的培养液(M16、M16+OEC、Glu-FreeM16和Glu-FreeM16+OEC)及不同的培养微环境处理后,观察胚胎体外发育的过程。结果表明,葡萄糖在胚胎发育早期(2细胞期)有比较明显的发育阻断作用,同种输卵管上皮(OEC)共同培养能够有效地抑制这种阻断作用;葡萄糖对胚胎8-16细胞期及以后阶段的发育具有十分重要的作用,而此时OEC的作用则不明显;除了葡萄糖外,在早期可能还有其它一些象磷酸盐、重金属离子的物质也能起胚胎发育阻断作用。同时还发现培养微环境的稳定也是胚胎发育的重要保证条件,石蜡油的封盖能够保持某种特定微环境而支持胚胎的体外发育。 相似文献
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小鼠原生殖细胞体外培养及其应用研究 总被引:3,自引:0,他引:3
原生殖细胞(primordialgermcell,PGC)是胚胎生殖谱系最原始形式的细胞,在体胚胎迁移期PGC增殖极为旺盛。体外培养的小鼠迁移期PGC在饲养层细胞和三种生长因子(干细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子及白血病抑制因子)的共同作用下,可发展为长期增殖并维持不分化状态的胚胎性干细胞,即胚胎生殖细胞(embryonicgermcell,EG),具全能性发育潜能。EG建系成功对于研究生殖细胞发育以及寻找新的转基因动物操作的有效载体具有重要价值。 相似文献
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ES细胞(EmbryonicStemCels)是来源于小鼠早期胚胎的细胞系,它可以在体外大量培养而不失去其发育的多潜能性。ES细胞不仅可以用来制作转基因动物,而且能够作为载体进行基因打靶等多种研究。目前,国际上常用的胚胎干细胞系都是来源于129小鼠的胚胎。因而,有必要探讨用其它品系小鼠建立ES系。1991年,Ledermann等人首次报道从C57BL/6J小鼠胚胎中建成了ES细胞系,但是没有对建立的细胞系进行特性分析。国内柴桂萱等人虽然做了特性分析,但是他们所建细胞系的细胞直径较大,生长速度较慢,不同于常见的ES细胞系。我们从C57BL/6J品系小鼠胚胎中共分离了四个ES细胞系,分别命名为CE1、CE2、CE3、CE4(Fig.1a&b)。这四个细胞系核型正常率均达到70%以上。我们检查了CE2细胞的分化能力,当将CE2细胞注入同基因型小鼠的皮下后,获得的畸胎瘤(Fig.3)组织切片检查的结果表明:该细胞能够分化成多种组织(Fig.2)。我们也研究了ES细胞的嵌合能力,用ICR小鼠胚胎作为受体胚胎,采用囊胚显微注射法构建嵌合鼠。在幸存的幼鼠中我们获得了来源于CE2细胞的嵌合鼠(Table1,Fig.4)。综 相似文献
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组织工程的新来源--原始生殖细胞 总被引:1,自引:0,他引:1
原始生殖细胞具备发育全能性,因数量较多,所以进行分离克隆将优于数目较少的内细胞团细胞。可作为组织工程的新来源:原始生殖细胞是研究基因组印迹与胚胎早期发育关系的最佳材料,还是研究生殖细胞发育分化的体外模型和研究转基因动物遗传操作的有效载体.具有广泛的应用前景。 相似文献
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本文简要总结了近年来哺乳动物早期发育相关microRNA(miRNA)的研究进展。miRNA是真核生物中一类长度约为18~25 nt的内源性非编码单链小RNA分子,其调控基因表达是近年来在动植物体内发现的一种新的生物学调节机制。通过荧光定量PCR检测、miRNA的过表达、抑制或基因敲除实验以及生物信息学分析等发现,miRNA在哺乳动物植入前胚胎前的发育过程中有重要作用,参与胚胎细胞的增殖、分化、基因印记以及重编程甲基化等,与动物生殖或发育异常相关,是表观遗传学的研究热点之一。 相似文献
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高效建立129/ter、C57BL/6J小鼠胚胎干细胞系的方法学探讨 总被引:11,自引:0,他引:11
小鼠胚胎干细胞 (ES细胞 )是从小鼠囊胚内细胞团(ICM)分离出来的、在体外培养过程中可维持未分化状态、正常二倍体核型及无限增殖能力 ,具有多能性或全能性的细胞系[1~ 3 ] 。ES细胞广泛应用于克隆动物制作、转基因动物生产、动物医学模型建立、真核细胞基因表达与调控的研究、细胞分化机制的探索、人及哺乳动物基因功能的研究以及细胞、组织、和器官的修复与移植研究。胚胎干细胞的研究和应用已成为生命科学研究的热点和前沿领域之一[4~ 8] 。自第一株 12 9小鼠ES细胞系建立以来 ,人们在生物学和医学等多个领域进行了广泛深入的… 相似文献
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小鼠胚胎干细胞(ES细胞)具有分化的全能性已经得到广泛共识。ES细胞在体外分化所形成的拟胚体在结构上能够模仿早期胚胎发育过程,包括在内细胞团表面形成内胚层、柱状上皮细胞的分化,以及中央空腔的形成。本文介绍利用拟胚体研究小鼠早期胚胎发育过程中各个胚胎阶段的发育、细胞程序性死亡的发生及TGF-β信号在胚胎发育过程中的作用。 相似文献
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转基因动物在研究基因的功能、医药、畜牧业等方面有重要的应用。利用胚胎干细胞(ES)制作转基因动物,比传统的显微注射法有无可比拟的优点。但是,目前、只在小鼠中建立起了ES细胞系,在其它哺乳动物(包括家畜)中尚未建成。近来,人们开始探索:改变胚胎细胞的遗传物质(如:把外源基因导入胚胎细胞)是否有利于获得ES细胞系.在各种外源基因中,癌基因是值得尝试的基因。因为:(1)ES细胞的建系是使胚胎的ICM细胞永生化的过程;(2)在体外利用癌基因转染可使许多原代培养细胞永生化;(3)ES细胞高表达一些原癌基因。我们用癌基因EJ-ras转染小鼠ES细胞,观察其对ES-5细胞一些特性(增殖、嵌合能力)的影响,以便选择合适的癌基因用于家畜ES细胞的建系。ES-5细胞通常培养在丝裂霉素处理的小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)上(Fig.A)。转染用ES-5细胞培养在无饲养层细胞的、含有大鼠肝细胞(BRL)的条件培养液DMEM中。EJ-ras基因克隆在真核表达载体PSV2neo的BamHI位点上、使用磷酸钙法转染ES-5细胞,G-418法筛选阳性克隆,得到的抗性克隆仍以集落形式生长(Fig.B),选取5个较好的克隆(ES-ras1,2, 相似文献
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多倍体发育现象在低等动物,尤其是在无脊椎动物中比较普遍,在哺乳动物中多倍体往往发育到胚胎早期就死亡,因而在自然界中不能存活。探讨哺乳类四倍体不能存活的原因是当今生物学研究的热点问题之一。目前,电融合技术是大量获得四倍体胚胎的主要手段。本以8-12周龄昆明小白鼠为实验对象,取其2-细胞胚胎于Whitten氏液中进行电融合,再移入CZB液中培养。电刺激的条件分别为:1.0kv/cm,40μs,和0.8kv/cm,80μs。对融合胚发育的状态、细胞数目及染色体组成等进行观察的结果表明,融合胚培养24小时后发育到4-细胞期,并发生致密化(Tab.1)。融合胚的囊胚形成时间与体内发育的同期胚胎及体外培养的同期二倍体胚胎基本一致(Tab,2;Fig.1)。融合囊胚的细胞数平均为13.0±4.95,显(P<0.01)少于体外发育囊胚(37.0±5.92)和体内发育囊胚(41.6±2.4)的细胞数(Tab.3)。融合胚各个分裂相的染色体数目分布情况见Fig.2,其四倍体(4n=80)率为42.86%,非整倍体率达57.14%。而对照组的体内发育囊胚的非整倍体率仅为11.54%;(Tab.4),与Kaufman的结果(12.4%)很接近,说明本实验中的染色体制备技术和分析方法是可行的。融合囊胚的细胞数目减少和高发的非整倍体率可能是四倍体胚胎发育能力差的原因。 相似文献
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动物胚胎干细胞诱导分化的研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
胚胎干细胞 (ES细胞 )是从动物早期胚胎的内细胞团或原始生殖细胞分离出来的具有发育全能性的一种未分化的无限增殖细胞系 ,ES细胞能体外诱导分化为神经细胞、肌肉细胞、成纤维细胞等各种细胞。综述了动物的ES细胞的分化诱导机理及目前体外诱导分化的研究现状 相似文献
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哺乳类早期胚胎发育阻滞的形成与突破 总被引:11,自引:2,他引:9
本文对有关哺乳类(包括人)着床前早期胚胎发育阻滞的形成与突破的研究近况作了概述。早期胚胎发育阻滞一般都发生在最初四个细胞周期中的某个长G_2相阶段,该时期恰好是贮存在胚胎细胞中源自母系的mRNA失活或降解、胚胎细胞自身基因组应该被激活的临界期,胚胎在这时对环境压力非常敏感。过氧化氢类物质在胚胎细胞内高含量累积也是导致发育阻滞的因素之一。早期胚胎的正常发育必须依赖于源自生殖道上皮细胞的信号,这类外源信号被初步认为蛋白质性质。提供某些生长因子,或清除微环境中有害物质等都将有助于 胚胎的正常发育。早期胚胎间的协同作用在体外胚胎正常发育中的正效应已引起人们的重视。 相似文献
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兔输卵管上皮细胞解除大鼠早期胚胎发育阻滞的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
本研究利用兔输卵管上皮细胞,与异种动物大鼠的受精卵共培养,结果大量出现突破2细胞发育阻滞的现象。体外受精卵和体内受精卵的2细胞发育阻滞突破率分62%和73%;利用ROEC条件培养液培养大鼠的体外受精卵,2细胞发育阻滞的突破率达68%,且能顺利发育至桑椹胚和囊胚。将ROEC直接培养在含^35S-甲硫氨酸的CZB培养液中,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及放射自显影,发现在该条件培液中出现了分子量分别为1 相似文献
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恶性畸胎癌干细胞又叫做胚胎性癌细胞(简称EC细胞),是一种来自生殖细胞或早期胚胎细胞的恶性癌细胞,不仅具有类似于早期胚胎细胞分化多能性,而且能在一定条件下失去恶性生长性质,分化为各个胚层的正常组织。EC细胞是开展哺乳类胚胎早期发育遗传以及癌变和癌细胞分化研究较好的实验材料。EC细胞在体外可以大量培养生长,较之正常胚胎细胞更容易获取。我们在建立体内腹 相似文献