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核酸分子杂交实验中需要把电泳分离的核酸区带转移到载体膜上。转移的方法有吸水纸法和电泳法。前者简便,但对大分子核酸效果较差,需时较长。后者效率与分子量无关,转移迅速,但实验设备稍复杂。目前,国际上电泳转移多用带铂电极的凝胶脱色 相似文献
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催化信号放大系统在原位杂交检测中的应用研究 总被引:22,自引:4,他引:18
CSA ( Catalyzed Signal Amplification;催化信号放大 )法首次由 Bobrow等 [1]报道应用免疫酶联和蛋白电泳转移膜的检测 ,1 992年 Adams等[2 ] 将该方法应用于免疫组织化学中 ,Kerstens等 [3 ]又将该方法应用于原位杂交 ( ISH)。应用于免疫组织化学检测较传统的 PAP、ABC、LSAB和 En Vision法相比具有较高的敏感性 ,比 LSAB法要敏感 50 0~1 0 0 0倍 ,较 En Viion法敏感 50~ 1 0 0倍 ,而且稳定性高 ,背景低等特点。本实验室已引进该方法 ,应用于免疫组化和原位分子杂交组化 ,其原理 :杂交后 ,经洗 ,Dig标记探针接生物素化抗 D… 相似文献
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一、印迹法转移核酸 1.瑟慎印迹转移(Southern Blot) (1)按实验要求用某一限制性内切酶消化DNA样品。一般情况下,每微克DNA用3—10单位酶(质粒,噬菌体DNA等每微克3个单位酶,哺乳类DNA每微克8—10单位),37℃下保温5小时或过夜即可完全消化。 相似文献
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我们曾采用液相核酸分子杂交竞争抑制实验,比较了小鼠正常肝和小鼠腹水肝癌的细胞核RNA和细胞质RNA。液相核酸分子杂交技术具有其优点,如DNA-RNA杂交率比较高等,但也存在有不足之处,如变性DNA的自我“退火”,直接影响到DNA-RNA杂交分子的形成等。有鉴于此,我们又采用了Gillespie和Spie-gelman(1965年)的DNA-膜固相核酸分子杂交技术,分析比较了我所建立的二乙基亚硝 相似文献
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从凝胶中分离DNA或DNA片断是基因工程中常用的手段.在重组DNA、分子杂交、基因诊断等实验中,经常需要从凝胶中分离并回收核酸或核酸片断.目前分离DNA片断的方法很多.常用的如电洗脱法、冻融法等操作烦琐且得率较低;低融点琼(王旨)糖法得率较高,但价格昂贵,特别是回收的DNA片断常混有细小琼(王旨)糖颗粒,影响以后的酶切、连接等.我们摸索了一种简便方法,能够从琼(王旨)糖凝胶中高纯度、高得率地分离核酸或核酸片断,回收所得的DNA片断可以直接用于各种酶切反应和基因重组实验.现以分离P~(ZB24)重组质粒中2.3kb的大R蠖核多角体基因片断为例,说明如下: 相似文献
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任何一种微生物只要具有一个其他微生物均没有的特异性核酸片段 ,都可以用分子生物学技术进行诊断 ;同时可应用基因工程技术制备的药物、干扰素基因、核酸疫苗、反义核酸和核酶技术产品等对传染病进行治疗。应用于诊断的技术有 7种。即顺序为 :(1)即核酸杂交技术 (斑点杂交和吸印杂交 )、(2 )多聚酶链反应(PCR)、(3)核酸直接电泳、(4)核酸酶切后电泳、(5 )蛋白吸印检测 (WB)、(6 )抗原制备、(7)变异研究等。第一种中的二法 ,前者灵敏度和特异性都较好 ,很少出现假阳性现象 ;后者不但可判断特异性核酸的有无 ,还可确定该核酸存在的状态 … 相似文献
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本文用生物素标记柯萨奇B3病毒(Cox B3)cDNA(530bp)制备探针,检测不同病毒(Cox A9,Cox B1—B6,Polio1,ECHO1,AD3,HSV-1,HSV-2,VV)感染的Hela细胞,结果表明该探针只与肠道病毒核酸杂交而不与非肠道病毒核酸杂交,且可检测出Cox B3感染Hela细胞后3小时细胞病变阴性(CPE~-)细胞内的肠道病毒核酸,表明该探针具有良好的特异性和敏感性.同时用Cox B1感染BalB/c小鼠,建立小鼠心肌炎模型,取心肌组织与该探针进行原位杂交,成功地检测出心肌组织中的肠道病毒核酸.这对于用该探针检测人类病毒性心肌炎组织中的肠道病毒核酸,对病毒性心肌炎进行特异的早期诊断积累了经验. 相似文献
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增强化学发光基因检测技术(enhanced chemiluminescence,简称ECL)是目前最灵敏的非放射性核酸检测方法之一。其灵敏度可以满足多数杂交技术的需要(达pg水平),并且具有快速显示杂交结果(曝光1~5min)和对人无伤害、对环境不会造成污染等独特优点。在分子生物学研究中有广泛的用途。根据我们应用ECL基因检测系统(amersham)情况,将这一技术介绍如下。 ECL检测系统的工作原理是在氧化剂存在时,刚被氧化的发光底物被HRP催化形成 相似文献
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核酸降解物在水稻生产上的应用及其作用机理的研究——Ⅲ.水稻对~(14)碳-核酸降解产物的吸收和运转 总被引:2,自引:0,他引:2
用~(14)碳标记的核酸降解产物,~(14)碳-核苷酸、~(14)碳-尿嘧啶核苷和~(14)碳-腺嘌呤,研究了水稻秧苗对核酸降解产物的吸收和运转。水稻秧苗叶面和根部都能吸收这些~(14)碳标记的核酸降解产物,其中叶面对~(14)碳-核苷酸的吸收,在6小时后除去所涂叶片外其他部分吸收达70~80%左右,因此在实际应用核酸降解产物中,如喷施6小时内降雨,需要补喷以发挥其应有的效果。 相似文献
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核酸组成成分及衍生物的分析除常用的电
泳、纸层析和薄层层析洗脱比色法外,近年来
又出现了双波长色谱扫描法和高压液相层析
法[2,3]。但已报道的双波长色谱扫描法测定的
碱基种类不多,在测定DNA (G + C)克分
子外方面,尚未见报道。我们在实验中摸索出
分离核酸碱基效果好的硅胶薄层析,并考查了
双波长色谱扫描分析法的准确度。 相似文献
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大肠杆菌(E.coli)中断杂交基因定位是微生物遗传实验教学中必做的基础实验之一,目前均采用冷泉港实验室Miller提出的机械中断法。此法需用Low和Wood设计的Vortex中断装置,但此装置较为复杂,国内尚无生产。为了使同学掌握本实验的工作原理,我们探索了化学中断法,利用萘啶酮酸对E.coli染色体转移有一定抑制作用,以此代替中断机 相似文献
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荧光原位杂交及其应用 总被引:1,自引:0,他引:1
荧光原位杂交(FISH)法是直接从组织或细胞中检测特定DNA或RNA的最有效方法。整个操作过程为:1)制备探针;2)细胞或组织显微镜标本的制作;3)原位分子杂交;4)荧光免疫检测;5)显微镜下观察。其中以1),2)步最为关键。FISH法的最大特点是灵敏度高,并可以进行定量分析。FISH法可应用于染色体上的基因定位,基因表达的检测,病毒感染的检查,特定核酸序列在细胞内的空间分布分析以及核酸复制过程中的定量分析等许多领域的实验中。 相似文献
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林万明 《中国微生态学杂志》1990,(2)
在过去的杂交技术中,核酸多用~(32)P放射性同位素标记,但由于这些同位素半衰期短,价格昂贵,对人体有危害,因而限制了杂交技术的应用。近年来,许多研究者已成功地将生物素分子标记到 相似文献
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轮状病毒NASBA检测研究 总被引:3,自引:0,他引:3
轮状病毒是世界范围内流行性胃肠炎暴发的重要病因。以患者粪便为样抽提轮状病毒RNA,在轮状病毒VP7高保守基因区段上设计引物,运用核酸序列依赖的扩增(NASBA)法进行检测,变性琼脂糖凝胶电泳和Northern杂交验证。NASBA预期的特异性产物为392bp,并在仅以目标核酸为模板或在浓度高达1μg/μL的非特异性核酸存在的混合模板中,均有清晰的目标带产生,表现出了很高的特异性。其灵敏度和RT-PCR相同甚至更高,可检测到50pg的核酸,并且当反应时间为3h时检测灵敏度最高。NASBA法扩增效率高、灵敏度高、快速易操作,尤其适用在基层单位推广应用。 相似文献