鸡胚与胎鼠的成纤维细胞条件培养液促进成肌细胞增殖和融合的比较

用培养过鸡胚(来亨鸡)或胎鼠(ICR小鼠)肌组织的成纤维细胞的条件培养液,定量地研究它们对胎鼠或鸡胚的成肌细胞的增殖和融合的影响。所得结果如下:(1) 胎鼠的成纤维细胞条件培养液促进胎鼠或鸡胚成肌细胞增殖,分别为对照组的2.65倍,(P<0.001)或2.35倍,(P<0.01);(2) 鸡胚的成纤维细胞条件培养液促进鸡胚或胎鼠的成肌细胞增殖,分别为对照组的2.66倍,(P<0.01)或2.17倍,(P<0.01);(3) 胎鼠的成纤维细胞条件培养液增加胎鼠或鸡胚的成肌细胞的融合率,分别为对照组的1.9倍或2.6倍;鸡胚的成纤维细胞条件培养液只增加鸡胚成肌细胞的融合率,为对照组的2.1倍,但对胎鼠成肌细胞的融合无明显的影响。 实验结果提示:成纤维细胞条件培养液促进成肌细胞的增殖,两种动物间无明显的差异,但在融合上却有一定的种属特异性。     

尼古丁对牙周炎大鼠牙周膜成纤维细胞的毒性作用

目的:观察尼古丁对牙周炎大鼠牙周膜成纤维细胞(PDLFs)增殖的抑制作用及对细胞周期分布的影响,探讨尼古丁的细胞毒性作用,为口腔疾病的预防及治疗提供基础。方法:选取30只SD大鼠,采用丝线结扎联合口内接种细菌的方法建立牙周炎大鼠模型。将不同浓度的尼古丁分别作用于大鼠的牙周膜成纤维细胞(PDLFs)中,观察大鼠牙周组织的变化情况,MTT法测定细胞增殖活性,分析不同浓度尼古丁对PDLFs增殖的抑制作用。结果:实验组大鼠牙周组织胶原纤维束排列紊乱,有炎症细胞浸润;对照组大鼠牙龈未见红肿或出血。尼古丁可抑制PDLFs增殖,并且呈浓度依赖性,随着浓度的增加,对PDLFs增殖的抑制作用增强,差异具统计学意义(P0.05)。与对照组相比,不同浓度尼古丁作用下牙周炎大鼠牙周膜成纤维细胞周期的分布率明显不同(P0.05)。结论:尼古丁对牙周膜成纤维细胞增殖具有明显的抑制作用,尼古丁的浓度影响牙周组织的修复重构能力。     

仙人掌提取物对浅Ⅱ度烫伤治疗作用的研究

目的:探讨野生仙人掌提取物对浅Ⅱ度烫伤小鼠的治疗作用。方法:建立浅Ⅱ度烫伤小鼠模型,随机分为仙人掌提取物乙醇组A1,蒸馏水组A2和混合组A3(每组又分低、中、高3个浓度),烫伤(阴性)组B,药物(阳性)组C。每天涂药1次,观察、记录创面愈合情况,分别在5d和12d各组随机取5只小鼠做病理切片,观察并记录血管、纤维细胞、成纤维细胞等的数量,进行统计学分析。结果:①混合提取物中、高浓度组愈合时间,与烫伤组相比有显著性差异(p0.05、p0.01)。②5d时不同的仙人掌提取物组与烫伤组比,血管数量、成纤维细胞占总纤维细胞的百分含量都有差异(p0.05)。结论:野生仙人掌提取物能加速烫伤创面愈合,尤其对血管和成纤维细胞有显著的促进增生作用,并加速再上皮化。     

肥大细胞与肺成纤维细胞共育方法

近年来,肥大细胞(mast cell,MC)对成纤维细胞生长的影响受到人们的关注。MC与成纤维细胞共育方法为研究其影响的重要手段。我们取腹腔MC与同源动物肺成纤维细胞(lung fibroblast,LFB)共育,观察MC对LFB生长的影响,方法基本稳定,国内尚未见报道。现介绍如下。     

巨细胞病毒对人胚成纤维细胞骨架的影响及其凋亡诱导作用

人胚成纤维细胞是人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,CMV)的容许细胞,CMV可在该细胞内活化复制[1].CMV感染后对细胞骨架及细胞凋亡有何影响尚不明确.国外有学者在透射电镜下观察感染CMV的人胚成纤维细胞,发现其微丝解聚,细胞骨架破坏[2],但结果尚不完善.我们的研究分别从细胞形态学、核酸水平、细胞超微水平等方面观察了感染CMV后的人胚成纤维细胞形态、肌动蛋白基因(β-actin)mRNA以及微丝的变化,并进一步观察了其对细胞凋亡的影响.     

大鼠卵巢颗粒细胞aFGF及bFGF基因表达的研究

成纤维细胞生长因子(FGFs)是一类多功能因子,具有广泛的生物学作用,它对卵泡发育的许多方面如颗粒细胞的生长及分化、纤维蛋白溶酶原活化剂的释放、血管生成等都有影响。FGFs按等电点的不同分为酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF),两者有55％的同源性并作用于同一受体。从已有资料分析,aFGF和bFGF在进     

普伐他汀对醛固酮诱导心脏成纤维细胞内皮素合成的影响

目的:探讨普伐他汀对醛固酮诱导新生大鼠心脏成纤维细胞内皮素(ET)的影响。方法:采用胰酶消化法和差速贴壁分离法获取和培养新生大鼠心脏成纤维细胞,应用放免法、流式细胞术、RT-PCR的方法分别测定醛固酮、普伐他汀以及甲羟戊酸干预下心脏成纤维细胞培养液中ET水平和心脏成纤维细胞中的ET-1含量,以及内皮素-1前体(ppET-1)mRNA的表达。结果:与正常对照组相比,醛固酮(10-7mol/L)可促进心脏成纤维细胞培养液中ET水平和心脏成纤维细胞中的ET-1含量及ppET-1 mRNA的表达,提前给予普伐他汀(10-5,10-4,10-3mol/L)能剂量依赖性地抑制醛固酮的上述作用,同时这种抑制作用可被甲羟戊酸所逆转。结论:普伐他汀可抑制醛固酮诱导的心脏成纤维细胞ppET-1mRNA表达以及ET-1的合成和分泌,其机制可能与甲羟戊酸代谢途径有关。     

脂氧素A4对瘢痕成纤维细胞生物学活性的影响及机制研究

最新文献表明,脂氧素A4(lipoxin A4,LXA4)对组织纤维化及相关疾病有防治作用。为了观察脂氧素A4对瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡和胶原合成的影响并探讨其抗瘢痕形成的机理,该文首先通过RT-PCR和Western blot法检测瘢痕成纤维细胞是否表达脂氧素受体ALX;然后将不同浓度脂氧素A4加入瘢痕成纤维细胞培养液中分别作用相应时间后,MTT法检测细胞的增殖程度,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,羟脯氨酸测试盒检测细胞培养液中羟脯氨酸含量,ELISA法检测细胞培养上清中TGF-β水平。结果发现,瘢痕成纤维细胞表达ALX,脂氧素A4抑制瘢痕成纤维细胞增殖、羟脯氨酸释放及TGF-β分泌,同时还诱导细胞凋亡。综上所述,脂氧素A4抑制瘢痕成纤维细胞增殖和胶原合成并诱导其凋亡,可能是防治瘢痕形成的重要潜在药物。     

普伐他汀对心脏成纤维细胞转化生长因子-β1合成的影响

目的:探讨普伐他汀对醛固酮诱导新生大鼠心脏成纤维细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响。方法:采用胰酶消化法和差速贴壁分离法获取和培养心脏成纤维细胞,应用ELISA、Western-blot、RT-PCR的方法分别测定醛固酮、普伐他汀以及甲羟戊酸对心脏成纤维细胞培养液中TGF-β1水平和心脏成纤维细胞TGF-β1mRNA和蛋白质的表达。结果:与正常对照组相比,醛固酮(10-7mol/L)可促进心脏成纤维细胞培养液中TGF-β1水平和心脏成纤维细胞TGFβ-1mRNA和蛋白质的表达,提前给予普伐他汀(10-5,10-4,10-3mol/L)能剂量依赖性地抑制醛固酮的上述作用,同时这种抑制作用可被甲羟戊酸所逆转。结论:普伐他汀可抑制醛固酮诱导的心脏成纤维细胞TGF-β1mRNA表达以及蛋白质的合成和分泌,其机制可能与甲羟戊酸代谢途径有关。     

心脏成纤维细胞旁分泌能力影响小鼠胚胎干细胞的命运（英文）

本研究旨在探讨心脏成纤维细胞旁分泌能力对小鼠胚胎干细胞的影响。新生小鼠和成年小鼠成纤维细胞的条件培养基(ConM-NCF、ConM-ACF)分别稀释50倍(1:50)或5倍(1:5),通过RT-real time PCR技术、ELISA、细胞增殖检测以及计数心肌分化过程中跳动拟胚体(embryoid body, EB)的比例,观察这些条件培养基对小鼠胚胎干细胞的影响。结果显示,成纤维细胞细胞因子的分泌能力在发育过程中发生显著变化,其中白细胞介素6 (interleukin 6, IL6)随发育成熟显著增加。ConM-NCF抑制干细胞的增殖,但高、低浓度对干性基因表达的作用不同。Con M-ACF 1:50促进干细胞增殖并上调干性基因,但Con M-ACF1:5作用相反。ConM-NCF和ConM-ACF都能抑制干细胞的心肌细胞分化能力,但又各有特点:ConM-NCF 1:50抑制早期心肌分化但不影响晚期心肌细胞标记物的表达;ConM-ACF 1:50抑制早期心肌分化比ConM-NCF 1:50更显著,阻碍心肌成熟并上调分化晚期的心肌细胞标记物表达水平。此外,IL6中和抗体抑制ConM-ACF 1:50对干细胞的促增殖作用,但不影响ConMNCF 1:50的作用。干细胞分化过程中长期应用IL6中和抗体,抑制早期心肌细胞分化,但对晚期分化不产生影响。以上结果提示,心脏成纤维细胞分泌的细胞因子种类和浓度都对小鼠胚胎干细胞的增殖、干性基因表达和心肌分化有重要意义,其中ConM-ACF分泌的IL6是干细胞干性维持和心肌细胞分化的有利因素。     

游离脂肪酸对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的:探讨游离脂肪酸(FFAs)对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响,研究游离脂肪酸在代谢综合征患者牙周病发病机制中的作用。方法:选用在牙周组织修复中起主要作用的人牙周膜成纤维细胞进行体外培养,对照组加入不含胎牛血清的DMEM,实验组分别加入不同浓度的游离脂肪酸进行刺激,在刺激24h-72h后,采用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测人牙周膜成纤维细胞的增殖情况。结果:与对照组相比,游离脂肪酸可以抑制人牙周膜成纤维细胞的生长增殖(P<0.01),并且这种抑制作用具有浓度和时间依赖性,以培养72h后抑制作用最为明显(P<0.01)。结论:游离脂肪酸可以抑制牙周膜成纤维细胞的增殖,降低代谢综合征患者牙周组织的的修复能力,从而导致或加重牙周病的发生或发展。     

Wnt/beta-catenin信号通路关键因子在放射性肺纤维化中的作用

目的：观察直线加速器X射线照射对人肺成纤维细胞(HLFs)Wnt/beta-catenin 信号通路关键信号因子的影响并探讨其意义。方 法：HLFs分别经直线加速器0Gy、5Gy、8Gy X线照射后,MTT 比色法检测其增殖活性,筛选合适照射剂量。人肺成纤维细胞分为 照射组(R 组)和正常对照组(C 组),R 组经直线加速器X射线,5 Gy 照射24 h后,免疫荧光检测成纤维细胞alpha-SMA表达,Western blot检测成纤维细胞中GSK-3beta、p-GSK-3beta表达。结果：X 线5 Gy照射剂量可使人肺成纤维细胞增殖活力增强,较0 Gy、8 Gy增 殖曲线明显。照射组人肺成纤维细胞形态较正常组有明显差异。照射组人肺成纤维细胞琢-SMA,p-GSK-3beta表达水平升高, p-GSK-3beta/GSK-3beta比值升高,与正常对照组比较均有统计学意义(P<0.05)。结论：Wnt/beta-catenin 信号通路在放射性肺损伤的发生 发展中起调控作用,可能为放射性肺纤维化的治疗提供了新视角。     

TGF-β1在应力介导的牙周膜成纤维细胞增殖中的作用及其机制

目的:探讨周期性张应力作用下人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)转化生长因子β1(TGF-β1)对其细胞增殖的作用,及对其I型胶原基因表达的作用和影响.方法:在成功构建人牙周膜成纤维细胞体外培养力学刺激模型的基础上,利用多通道细胞牵张应力加载系统,对细胞分别施加2、6、12与24 h的周期性张应力,以不加力组为对照组,观察各组细胞形态变化,利用细胞计数试剂8检测细胞增殖活性,并利用ELISA试剂盒检测加力后各组TGF-β1的表达,并对加力12h组加入TGF-β1抑制剂SB431542,利用RT-PCR检测技术检测对I型胶原基因表达的影响.结果:与对照组比较,加力2h细胞增殖稍降低,6h增殖活性增强,12h达到峰值,24h增殖活性明显受到抑制;TGF-β1的表达与细胞增殖成正相关;TGF-β1受到抑制后细胞增殖受到影响,I型胶原的表达也受到影响.结论:人牙周膜成纤维细胞的增殖在一定时间的周期性张应力作用下先增加然后再抑制,其中TGF-β1参与细胞增殖,并且TGF-β1对人牙周膜成纤维细胞I型胶原的表达起促进作用.     

5-azaC对人体成纤维细胞失活X染色体DNA复制带型的影响

本文用胞苷的类似物5-氮胞苷(5-azaC)处理两种人体皮肤成纤维细胞——46,XX和46,Xt(X;1)。经过一定时间培养,观察用5-azaC处理人体成纤维细胞中失活X染色体复制带的变化。发现5-azac对迟复制X(LX)和t(X;1)染色体上有一条或多条复制带的染色增深,表示复制提前,大约比对照组提前复制1小时左右。同时发现t(X;1)染色体上,受X失活中心的失活扩散影响的1-10区段,用5-azac处理之后,也有复制提前。复制提前这一现象,从另一方面支持了DNA甲基化,可能是人类X染色体失活的一种机理。     

GLP-1拮抗活性氧对AGEs诱导乳鼠成纤维细胞凋亡的保护作用

为研究胰高血糖素样肽-1(Glucogon like peptide-1,GLP-1)对晚期糖基化终产物(Advanced Glycation End Products,AGEs)诱导成纤维细胞凋亡的影响及其机制研究。体外培养成纤维细胞,实验分为5组:正常对照组,200 mg/L AGEs试验组,AGEs(200 mg/L)+GLP-1(5 nmol/L)组,AGEs(200 mg/L)+GLP-1(10 nmol/L)以及AGEs(200 mg/L)+GLP-1(20 nmol/L)组,处理24 h。通过CCK-8比色法检测细胞存活率,相差显微镜观察细胞形态,双氯荧光素(DCFH-DA)染色荧光显微镜摄片观察细胞内活性氧(ROS)水平;运用Hoechst33258检测试剂盒及流式细胞术检测成纤维细胞的凋亡率,Western Blot检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2的表达量。结果表明:与正常组相比,200 mg/L AGEs组降低成纤维细胞生存率,活性氧(ROS)生成量增加;与AGEs组相比,AGEs+GLP-1组成浓度依赖性提高细胞生成率,活性氧(ROS)含量减少。与正常组相比,AGEs组导致促凋亡蛋白Caspase-3增加,抑制凋亡蛋白Bcl-2减少,细胞凋亡率升高;AGEs+GLP-1组较AGEs组下调促凋亡蛋白Caspase-3,上调抑制蛋白凋亡Bcl-2,细胞凋亡率减少。由此可见,GLP-1可以通过拮抗活性氧(ROS)发挥对AGEs诱导的成纤维细胞凋亡的保护作用。     

肾上腺髓质素对低氧时肺成纤维细胞内钙离子动态变化的影响

目的 动态观察低氧(2％O2)对培养的人胚肺成纤维细胞内游离钙离子浓度的影响及肾上腺髓质素预处理对其作用.方法 1、采用体外细胞培养方法,培养并鉴定人胚肺成纤维细胞;2、建立人胚肺成纤维细胞低氧(2％O2)模型;3、采用激光扫描共聚焦显微镜技术动态观测低氧时成纤维细胞内游离钙离子浓度的变化及肾七腺髓质素对其影响.结果 低氧促进成纤维细胞内游离钙离子浓度升高.与常氧组比较,低氧后成纤维细胞内游离钙离子浓度增加,标准荧光值峰值上升了70％ (P＜0.01).肾上腺髓质素预处理成纤维细胞后,低氧引起的成纤维细胞内游离钙离子浓度升高受到抑制,标准荧光值峰值上升了40％(P＜0.01),持续时间缩短了20s.结论 肾上腺髓质索可以抑制低氧引起的人胚肺成纤维细胞内游离钙离子浓度增加,提示这可能是其发挥调节成纤维细胞功能的作用机制之一.     

表皮生长因子对人二倍体成纤维细胞p21~(WAF-1)基因表达的双向性影响

p2 1 WAF-1又称 sdi- 1 ,是细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶 ( CDK)的抑制物基因 ,与细胞增殖调控及细胞衰老密切相关 .本研究为了解正常细胞中 p2 1 WAF-1对生长因子的反应性 ,以及其在细胞衰老时的表现 .我们以不同代龄的人胚肺二倍体成纤维细胞 ( 2 BS细胞株 )为实验对象 ,通过 Northern杂交术 ,观察表皮生长因子 ( EGF)对年轻 (低代龄 )细胞与衰老 (高代龄 )细胞 p2 1 WAF-1基因表达的影响 .结果显示 :p2 1 WAF-1在衰老 2 BS细胞中高表达 .EGF对年轻细胞 p2 1 WAF-1的表达有诱导作用 ,对衰老细胞有轻微诱导作用 ,在刺激后 3h左右达高峰 ,3～ 6h逐渐回落 ,并持续下降 .作用后 1 2h,其表达水平反而远低于作用前 .此作用在年轻细胞较为明显 .由此可见 :( 1 ) EGF对人二倍体成纤维细胞 p2 1 WAF-1的表达有双向性影响 ,先是一过性诱导 ,随后转为阻抑 ;( 2 )衰老细胞 p2 1 WAF-1对EGF的反应性有所降低     

铜蓝蛋白及纤维粘连蛋白对石英粉尘促进胶原转录的协同作用

本文使用人胶原α_1(Ⅰ)、α_2(Ⅰ)和α_1(Ⅲ)链cDNA探针,采用斑点杂交技术观察了铜蓝蛋白(ceruloplasmin,Cp)和纤维粘连蛋白(fibronectin,Fn)对体外培养的人胚肺成纤维细胞胶原mRNA合成的影响。发现Cp及Fn对成纤维细胞胶原mRNA的合成有促进作用。向培养的成纤维细胞中同时加入石英粉尘和Cp时,其刺激胶原mRNA增长的程度高于单独加入石英粉尘或Cp时的刺激作用。提示Cp对石英粉尘的促纤维化有协同作用。本实验同时证实Fn也具有类似于Cp的促纤维化的协同作用。     

人皮肤菌群分离株与成纤维细胞培养

为研究微生物群(微种群)与宿主的关系,我们在人成纤维细胞的培养物中,定量的加入从皮肤上分离的常住菌和其它菌株的纯培养物进行混合培养,设立不加菌液的对照组,发现加入疮疤丙酸杆菌(A_(14-1)、表皮葡萄球菌(F_(65))等常住菌,以及从皮肤上分离的干酪乳杆菌(ad_3株)、青春双歧杆菌(Bf_1),有促进人成纤维细胞生长,延缓其老化等作用。而加入从临床标本中分离的脆弱美杆菌(A104株)及金黄色葡萄球菌(189株),则出现培养的人成纤维细胞脱核、裂解和死亡等毒害作用。我们的实验表明:皮肤正常菌群对宿主的皮肤有生理性的滋助作用。     

甲状腺素对大鼠心脏细胞蛋白激酶C信号途径的影响

目的 :探讨甲状腺素对新生大鼠心脏细胞中蛋白激酶C(proteinkinaseC ,PKC)信号途径的影响。 方法 :培养新生大鼠心肌细胞及成纤维细胞 ,用 1%血清培养基或血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ ,AngⅡ)处理细胞 2 4h后 ,加入甲状腺素(三碘甲状腺素原氨酸 ,triiodothyronine,T3 )继续培养 4 8h后 ,用PKC活性检测试剂盒检测细胞中PKC活性 ,用West ernblot的方法检测细胞中PKCα及PKCε的表达。结果 :在 1%血清培养基中 ,T3 能明显抑制心肌细胞中PKC活性 ,使心肌细胞中PKCε表达下降 ,对PKCα的表达却没有显著的影响 ;在心肌成纤维细胞中 ,无论是PKC活性还是PKCα及PKCε的表达均未观察到T3 的调控作用。预先用AngⅡ处理 2 4h后 ,心肌细胞及心肌成纤维细胞中PKC活性明显增加 ,PKCε的表达显著增加 ,随后用T3 处理后 ,心肌细胞中PKC活性及PKCε的表达明显降低 ;而心肌成纤维细胞中PKC活性没有发生显著性的变化。结论 :甲状腺素能明显抑制心肌细胞中PKC活性及PKCε亚型的表达 ,其对心肌细胞中PKC信号途径的调控作用可能在心肌的多种病理生理过程中起着重要的作用。