天花粉过氧化物酶的提纯及其同工酶组成测定

本文介绍从新鲜天花粉块根榨汁中发现有14种碱性和酸性过氧化物酶并进行了提纯,同时,对提纯的碱性和酸性天花粉过氧化物酶制剂的同工酶组成进行了鉴定。     

在不同物理化学条件下天花粉蛋白的圆二色性研究

用圆二色谱研究了天花粉蛋白在酸性和碱性溶液中的构象,并观察了在十二烷基磺酸钠(SDS)溶液中天花粉蛋白分子构象的变化,用Chen,Yang与Martinez等人的方法计算了各种条件下天花粉蛋白二级结构含量.结果表明:在很宽广的pH范围内(从pH2到pH12)分子构象基本上是稳定的.但是,在强碱性条件下即pH>12(室温)或pH11.5(40℃)螺旋含量显著减少.在碱性条件下,于250nm附近出现一新的CD带,它的强度与离解的酪氨酸残基个数呈线性关系,说明这一新带主要是由离解的酪氨酸残基产生的.     

辣根过氧化物酶同工酶在不同介质中的动力学

本文研究了辣根过氧化物酶［ＥＣ１．１１．１．７］同工酶的联苯胺动力学。结果表明：其酸性酶和碱性酶的最适ｐＨ均为５．８左右。二者最适有机溶剂浓度略有差异：酸性酶最适乙醇浓度为５０％,最适二氧六环浓度为４０％;而碱性酶则分别为６０％和５０％。在水溶剂中,酸性酶为米氏酶,碱性酶为正协同的别构酶;在有机溶剂（如：乙醇、二氧六环）中,酸性酶为正协同的别构酶,碱性酶则仍为正协同的别构酶。即有机溶剂可能使酶构象发生变化。     

辣根过氧化物酶同工酶在不同介质中的动力学

本文研究了辣根过氧化物酶［ＥＣ１．１１．１．７］同工酶的联苯胺动力学。结果表明：其酸性酶和碱性酶的最适ｐＨ均为５．８左右。二者最适有机溶剂浓度略有差异：酸性酶最适乙醇浓度为５０％,最适二氧六环浓度为４０％;而碱性酶则分别为６０％和５０％。在水溶剂中,酸性酶为米氏酶,碱性酶为正协同的别构酶;在有机溶剂（如：乙醇、二氧六环）中,酸性酶为正协同的别构酶,碱性酶则仍为正协同的别构酶。即有机溶剂可能使酶构象     

天花粉蛋白对体外培养不同种类细胞的作用

本文进行了天花粉蛋白对离体培养的葡萄胎细胞、早孕蜕膜细胞、人胎儿肾皮质部细胞、HeLa细胞和鼻咽癌上皮细胞的损伤作用的比较研究。为了探索天花粉蛋白选择损伤细胞是否存在专一结合细胞的可能性,又以不敏感的蜕膜细胞为材料,应用辣根过氧化物酶标记技术进行了天花粉蛋白与细胞结合和进入细胞内定位的实验。此外,并以肝癌细胞为材料研究了对细胞增殖率的影响。结果表明葡萄胎合体滋胚层细胞和胎盘合体滋胚层细胞一样都是最敏感的细胞,经1微克天花粉蛋白处理即出现形态上损伤,至50微克则大多数细胞呈现不可逆的退化损伤,而其它类型的细胞则表现出有相当大的抗性。过氧化物酶标记追踪天花粉蛋白在细胞内分布的结果表明天花粉蛋白与蜕膜细胞有一定的亲和力,提示天花粉蛋白似乎不存在严格的细胞结合专一性;而天花粉蛋白在细胞内的分布一般仅限于细胞质,这一现象似乎提示细胞质区可能就是天花粉蛋白直接作用的靶的范围。细胞增殖率的实验结果表明50微克以上的药物剂量对肝癌细胞增殖率有一定的抑制作用,剂量增加抑制作用也增加。但是,经过一定的修复期以后,细胞增殖率又可得到完全恢复,反映了对细胞生长抑制的可逆作用。上述实验结果进一步加强了天花粉蛋白对滋胚层细胞具有一定细胞损伤专一性的结论。本文并对细胞损伤专一性问题进行了讨论。     

浙江蝮蛇毒磷脂酶A抗凝作用的研究

本文研究分析了从浙江产蝮蛇毒提纯的三种磷脂酶A(PLA)的抗凝活性,结果只有碱性PLA具有抗凝作用,而酸性PLA与中性PLA(Agkistrodotoxin)均无此作用。碱性PLA能显著延长血浆复钙时间和凝血酶原时间,影响血液凝血活酶的生成,抑制血小板磷脂与红细胞磷脂的促凝活性,但对凝血酶时间及纤维蛋白平板溶解试验无影响。这些结果表明,碱性PLA可能通过对膜磷脂的作用而干扰凝血酶原酶的形成。碱性PLA明显改变了血小板和红细胞的电泳速率,而酸性及中性PLA则影响较小,提示碱性PLA抗凝活性可能与膜磷脂特异活性部位的结合反应有关。     

天花粉蛋白研究讨论会在京举行

1986年4月22日至25日,中国科学院在北京举行了天花粉蛋白研究讨论会。天花粉蛋白是我国科研人员于20多年前从民间流传的引产中药天花粉中发现并提取出来的一种单链碱性蛋白质。经过科学院有机化学所和细胞生物所(前实验生物所)与一些医疗部门(如上海龙华医院、瑞金医院等)结合临床多年研究和改进,发现结晶天花粉蛋白能有效而安全地用于抗早孕、中期引产和治疗葡萄胎、宫外孕甚至抑制一些肿瘤。动物实验证明,天花粉蛋白能相当专一地损伤胎盘滋养层合体细胞,从而在细胞水平初步阐明了引产机理。为了进一步从分子水平深入开展研究,有机所从1973年左右开始了天花粉蛋白氨基酸序列     

酸性和碱性酶稳定性机制及其识别

了解酸性和碱性酶稳定性机制并对其进行识别具有重要理论和实践意义。通过分析105条酸性酶和111条碱性酶序列的氨基酸组成, 结果表明: 酸性酶中Trp、Tyr、Thr和Ser的含量明显高于平均值, 而Glu、Lys、Met和Arg的含量则明显低于平均值; 碱性酶中Trp、Ala和Cys的含量略高于平均值, 而Lys、Arg和Glu的含量则略低于平均值; 酸性和碱性酶中Ala、Glu、Leu、Asn、Arg、Ser和Thr的含量存在较大差异。在此基础上, 发展了一种加权氨基酸组成的方法对两种酶进行识别, 其自一致性检验的识别精度可达86.1%, 5倍交叉验证的精度为83.3%。建立了一种基于序列识别酸性和碱性酶的新方法。     

天花粉蛋白可以插入含有天然细胞膜非胞质侧组分的磷脂膜

天花粉蛋白发挥细胞毒性需要跨过脂膜双分子层进入细胞质,但是这一过程的机制尚不清楚。在内吞过程中,膜的拓扑方向始终保持不变,天花粉蛋白首先接触磷脂膜双分子层的非胞质一侧。利用混合磷脂制备的磷脂单分子层和磷脂双分子膜来模拟天然细胞膜的非胞质侧,检验了天花粉蛋白与该混合磷脂膜问的相互作用。结果表明,在37℃、酸性pH下,天花粉蛋白对含有天然细胞膜非胞质侧组分的磷脂膜有较强的插膜能力;但在低温,如25℃、中性pH下,天花粉蛋白的插膜能力明显减弱。天花粉蛋白可以较深地插入混合磷脂膜双分子层中,使其色氨酸内源荧光被磷脂疏水尾链上的自旋基团淬灭。天花粉蛋白的插膜行为可以对磷脂膜产生瞬间的扰动,引起包裹的荧光染料泄漏。增加天花粉蛋白的浓度,可以促进天花粉蛋白与脂膜的相互作用。     

日本白鲫外周血细胞显微及亚显微结构的研究

用光镜和电镜观察了日本白鲫外周血细胞的形态结构和过氧化物酶、糖原在血细胞内的分布。在日本白鲫外周血中，可见到红细胞、淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞和血栓细胞，未发现酸性粒细胞和碱性粒细胞，描述了上述各种血细胞在光镜和电镜观察下的形态和细微结构。对过氧化物酶，中性粒细胞呈阳性反应，对ＰＡＳ处理，淋巴细胞和中性粒细胞均呈阳性反应，中性粒细胞中有３种不同类型的特殊颗粒。     

4种两栖爬行动物血细胞的显微结构及细胞化学特征观察

光镜下两栖动物中华蟾蜍Bufo gargarizans和牛蛙Rana catesbeiana、爬行动物铜蜓蜥Sphenomorphus indicus和青海沙蜥Phrynocephalus vlangalii4种动物外周血中均可观察到红细胞、血栓细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞和嗜碱性粒细胞,中华蟾蜍和牛蛙的外周血中还观察到嗜酸性粒细胞。细胞化学染色显示:脂类存在于中华蟾蜍和牛蛙的单核细胞和粒细胞中,2种爬行动物的血细胞中未发现脂类。4种动物的血细胞中均未检测到碱性磷酸酶,但均检测到酸性磷酸酶,在中华蟾蜍和牛蛙血细胞中含量最多。过氧化物酶存在除青海沙蜥以外的3种动物的血细胞中,以在嗜中性粒细胞中居多;4种动物的外周血细胞中均检测到酸性-α-醋酸萘酯酶。     

天花粉蛋白引产原理的探讨

天花粉粗提物是从葫芦科植物栝楼的根提取出的中期引产药物,其纯化的引产有效成分为分子量约18,000的碱性蛋白质,称为“天花粉蛋白”。经鉴定对中期妊娠有很好的引产效果。同时,对宫外孕、葡萄胎、恶性葡萄胎有独特的疗效,对绒毛膜上皮癌也有一定的疗效, 根据对天花粉蛋白的原初作用部位,胎盘和离体培养的人滋养层细胞的形态和功能损伤,以及抑制前列腺素合成对天花粉蛋白引产的影响等方面的研究结果,互相印证,初步阐明了天花粉蛋白引产作用原理:(1)天花粉蛋白直接作用于胎盘的滋养层细胞,并有一定的细胞专一性:(2)天花粉蛋白能选择地使胎盘绒毛合体滋养层细胞变性坏死,解体的细胞碎片留在血窦中,引起凝血,造成循环障碍和进一步的大量组织坏死,胎盘绒毛坏死是原发的,循环障碍是继发的:(3)胎盘绒毛的损伤反映在功能方面,HCG和甾体激素迅速下降到先兆流产的临界水平以下。由于胎盘形态和功能严重损伤的结果,破坏了母体和胎儿之间的内分泌关系和代谢物的交换,并假定可能通过尚未弄清楚的机制,引起前列腺素合成的增加,发动宫缩而导致流产。总之,天花粉蛋白是从中草药发掘出来的一个植物蛋白性的中期引产和抗增生性滋养层细胞疾病的药物。天花粉蛋白引产作用原理的初步阐明,在实践上为提高和扩大天花粉蛋白的     

吞噬细胞和巨噬细胞

吞噬细胞和巨噬细胞的形态结构、生理特性和功能特点即有区别又有联系。 (一)从形态结构上来看吞噬细胞主要是指中性粒细胞和单核细胞。中性粒细胞呈圆形,直径为10-12μm。染色质呈块状。核一般分为2-5叶,小叶之间由染色质细丝相连。质中有大量染成红紫色的细小颗粒含酸性水解酶、过氧化物酶、溶菌酶、酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、氨基肽酶等。单核细胞呈圆形,体积大,直径约为14-20μm,核不分叶,呈肾形或马蹄形,染色质呈细颗粒网状。细胞质中常见细小的颗粒,内含过氧化物酶、酸性磷酸酶、溶菌酶等。巨噬细胞数量多,分布广,细胞形状不规则,体积较大,直径达50-80μm。在静止状态下,细胞呈圆或卵圆     

重金属镉对鲫鱼碱性磷酸酶和酸性磷酸酶活性的影响

研究了重金属镉对鲫鱼肠、肝胰脏、鳃组织碱性磷酸酶和酸性磷酸酶活性的影响。结果表明,在0.2、0.4、0.8mg/L镉浓度条件下静态染毒12h、24h、48h、96h后,鲫鱼肠、鳃组织中碱性磷酸酶(AKP)和酸性磷酸酶(ACP)的活性降低,肝和胰脏的碱性磷酸酶活性没有明显变化,其酸性磷酸酶活性则升高。     

凡纳滨对虾虾头内源性蛋白酶同源性分析

以凡纳滨对虾 (Litopenaeus vannamei shrimp) 虾头为原料,采用Q- Sepharose F F和Sephadex G-150对虾头内源碱性蛋白酶进行了纯化,通过SDS-PAGE测定分子量为79.95 kD|采用DEAE-Sepharose F.F和Sephadex G-100对内源酸性蛋白酶进行了纯化,通过SDS-PAGE测定分子量为27.45 kD. 利用HPLC-ESI-MS/MS对虾头内源碱性和酸性蛋白酶同源性进行了初步分析,将检测到内源性蛋白酶的部分氨基酸序列分别与不同物种的胰蛋白酶和胃蛋白酶氨基酸序列于Vector NTI suite 8.0软件上进行序列比对. 结果表明,内源性碱性蛋白酶与猪胰蛋白酶具有很高的同源性,均含有氨基酸序列LSSPATLNSRVATVSLPR|内源性酸性蛋白酶与非洲蟾蜍胃亚蛋白酶具有很高的同源性,均含有氨基酸序列EFGLSETEPGTNF.     

棕色固氮菌固氮酶铁蛋白的提纯及其某些特性的研究

用DEAE-纤维素和凝胶过滤法,可将棕色固氮菌固氮酶铁蛋白组分提纯43倍,比活性述512毫微克分子NH3／毫克蛋白·分。用聚丙烯酰胺凝胶电泳检定,呈均一状态,不含色氨酸、钼。每分子铁蛋白含3．89个原子Fe,分子量约64,000。氨基酸组分分析结果表明,铁蛋白中酸性氨基酸含量为碱性氨基酸含量的一倍。在380—650毫微米区内有宽的吸收带,但无明显吸收峰。     

长薄鳅外周血细胞的显微结构和细胞化学特征研究

长薄鳅外周血细胞可分为红细胞、中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞和血栓细胞.在数量上,中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞和血栓细胞占白细胞总数的百分比分别是17.06%、5.83%、28.16%和48.94%.细胞化学染色显示所有白细胞均含有糖原物质,所有红细胞均不含酸性磷酸酶,中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞和血栓细胞均含有酸性磷酸酶.非特异件酯酶染色显示单核细胞呈阳性反应,中性粒细胞、淋巴细胞和血栓细胞均为部分呈阳性反应.所有细胞的碱性磷酸酶、过氧化物酶、苏丹黑显色反应均呈阴性.     

信息库

1.黄原胶提纯的新方法 野油菜黄单胞菌发酵生产的黄原胶发酵液,首先进行加热处理,随后用溶菌酶再用碱性蛋白酶处理,溶解残余的细胞(或先用碱性蛋白酶再用溶菌酶处理)。然后从处理过的发酵液中回收黄原胶。     

沙雷氏菌(Serratia marcescens)Yj1的分离鉴定及菌体有机磷降解酶的分离纯化

从大豆土壤中分离纯化得到一株具有卵磷脂和乐果降解能力的菌株Yj1,对该菌株进行鉴定、生长条件优化、酶活性鉴定以及有机磷降解酶的分离纯化。结果表明,Yj1与Serratia marcescens WW4(CP003959.1)的16S r DNA相似度为99%。正交试验对所需培养基进行优化,得到该菌株的最佳生长条件为甘露糖、蛋白胨和p H 8的组合。Yj1菌株在两种磷源条件下,菌株生长量均很低,但72 h内以大豆卵磷脂为磷源时的菌体生长情况优于乐果。以大豆卵磷脂为磷源时酸性磷酸酶、碱性磷酸酶与有机磷降解酶活性明显高于以乐果为磷源时的酶活,且72 h内碱性磷酸酶活性一直都高于酸性磷酸酶和有机磷降解酶。硫酸铵沉淀法结合阳离子交换层析成功从Yj1菌体中分离纯化了有机磷降解酶,SDS-PAGE结果显示纯化的蛋白为单一条带。且阳离子交换层析的提纯倍数是硫酸氨沉淀的5.303倍,硫酸氨沉淀为粗酶的1.416倍。     

天花粉凝集素对红细胞补体敏感溶血作用的影响

被激活的补体与红细胞作用产生溶血,补体C_3与其在红细胞膜上的受体反应,是红细胞产生溶血的关键步骤。Mussel提纯了红细胞膜C_3受体,并鉴定其为糖蛋白。近年来,许多人对C_3的组成进行了研究,证明C_3是糖蛋白,推测C_3与红细胞膜上的C_3受体反应时,糖基起主要作用。我们用专一与半乳糖结合的天花粉凝集素与人工补体敏感的红细胞保温,可以降低溶血,同时进一步探讨半乳糖在补体溶血反应中的作用。一材料与方法 1.天花粉凝集素的制备取Sepharose 6B100ml以0.2N HCl浸泡12小时后,换0.02NHCl,55℃,保温4小时,用蒸馏水洗去酸,装柱