重楼属两种植物小孢子和雄配子体的发育

重楼属两种植物(Paris axialis and Paris polyphylla var.yunnanensis)小孢子发生和雄配子体形成的过程及方式相同。小孢子母细胞减数分裂时胞质分裂为连续型;雄配子体为二胞型;药壁由五层细胞组成。绒毡层属腺质型。五指莲花粉群体中异常花粉发生的频率高于滇重楼,这或许与五指莲细胞内的超数染色体以及相应的减数分裂异常有一定相关性。     

重楼属植物的免疫血清学研究

以海南重楼(Paris dunniana),花叶重楼(P.marmorata),多叶重楼(P.polyphylla),凌云重楼(P.cronquistii),五指莲(P.axialis),滇重楼(Paris polyphylla var.yunnanensis)等六种重楼属植物的根茎为材料,提取分离其球蛋白组份作为抗原,免疫家兔得到相应的抗血清。通过免疫双扩散,聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫电泳、免疫吸收试验以及酶标免疫等方法,研究了重楼属上述六个种和变种的血清学行为以及他们之间的相互关系。在此基础上,用不加权算术平均对群法(UPGMA)经成聚运算,得到基于平均吸收相似系数(Sabs.mean.)和Jaccard's结合系数的两种表相图,这两种表相图的结果是一致的。花叶重楼与多叶重楼有较大的血清反应相似性,五指莲与滇重楼有最大的血清反应相似性。多型种P.polyphylla在形态上的较大变异与血清反应分析的结果是一致的,而且血清反应相似性分析支持了从形态分析得出的假设:Paris dunniana在重楼属的系统发生中是一比较原始的种。     

重楼属二新种

五指莲重楼 新种 图1 五指(子)莲(云南彝良)、绥江);小重楼(四川荥经),九道箍(江津),铁灯台(峨眉)。 Paris axialis H.Li sp.nov. Species habitu affinis P.fargesii Fr.sed ovario 4—6-lopculari placentisaxilibus,rhizomate saepissime ramoso,perianthii segmentis interioribus longio-ribus 5.5—6cm longis,exteriora multo superantibus,staminibus numero segmen-tis,exterioribus triplo aequalibus,patentibus,longioribus quam pistillo,ad 1.3     

湖南重楼属植物小志

通过多年的调查、标本采集和分类研究,初步查明湖南产重楼属植物5种、6变种和1变型。其中有2种（凌云重楼Paris cronquistii,北重楼Paris verticillata)、3变种（滇重楼Paris polyphylla var.yunnanensis,卵叶重楼Paris delavayi var.petiolata,长药隔重楼Paris polyphylla var.pseudothibetica)和1变型（宽叶重楼Paris polyphlla var.stenophylla f.latifolia)为湖南新纪录。同时,还记录了各种、变种和变型的简要特点、分布和生境,并列出了它们的检索表。     

重楼属植物引种栽培的研究 Ⅱ.滇重楼的育苗试验

滇重楼〔Paris polyphylla var.yunnanensis(Fr.)Hand-Mazz.〕的种子发芽试验表明滇重楼种子有双重休眠期:种子需通过一段低温时期使胚完成后熟;种子萌发后,胚芽再需要一段低温时期使胚轴完成后熟才能出土成苗。本文对滇重楼种子的种源、采种期、播种期、播种材料及其育苗措施等进行了有关试验,现报道如下。     

重楼属和延龄草核型的一致性

本文报道的重楼属3个种和变种与延龄草的核型基本一致,表明它们之间的亲缘关系很近,其核型简式为:延龄草(T. tschonoskii)2n=10=4m 2m(SAT) 2st(SAT) 2t(SAT) 1B;五指莲(Paris axialis)2n=10=6m 2t 2t(SAT) 2B;狭叶重楼(P. polyphylla var. stenophylla)2n=10=2m(SAT) 4m 2st 2t;小重楼(P.polyphylla var.minora)2n=10=4m 2sm 4t.     

四川重楼属植物2新记录变种

报道了四川重楼属植物2新分布变种,分别是宽瓣球药隔重楼(Paris fargesii var. latipetala H. Li et V. G. Soukup)和红果五指莲(Paris axialis H. Li var. rubra H. H. Zhou, K. Y. Wu et R. Tao)。其中红果五指莲为贵州特有类群,且为孤点分布。四川新分布的发现对于重楼属植物的系统分类和迁徙演化研究具有重要意义。     

重楼属两个新种的染色体组型分析

五指莲(Paris axialis H.Li)和绿劝花叶重楼(Paris luquaensis H.Li)是新近发现的两个重楼属新种,分布于云南奕良和绿劝。这两个新种分别属重楼属的两个亚属,前者属中轴亚属,后者属侧膜亚属。这两个种的染色体组型结构与国内外已报道过的重楼属一些种的结构大体相似。五指莲是由3对中部着丝点型和两对端着丝点型的染色体组成;绿劝花叶重楼是由3对中部着丝点型、1对近中着丝点型和1对端着丝点型的染色体组成,这两个种的组型结构存在着明显差异。现将这两个新种的染色体组型报道如下。     

重楼属系统发育探讨

重楼属是延龄草科一个特征鲜明的属,共约17—18种,分布于欧洲和亚洲,以中国为分布中心。在区别重楼属下各级类群时,最为有效的指标为:1.花基数(3—)4—10,花辫或萼片数与心皮数目相同;2.雄蕊2—6轮,其数目为心皮数目(或萼片数,或花瓣数)的2—6倍;3.子房1室具(3—)4—10个侧膜胎座或数室而具中轴胎座,果为开裂的蒴果或不开裂的浆果;4.种子具多汁的假种皮、具不完全的假种皮或无假种皮;5.根状茎粗壮或细长匍匐。根据属内系统发育的趋势,可以确认:海南重楼Paris dunniana Levl.具粗厚根状茎、雄蕊4—6轮、子房1室具侧膜胎座、蒴果开裂、种子具完全的假种皮,是本属最原始的1个种。根据上述指标,本属划分为2个亚属7个组,其系统顺序如下:A.侧膜亚属subgen.Daiswa(Raf.)H.Li:1.海南组 sect.Dunniana H.Li;2.蚤休组 sect.Daiswa(Raf.)H.Li;3.花叶组sect.Marmorata H.Li;4.球药隔组sect.Fargesiana H.Li;B.中轴亚属sebgen Paris:5.五指莲组sect.Axiparis H.Li;6.日本重楼组sect.Kinugasa(Tatewaki et Suto)Hara;7.北重楼组sect.Paris。     

滇重楼的内生真菌及真菌中甾体化合物的分析

从采自云南的滇重楼(Paris polyphylla var.yunnanensis)根状茎韧皮部、木质部和种子中分离出50株内生真菌,其中从根状茎的韧皮部中分离出内生真菌最多。建立了甾体类化合物的检测和分析方法。检测到32株内生真菌的发酵培养物中含有甾体化合物,其中5株内生真菌的发酵培养物中甾体化合物的产率超过了50mg／L。     

滇重楼寄生菌的研究

从滇重楼(Paris polyphylla var.yunnanensis)地下茎中分离和鉴定出两种细菌——蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)和产碱假单胞菌(Pseudomonas alcaligenes),以及三种真菌——黑团孢霉(Periconia sp.)、白色厚顶孢霉(Pachnocybe albida)和重楼索霉(Hormomyces paridiphilus)。对蜡状芽孢杆菌、产碱假单胞菌和重楼索霉进行了液体培养并测定了胞外多糖含量,结果表明重楼索霉可分泌大量胞外多糖,这可能是导致滇重楼地下茎胶质化和多糖含量增加的原因。     

接种不同AM真菌对滇重楼幼苗功能基因表达的影响

为探究接种不同外源性从枝菌根(Arbuscular mycorrhizae,AM)真菌对滇重楼幼苗基因表达的影响,本研究以灭菌土壤为生长基质,将滇重楼(Paris polyphylla var. yunnanensis)新鲜种子与28种AM真菌于室温盆栽条件下共培养,采用实时荧光定量PCR的方法检测鲨烯环氧酶基因(Squalene epoxidase,SE)、共生受体类似激酶基因(Symbiosis-receptor-like kinase,SYMRK)、产生钙离子振荡的通道蛋白基因(Doesn’t making fections 1,DMI1)、钙/钙调依赖性蛋白激酶基因(Calcium/calmodulin-dependent protein kinase,CCa MK)4个功能基因在滇重楼幼苗的差异表达情况。结果表明:28株AM菌株可不同程度的影响SE、SYMRK、DMI1、CCa MK 4个功能基因的表达,其中薄壁两性囊霉(Ambisporaleptoticha,Ale)和崔氏原囊霉(Archaeospora trappei,Atr)可以显著增加4个功能基因的表达量。隐类球囊霉(Paraglo-mus occultum,Po)和透明盾巨孢囊霉(Scutellospora pellucida,Spe)可以增加SE、SYMRK的表达,细凹无梗囊霉(Acau-lospora scrobiculata,Asc),亮色盾巨孢囊霉(Racocetra fulgida,Rfu),哥伦比亚内养囊霉(Entrophospora colombiana,Ec),明球囊霉(Rhizophagus clarus,Rcl),根内球囊霉(Rhizophagus intraradices,Rin)可以增加DMI1的表达。综上所述,接种的28株AM真菌菌株中Ale和Atr能显著的提高4种功能基因的表达,结合前期与滇重楼无菌播种幼苗进行共生培养分析AM真菌对种子萌发及幼苗化学成分的影响,推测这两株菌可望能作为培育滇重楼菌根化苗的理想菌株,人工接种AM真菌可为保护和提高滇重楼开辟了一条新的途径。     

滇重楼和毛重楼花粉活力和柱头可授性的研究

用TTC法测定了滇重楼和毛重楼花粉的活力,用联苯胺—过氧化氢法测定了其柱头的可授性。结果表明滇重楼的花粉活力在散粉后第1天活力较高以后则逐渐下降,在第2天和第19天花粉活力则急剧下降,但能维持20～23d,在整个花期中基本都具有活力。毛重楼的花粉寿命约为4d,第2天花粉活力达到最大值,第3天后花粉活力急剧下降,总体活力较低。滇重楼和毛重楼的柱头在整个花期中几乎都具可授性,但滇重楼在11～13d时柱头可授性最强,毛重楼在第5天可授性最强。两种重楼植物花粉活力较高的时期与柱头可授性较强的时期不一致,但柱头可授性较强的时间与分泌黏液较多的时间基本一致。     

多叶重楼遗传多样性的ISSR分析

采用ISSR分子标记对多叶重楼种下3个变种的8个居群共208份样品的遗传多样性进行了分析。l4条引物共检测到251个清晰的扩增位点,其中多态位点235个。在物种水平上,多态位点百分率(PPB)达93.63%,Nei′s基因多样性指数(HE)为0.2204、Shannon′s信息指数(HO)为0.3532。在居群水平上,多态位点百分率(PPB)为50.45%,Nei′s基因多样性指数(HE)为0.1405,Shannon′s信息指数(HO)为0.2194,这些均表明多叶重楼的遗传多样性水平较高。此外,还用NTSYS软件对样品进行了UPGMA聚类分析,结果显示滇重楼的6个居群聚为一支,滇重楼与狭叶重楼有较近的亲缘关系,而与长药隔重楼之间的遗传分化较大。本研究提出了合理保护重楼植物资源的若干措施,为进一步开展滇重楼优质种质引种驯化,实现种质资源多样性的合理保护和可持续利用提供参考。     

国产大苞姜属和苞叶姜属种子解剖学特征及其系统学意义

黄花大苞姜和苞叶姜分别是大苞姜属和苞叶姜属在中国分布的唯一代表。黄花大苞姜种子椭圆形,具表皮毛,无假种皮;苞叶姜种子卵圆形,无毛,假种皮盘状。二者的种子均包含种皮、外胚乳、内胚乳与胚四部分。种皮均可分为外种皮、中种皮与内种皮,且中种皮包括下皮层、半透明细胞层与色素层。合点区内种皮均出现缺口,缺口间充满合点区色素细胞群。苞叶姜种皮有７～９层细胞,其中色素层３～５层细胞,而黄花大苞姜仅有５层,各部分均只有１层细胞,是迄今研究过的姜科植物中种皮细胞层数最少的。在珠孔区,苞叶姜具明显的柄状结构,并有珠孔领和孔盖的分化;而黄花大苞姜柄状结构短,且不明显,无珠孔领。因此,种子解剖学支持将苞叶姜从大苞姜属分出并提升为属。同时,根据姜目较原始类群的种子没有珠孔领分化,推测黄花大苞姜可能保留了姜科某些较原始的特征．     

重楼中一株产纤维素酶内生真菌的分离及鉴定

从重楼根茎中分离、鉴定具有产纤维素酶活性的内生真菌.采用表面消毒法从重楼块茎中分离内生真菌;用纤维素酶活性CMC平板检测分离菌株的产纤维素酶活性;对高产菌株进行形态学观察和分子生物学测序鉴定;探究影响纤维素酶活力的因素;利用平板法检测该株菌产其他胞外水解酶的活性.从3个来源的重楼中分离出41株内生真菌,通过平板检测发现...     

多叶重楼遗传多样性的RAPD分析

应用RAPD技术检测了多叶重楼(Paris polyphyfzo)2个变种4个居群的遗传多样性,并与1个凌云重楼(P．cronquistii)居群进行了比较。选择的16个随机引物在5个居群中共检测到246个多态位点。在居群水平上,滇重楼2个居群的多态位点百分比(PP鳓分别为57．43％和54．67%,Shannon指数分别为0．3080和0．2830;七叶一枝花2个居群的PPB分别为56．33％和57．75%,Shannon指数分别为0、3080和0．3293。在变种水平上,滇重楼的PPB为75．14％,Shannon指数为0．3922,遗传分化系数(Gst)为0．3085;七叶一枝花的PPB为80．31％,Shannon指数为0．3992,遗传分化系数(Gst)为0．3726;在种的水平PPB达92．05%,遗传分化系数Gst达0．5151。聚类分析显示滇重楼和七叶一枝花有较近的亲缘关系,而与凌云重楼遗传距离较远。此结果从分子水平上支持了过去将滇重楼和七叶一枝花划分为1个种下2个变种的形态分类观点。     

滇重楼可持续采收方法初探

滇重楼是云南传统的道地药材。由于种苗繁育困难和生长周期长,重楼的推广种植多年来未能取得突破。滇重楼的"多年栽培,分期采收"技术是将滇重楼根茎按用途分为药用部分与种苗部分,采收时,仅采收药用部分,种苗部分(带顶芽的根茎)继续生长发育,而不是将整个根茎全部采收作为商品药材。通过考察滇重楼须根比率的月度变化规律及3年的根茎生长量,进行采收时间和经济效益分析。结果表明:实施滇重楼"多年栽培,分期采收"技术间隔时间以3年为宜,每年每公顷收益为11.25万～33.0万元,采收时间以12月至翌年3月份为宜。     

蚤休、重楼和王孙

经过历史考证,作者确认:首载于《神农本草经》的蚤休为重楼属的Paris polyphyllaSmith var. chinensis (Fr.)Hara;首载于《滇南本草》中的重楼为重楼属的Paris polyphyllaSmith var. yunnanensis (Fr.) Hand. -Mazz.;《植物名实图考》中的王孙则是三白草科的三白草Saururus chinensis (Lour.) Bail.