PPAR??激动剂罗格列酮对人乳腺癌细胞生长 抑制及诱导凋亡作用研究

目的:观察氧化酶体激活物增殖受体(PPARγ)激动剂罗格列酮(ROZ)在体外激活PPARγ后对MCF-7细胞的生长抑制及诱导凋亡作用。方法:MTT法检测ROZ对MCF-7细胞的生长抑制作用;集落形成实验观察ROZ对MCF-7细胞集落形成的影响;不同浓度ROZ作用72h,Hoechst33342染色观察MCF-7细胞的形态变化,流式细胞光度分析术(FCM)检测凋亡细胞百分率以及ROZ对细胞周期的影响;Western blot方法检测ROZ对MCF-7细胞Bcl-2、Caspase-3表达的影响。结果:ROZ可呈剂量依赖性抑制MCF-7细胞的生长及集落形成。ROZ浓度为6×10-5M和3×10-4M时则G1期细胞数明显增加,S期相应减少。Hoechst33342染色经ROZ处理的肿瘤细胞染色质呈颗粒状,且有凋亡小体出现。FCM检测结果显示,ROZ作用72h凋亡细胞数达22.05%。Western blot提示ROZ可抑制Bcl-2表达,促进Caspase3表达。结论:ROZ在体外可抑制MCF-7细胞的增殖并诱导其凋亡,这可能与其抑制Bcl-2表达、促进caspase3表达有关。提示ROZ有望成为乳腺癌治疗药或肿瘤治疗的辅助用药,PPARγ有潜力成为肿瘤治疗的新靶点。     

抑制JNK通路对胃癌细胞SGC7901增殖、凋亡、迁移和周期的影响

探讨JNK通路抑制剂SP600125对胃癌细胞SGC7901增殖、凋亡、迁移和周期的影响及其机制。以胃癌细胞SGC7901为研究对象,实验分为空白对照组及药物处理组,采用CCK-8法检测不同浓度及不同作用时间SP600125对SGC7901增殖活性的影响,筛选出最佳作用时间与浓度用于后续实验。通过流式细胞术检测SP600125对SGC7901凋亡和周期的影响。Transwell迁移实验检测其对SGC7901迁移能力的影响。Western blotting检测SP600125作用后各组细胞GM130、JNK、p-JNK、c-jun、cleaved caspase-3、bcl-2、MMP-7蛋白水平的变化。研究表明,与空白对照组相比,10μmol/L、20μmol/L、30μmol/L、40μmol/L、50μmol/L浓度均能使SGC7901增殖活性降低,且在40μmol/L水平作用24 h其增殖抑制率最高(p0.05)。在此水平可使细胞凋亡率明显增加(p0.001)。与空白对照组相比,药物处理组细胞处于G2/M期的比例显著增加(p0.01),处于G0/G1期比例减少(p0.01),S期无明显变化,细胞迁移能力也明显下降(p0.01)。Western blotting显示药物处理组与空白对照组相比,蛋白GM130(p0.01)、JNK(p0.01)、P-JNK(p0.01)、c-jun(p0.01)、BCL-2(p0.01)、MMP-7(p0.05)的表达明显下降,cleaved caspase-3表达升高(p0.01)。以上研究表明JNK通路抑制剂SP600125可抑制胃癌细胞SGC7901增殖活性,促进其凋亡,使其周期阻滞于G2/M期,抑制胃癌细胞迁移能力,这可能与其抑制GM130、c-jun、MMP-7等蛋白的表达有关。     

PPARγ激动剂罗格列酮诱导人前列腺癌细胞系LNCAP凋亡的作用

目的:探讨罗格列酮(ROZ)对体外培养细胞系LNCAP增殖及凋亡的作用.方法:20、50、100 μmol/LROZ作用LNCAP细胞24 h、48 h、72 h后,MTT法检测ROZ对LNCAP细胞生长的影响.采用末端脱氧核苷酸转移酶原位标记(TUNEL法)和流式细胞术检测细胞凋亡情况.Western Blot检测LNCAP细胞中Casepase-3表达水平的变化.结果:ROZ(20μmol/L至100μmol/L)对前列腺癌细胞有显著的增殖抑制作用,以100μmol/L浓度最为明显.ROZ(100μmol/L)作用72h后最高增殖抑制率达78.58%.流式细胞仪检测结果显示,LNCAP细胞凋亡数目随药物浓度的增加呈递增趋势;100μmol/LROZ作用72h后凋亡细胞数达48.11%.与此一致,TUNEL染色阳性细胞数目在ROZ处理组显著增多,Western Blot检测显示,ROZ显著增加LNCAP细胞中Caspase-3蛋白表达水平.结论:ROZ在体外对前列腺癌细胞系LNCAP有明显的增殖抑制及促进凋亡作用,有望成为前列腺癌患者新的治疗方法.     

重组抗HER2 ScFv/tBid 基因的表达对SGC7901胃癌细胞的促凋亡作用

目的：构建重组抗HER2 ScFv/tBid载体并观察其对胃癌SGC7901细胞的促凋亡作用。 方法： 将重组抗HER2 ScFv/tBid基因克隆入真核表达载体pCMV中,转染SGC7901细胞,用RT-PCR方法检测目的基因在mRNA水平的表达,间接免疫荧光法检测目的蛋白表达和细胞形态学变化,通过细胞计数检测转染目的基因后对细胞生长的影响,通过检测细胞周期来观察其促凋亡作用。 结果：转染SGC7901细胞后,检测出目的蛋白的表达。细胞计数发现细胞的增殖被明显抑制。细胞周期分析有明显的凋亡峰出现,说明重组抗HER2 ScFv/tBid表达后有促凋亡作用。 结论： 重组抗HER2 ScFv/tBid基因可以在转染的SGC7901细胞中表达,并且可抑制转染细胞的生长,诱导细胞发生凋亡。     

一种新型PPARγ激动剂对人肾癌细胞增殖抑制的实验研究

目的:探讨新型过氧化物酶体增殖激活物受体(PPARγ)激动剂DH9对人肾癌细胞OS-RC-2的增殖抑制作用。方法:予以不同浓度的DH9及罗格列酮作用OS-RC-2细胞12 h、24 h和48 h,荧光素酶活性检测比较两种药物的PPARγ激动效应;MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞术观察细胞周期;Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞术测定细胞凋亡率;Western blot检测细胞内Bax及Bcl-2等蛋白的变化。结果:不同浓度的DH9与罗格列酮相比,对PPARγ的激动效应DH9明显低于罗格列酮,增殖抑制作用优于罗格列酮(P0.05),并呈现明显的浓度、时间依赖性;加入PPARγ抑制剂GW9662前后DH9的增殖抑制作用差异无统计学意义(P0.05);DH9作用细胞48小时后,G0/G1期细胞比例明显增加(P0.05),S期细胞明显减少(P0.05)。DH9可诱导细胞凋亡,伴随Bcl-2表达的减少以及Bax表达的增加。结论:OS-RC-2细胞中,DH9的增殖作用明显优于罗格列酮,且是通过PPARγ非依赖途径实现;DH9能将OS-RC-2细胞阻滞在G0/G1期,并通过影响Bcl-2和Bax蛋白表达促进细胞凋亡。     

大蒜素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡

该研究探讨了大蒜素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其作用机制。用不同浓度大蒜素作用人胃癌SGC-7901细胞48 h。通过MTT法检测细胞活性。光学、激光共聚焦显微镜下观察细胞形态变化。流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期。qRT-PCR和Western blot检测Bax、Bcl-2基因和蛋白的表达水平。结果显示,大蒜素处理细胞48 h的IC50值为78μg/m L,显微镜下可观察到明显的凋亡现象,细胞凋亡率为(61.15±3.77)%,细胞阻滞于G1期,Bcl-2基因和蛋白表达均下降,Bax基因和蛋白表达均增加(P0.05)。综上所述,在一定浓度范围内,大蒜素能抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,诱导细胞凋亡,呈剂量依赖性,并可上调Bax基因表达,下调Bcl-2基因表达。     

白花蛇舌草诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡

本研究以人胃癌SGC-7901细胞为实验对象,探讨白花蛇舌草对人胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响。使用台盼蓝拒染法检测人胃癌SGC-7901细胞活性,通过普通光学显微镜、荧光显微镜和共聚焦显微镜,观察细胞的形态结构变化,DNA laddy检测DNA片段,Western blotting检测bax和Bcl-2基因的表达,流式细胞术检测细胞周期及线粒体膜电位。结果显示,在一定浓度范围内白花蛇舌草能抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,呈时间和剂量依赖性。24 h、48 h和72 h的半数抑制浓度(IC50)分别为135.886μg/m L,45.84μg/m L和42.56μg/m L。显微镜下观察到细胞皱缩、核裂变、凋亡小体、细胞核裂解、染色质形态改变等现象,DNA出现片段化,细胞阻滞于G1期,Bax蛋白表达上调、Bcl-2的蛋白表达下调。上述表明白花蛇舌草能抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖并诱导其凋亡。     

姜半夏乙醇提取物对人胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察姜半夏乙醇提取物对人胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡的影响。方法：不同浓度姜半夏乙醇提取物（终浓度为1mg／ml,0．5mg／ml,0．25mg／ml,0．125mg／ml）处理SGC7901细胞后,倒置相差显微镜下观察细胞的形态学变化;通过甲基噻唑基四唑法检测细胞增殖状况、描绘生长曲线,使用紫外分光光度法观察药物干预后细胞ATP酶活力;AnnexinV．异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate,FITC）／碘化丙啶（propidium iodide,PI）双标记法流式细胞术检测姜半夏乙醇提取物对SGC7901细胞诱导凋亡的情况。结果：不同浓度姜半夏乙醇提取物均能不同程度地抑制人胃癌SGC7901细胞的增殖;在姜半夏乙醇提取物诱导细胞后细胞发生了边缘毛刺、体积缩小等形态学变化,同时可见细胞折光度和贴壁能力下降;Annexin V-F／TC／PI双标记法检测显示姜半夏乙醇提取物可诱导细胞发生凋亡;细胞总ATP酶活力在药物干预72小时后出现明显下降;并且随着药物浓度增加细胞凋亡率、细胞形态异常改变以及ATP酶活力抑制作用均呈上升趋势。结论：姜半夏乙醇提取物可抑制人胃癌SGC7901细胞的增殖,促进其凋亡,抑制细胞ATP酶活力。     

姜半夏乙醇提取物对人胃癌SGC7901 细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察姜半夏乙醇提取物对人胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡的影响。方法:不同浓度姜半夏乙醇提取物(终浓度为1mg/ml,0.5mg/ml,0.25mg/ml,0.125mg/ml)处理SGC7901细胞后,倒置相差显微镜下观察细胞的形态学变化;通过甲基噻唑基四唑法检测细胞增殖状况、描绘生长曲线,使用紫外分光光度法观察药物干预后细胞ATP酶活力;AnnexinV-异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)/碘化丙啶(propidium iodide,PI)双标记法流式细胞术检测姜半夏乙醇提取物对SGC7901细胞诱导凋亡的情况。结果:不同浓度姜半夏乙醇提取物均能不同程度地抑制人胃癌SGC7901细胞的增殖;在姜半夏乙醇提取物诱导细胞后细胞发生了边缘毛刺、体积缩小等形态学变化,同时可见细胞折光度和贴壁能力下降;AnnexinV-FITC/PI双标记法检测显示姜半夏乙醇提取物可诱导细胞发生凋亡;细胞总ATP酶活力在药物干预72小时后出现明显下降;并且随着药物浓度增加细胞凋亡率、细胞形态异常改变以及ATP酶活力抑制作用均呈上升趋势。结论:姜半夏乙醇提取物可抑制人胃癌SGC7901细胞的增殖,促进其凋亡,抑制细胞ATP酶活力。     

紫檀茋诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡

该文主要研究不同浓度紫檀对人胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响并分析细胞凋亡的可能机制。用不同浓度紫檀作用人胃癌SGC-7901细胞48 h后,通过MTT法检测细胞活性,荧光显微镜下观察细胞形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期,qRT-PCR和Western blot检测bax(B-cell lymphoma-2 associated X)及bcl-2(B-cell lymphoma-2)m RNA和蛋白表达水平。结果显示,紫檀处理细胞48 h的IC_(50)值为53.44μg/m L,显微镜下可观察到明显凋亡现象,随着药物浓度的增加早期凋亡和晚期凋亡所占百分比均不断增加,细胞阻滞于G1期,bcl-2基因表达下降,bax基因表达增加。综上所述,在一定浓度范围内,紫檀能抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,诱导细胞凋亡,呈剂量依赖性,并可上调bax基因表达,下调bcl-2基因表达。     

Intestinal metabolite compound K of panaxoside inhibits the growth of gastric carcinoma by augmenting apoptosis via Bid-mediated mitochondrial pathway

Compound K (20-O-β-D-glucopyranosyl-20(S)-protopanaxadiol, CK), an intestinal bacterial metabolite of panaxoside, has been shown to inhibit tumour growth in a variety of tumours. However, the mechanisms involved are largely unknown. We use human gastric carcinoma cell lines BGC823, SGC7901 and human gastric carcinoma xenograft in nude mice as models to study the mechanisms of CK in gastric cancers. We found that CK significantly inhibits the viabilities of BGC823 and SGC7901 cells in dose- and time-dependent manners. CK-induced BGC823 and SGC7901 cells apoptosis and cell cycle arrest in G2 phase by up-regulation of p21 and down-regulation of cdc2 and cyclin B1. Further studies show that CK induces apoptosis in BGC823 and SGC7901 cells mainly through mitochondria-mediated internal pathway, and that CK induces the translocation of nuclear Bid to mitochondria. Finally, we found that CK effectively inhibited the tumour formation of SGC7901 cells in nude mice. Our studies show that CK can inhibit the viabilities and induce apoptosis of human gastric carcinoma cells via Bid-mediated mitochondrial pathway.     

单克隆抗体MGd1对胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究不同浓度的MGd1对体外培养胃癌细胞SGC-7901增殖及凋亡的影响。方法：采用MTT法测定不同浓度MGd1对SGC-7901生长抑制作用;流式细胞术（FCM）进行细胞凋亡分析。激光共聚焦显微镜观察MGd1抗原（MGd1-Ag）的亚细胞定位。结果：MTT结果显示不同浓度的MGd1均对SGC-7901细胞产生明显的抑制效应（P=0.02）;流式细胞术分析发现MGd1可诱导SGC-7901发生凋亡并呈浓度和时间依赖性（P〈0.01）;共聚焦显微镜结果显示MGd1-Ag主要定位于细胞膜上。结论：以上结果证实胃癌特异性单抗MGd1可抑制SGC-7901的增殖并促进凋亡发生。它可能通过与细胞膜上抗原特异性结合,影响下游信号传导,从而发挥抑制效应。     

PXD101对口腔鳞癌HN-6细胞增殖及凋亡的初步研究

目的:本实验探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂PXD101对口腔鳞癌HN-6细胞的增殖、细胞凋亡及细胞周期的影响。方法:PXD101对口腔鳞癌HN-6细胞进行干预,倒置相差显微镜观察细胞形态学改变;MTT法检测PXD101对HN-6细胞的增殖影响;Annexin-V-FITC/PI双染流式细胞仪定量检测细胞凋亡;流式细胞仪分析细胞周期。结果:PXD101可明显抑制HN-6细胞的生长(P0.05),呈时间剂量依赖性。倒置相差显微镜下观察对照组细胞贴壁,形态呈多边形,生长活跃;实验组细胞脱壁,变小,细胞核皱缩。绘制细胞生长曲线示,随着PXD101的浓度和作用时间的增加,HN-6细胞生长明显受到抑制,各实验组细胞生长抑制率与对照组比较,P0.05差别有统计学意义。1μmol/LPXD101作用24 h,48 h细胞总凋亡率分别为20.9%、38.6%,与对照组相比有统计学意义(P0.05);HN-6细胞周期阻滞于G0/G1期,与对照组相比,P0.05差别有统计学意义。结论:PXD101体外实验能显著抑制人口腔舌癌HN-6的细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

蛇毒复合酶对人胃癌细胞的抑瘤研究

目的 观察蛇毒复合酶对人胃癌细胞SGC－7901的抑瘤作用及机理。方法 采用体外试验、流式细胞术和细胞形态学检查方法,观察人胃癌细胞的生长抑制率,以及细胞周期和细胞形态的变化。结果 蛇毒复合酶对人胃癌细胞有明显的抑瘤作用。24h抑瘤率达67．5％,接近5－Fu阳性对照组,并且具有明显的时效和量效关系。细胞镜检及涂片染色发现癌细胞胞膜破裂、胞质外溢、细胞坏死。流式细胞术检测蛇毒复合酶对S期细胞有明显杀伤作用,同时阻滞G0／G1期细胞进入S期。结论 蛇毒复合酶对人胃癌细胞具有一定体外抑瘤作用,其作用机理与直接破坏细胞胞膜和干扰细胞增殖周期有关。     

重组人类生长激素对胃癌细胞的体外增殖研究

目的：通过体外实验,研究重组人类生长激素对胃癌细胞的增殖的影响。方法：实验分为空白组,重组人类生长激素组,奥沙利铂组和重组人类生长激素＋奥沙利铂组。用不同浓度的重组人类生长激素处理SGC．7901细胞,采用MTT法和流式细胞仪检测人胃癌细胞株的细胞抑制率,细胞周期和DNA抑制率。结果：体外实验结果表明,重组人类生长激素对SGC．7901细胞株增殖没有明显的促进作用,重组人类生长激素组和空白组以及重组人类生长激素＋奥沙利铂组和奥沙利铂组之间没有统计显著性（P〉0．05）,细胞抑制率和停止生长的细胞在G0-G1期明显增加（P〈0．01）,同时重组人类生长激素＋奥沙利铂组和空白组以及奥沙利铂组在S期,细胞数依次下降,DNA抑制率依次增加。重组人类生长激素＋奥沙利铂组与奥沙利铂组相比,细胞抑制率有明显上升趋势。结论：体外实验表明,重组人类生长激素并不加快人类胃癌细胞的增殖,与抗癌药物一同使用时,有增加治疗功效的作用。     

慢病毒siRNA靶向干扰YAP基因胃癌细胞株的建立

目的：构建并鉴定YAP基因短发夹干扰RNA（shRNA）慢病毒载体,建立稳定干扰YAP基因表达的胃癌细胞株SGC7901。方法：荧光定量PCR检测YAP基因在多种胃癌细胞株中的表达情况。构建重组靶向YAP基因的shRNA慢病毒表达质粒PGC-shRNA-YAP,用脂质体转染的方法将载体导入胃癌细胞。经杀稻瘟菌素筛选后,建立稳定表达siRNA的细胞株。荧光定量PCR检测干扰效率。结果：在胃癌细胞株SGC7901中,YAP基因显示高表达。测序验证PGC-shRNA-YAP重组质粒构建成功。将重组质粒稳定转染入胃癌细胞株SGC7901后能明显抑制YAPmRNA表达水平。结论：成功构建了PGC-shRNA-YAP慢病毒重组质粒,建立了靶向稳定干扰YAP基因表达的siRNA胃癌细胞株SGC7901。     

芫菁斑蝥素对喉癌细胞和胃癌细胞的抑制作用

【目的】 研究提取自眼斑芫菁Mylabris cichorii (Linnaeus)体内的斑蝥素对人喉癌HEP-2细胞和人胃癌BGC-823细胞的抑制、以及对细胞周期分布的影响。【方法】 将斑蝥素作用于经体外培养的人喉癌HEP-2细胞和人胃癌BGC-823细胞, 采用MTT法进行体外细胞抑制实验, 测定斑蝥素对这2种癌细胞生长的抑制率与剂量效应;采用流式细胞术测定斑蝥素处理的人喉癌HEP-2细胞的细胞周期;并通过光学显微镜观察其细胞形态学改变。【结果】 斑蝥素浓度为1.28 μmol/L时, 对HEP-2细胞有显著抑制作用, 且随药物浓度升高其抑制作用增强, 呈剂量效应关系, 抑制中浓度为2.88 μmol/L;斑蝥素浓度为20.4 μmol/L时, 对BGC-823细胞有显著抑制作用, 且随药物浓度升高其抑制作用增强, 呈剂量效应关系, 抑制中浓度为54.85 μmol/L。用浓度1.44和2.88 μmol/L的斑蝥素处理HEP-2细胞24 h后, G2-M期分布从8.21%增加到22.29%, S期细胞分布从14.33%增加到21.61%, 且随药物浓度升高其阻滞作用增加, 呈剂量效应关系。G0-G1期细胞分布都有所降低, 从77.45%降低到56.10%, G0-G1期峰前无显著的亚二倍体峰出现, 说明斑蝥素未能够诱导HEP-2细胞发生凋亡。光镜检查显示：HEP-2细胞可出现细胞收缩、胞膜突出、核碎裂等现象。【结论】 斑蝥素对治疗喉癌的效果可能较为理想, 而对胃癌的作用则不明显。     

Melatonin inhibits cell growth and migration,but promotes apoptosis in gastric cancer cell line,SGC7901

Abstract

The pineal hormone, melatonin (MLT), has been shown to have therapeutic effects in patients with gastric cancer; however, the mechanisms for the anti-cancer effects are unknown. We investigated the effects of melatonin on cell proliferation, apoptosis, colony formation and cell migration in the gastric adenocarcinoma cell line, SGC7901, using MTT assay, Hoechst 33258 staining, flow cytometry, western blot, caspase-3 activity assay, soft agar colony formation assay, and scratch-wound assay. Our results showed that melatonin could inhibit cell proliferation, colony formation and migration efficiency, and it promoted apoptosis of SGC7901 cells. Our findings suggest that the anti-cancer effects of melatonin may be due to both inhibition of tumor cell proliferation and reduction of the metastatic potential of tumor cells.