~（31）P－NMR谱在人急性早幼粒白血病HL－60细胞分化代谢研究中的应用

ＨＬ－６０细胞是目前研究诱导分化药物的常用细胞株,应用核磁共振~（３１）Ｐ谱,观察ＨＬ－６０细胞经分化诱导剂全反式维甲酸和新维甲类化合物ＳＬＭ９１２３作用前后的代谢改变,发现分化后的细胞对ＡＴＰ能量的需求明显增高,膜磷脂的合成前体──磷酸单酯也有明显增加,另外还发现分化后的细胞内ｐＨ值有从偏碱性转为偏酸性的趋势,文中对这些改变的可能机制作了探讨。     

^31P—NMR谱在人急性早幼粒白血病HL—60细胞分化代谢研究中的应用

ＨＬ－６０细胞是目前研究诱导分化药物的常用细胞株，应用核磁共振＾３１Ｐ谱，观察ＨＬ－６０细胞经分化诱导剂全反式维甲酸和新维甲类化合物ＳＬＭ９１２３作用前后的代谢改变，发现分化后的细胞对ＡＴＰ能量的需求明显增高，膜磷脂的合成前体－磷酸单酯也有明显增加，另外还发现分化后的细胞内ｐＨ值有从偏碱性转为偏酸性的趋势，文中对这些改变的可能机制作了探讨。     

诱导的HL60细胞表面β1—4半乳糖基转移酶的研究

本文用荧光标记的受体底物〔Ｇｎβ１－２Ｍα１－６（Ｇｎβ１－２Ｍα１－３）Ｍβ１－４Ｇｎβ１－４（Ｆｕｃα１－６）Ｇｎ－ＰＡ〕,结合高效液相层析（ＨＰＬＣ）建立了细胞表面β１－４半乳糖基转移酶的活性检测方法。用这种方法研究ＨＬ６０细胞,发现不同的培养时间,其细胞表面的酶变化明显,在２４小时酶活性最高,此时细胞处在分裂间期。用佛波酯（ＰＭＡ）,视黄酸（ＲＡ）等细胞诱导分化剂处理ＨＬ６０细胞株时,发现其表面活性发生了明显的变化,ＰＭＡ诱导的细胞其表面酶活性在２４小时变化最大,升高到对照的１．３倍;而ＲＡ处理的细胞其表面酶活性在７２小时变化最大,升高到对照的１．７２倍。     

蛋白激酶C亚型在HL—60细胞诱导分化中的变化

用全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）或佛波酯（ＰＭＡ）处理人早幼粒白血病细胞（ＨＬ－６０）３天,用形态学,ＮＢＴ还原实验,特异性和非特异性酯酶测定,证明细胞分别向粒细胞或单核／巨噬细胞分化。通过免疫组化法观察了蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）α,βⅠ和βⅡ亚型在分化后的变化。结果显示,ＡＴＲＡ可引起ＨＬ－６０细胞ＰＫＣα,βⅠ和βⅡ的含量升高,分别为对照的５．０,２．８和４．２倍,并存在从胞膜向胞质转位。ＰＭＡ则使ＰＣ     

含人TNF—α,IL—2及NeoR基因多顺反子逆转录病毒载？…

利用脑炎心肌炎病毒和脊髓灰质灰病毒的内核糖体进行位点,连接人ＴＮＦ－α及ＩＬ－２ｃＤＮＡ和选择基因新霉素磷酸转移酶基因（ＮｅｏＲ）,使ＴＮＦ－α、ＩＬ－２及ＮｅｏＲ基因均受控于病毒毒ＬＴＲ启动子,将这３个基因转录至用一ｍＲＮＡ,从而构建成含人ＴＮＦ－α、ＩＬ－２及ＮｅｏＲ基因多顺反子逆转录病毒载体ｐＧＣＥＮ／ＴＲＩ。在ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ介导下将其导入包装细胞ＰＡ３１７,Ｇ４１８筛选得单克隆     

细胞诱导分化剂对HL60细胞β-1,4-半乳糖基转移酶活性的影响

用荧光标记的受体底物（Ｇｎβ１－２Ｍα１－６（Ｇｎβ１－２Ｍα１－３）Ｍβ１－４Ｇｎβ１－４（Ｆｕｃα１－６）Ｇｎ－ＰＡ）,结合高效液相层析（ＨＰＬＣ）建立了细胞β－１,４－半乳糖基转移酶的活性检测方法．研究了ＨＬ６０细胞在体外低血清培养后不同的时间其酶活性的变化,发现１２至２４ｈ酶活性达到一个高峰,为５０．１４ｐｍｏｌ／ｍｉｎ（１０６ｃｅｌ）,此时细胞处在分裂间期,其它各测定时间变化不大．用ＰＭＡ,ＲＡ等细胞诱导分化剂处理ＨＬ６０细胞株时,发现其活性发生了较明显的变化,ＰＭＡ诱导的细胞其酶活性在２４ｈ变化最大,升高到对照的１．３２倍;而ＲＡ处理的细胞其酶活性在７２ｈ变化最大,升高到对照的２．１５倍．     

人PSP94全长cDNA的获得及PSP94-TNF~Δ融合蛋白的构建

利用ＲＴ－ＰＣＲ从人肥大前列腺组织钓取９４个氨基酸的人前列腺分泌蛋白（ＰＳＰ９４）全长ｃＤＮＡ,序列分析结果与文献报道的完全一致．将ＰＳＰ９４成熟肽与人ＴＮＦα衍生物（ＴＮＦΔ）通过Ｌｉｎｋｅｒ－ＳＡＰＧＴＰ在基因水平上融合成５′ＰＳＰ９４－ＴＮＦΔ,融合基因ＤＮＡ序列分析结果与设计的相符合．５′ＰＳＰ９４－ＴＮＦΔ在大肠杆菌中表达产物分子量约为３１ｋＤ,表达量约占菌体总蛋白量的３５％．以Ｌ９２９细胞和人前列腺癌细胞株ＰＣ－３为靶细胞进行细胞毒分析结果表明,５′ＰＳＰ９４－ＴＮＦΔ融合蛋白既具有ＴＮＦ的细胞毒活性,又具有对前列腺癌细胞ＰＣ－３的杀伤作用     

TNF-α、IL-1β及LPS对血管平滑肌细胞一氧化氮合酶基因表达的影响及作用机制研究

通过ＲＮＡ印迹分析和亚硝酸盐含量测定检查ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β和ＬＰＳ对大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）基因表达及ＮＯ生成的影响．结果表明,ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β和ＬＰＳ均能显著诱导ＶＳＭＣｉＮＯＳ基因表达和促进ＮＯ生成,其作用强度与浓度和作用时间有关;双因素（ＴＮＦ－α＋ＬＰＳ,ＬＰＳ＋ＩＬ－１β）对诱导ｉＮＯＳ基因表达及ＮＯ生成产生协同作用．ＰｏｌｙｍｙｘｉｎＢ和地塞米松可部分抑制ＴＮＦ－α对ｉＮＯＳ基因表达的诱导作用及ＮＯ生成     

急性白血病细胞中抗凋亡蛋白bcl－2及其mRNA的表达

采用免疫组织化学与原位杂交方法检测了２５例急性髓系或淋巴系白血病骨髓活检组织及６种白血病细胞株中ｂｃｌ－２蛋白及其ｍＲＮＡ水平。结果２１例白血病标本中存在ｂｃｌ－２蛋白及其ｍＲＮＡ的一致性高表达;５种白血病细胞株（ＣＥＭ、Ｒａｊｉ、ＨＬ－６０、Ｕ９３７及Ｋ５６２）均能表达一定水平的ｂｃｌ－２蛋白及其ｍＲＮＡ（Ｍｏｌｔ－４例外）。提示ｂｃｌ－２基因的功能状态与淋巴造血系统肿瘤密切相关。     

TNF—α在PMA和IFN—γ诱导U937细胞生长和分化过程中的作用

本文报道了佛波酯（ＰＭＡ）和γ－干扰素（ＩＦＮ－γ）对Ｕ９３７细胞生长和分化的调控作用及其机制。ＰＭＡ和ＩＦＮ－γ能以剂量依赖的方式诱导Ｕ９３７细胞向成熟单核／巨噬细胞样细胞分化,同时抑制其细胞的生长。实验发现ＰＭＡ和ＩＦＮ－γ可诱导Ｕ９３７细胞表达ＴＮＦ－α特异性ｍＲＮＡ和蛋白质。Ｕ９３７细胞培养中加入特异性抗ＴＮＦ－α抗体可以抑制ＰＭＡ和ＩＦＮ－γ诱导Ｕ９３７细胞的分化和生长。这说明内源性的Ｔ     

r－干扰素对喉癌细胞系HEP－2HLA－DR抗原和增殖细胞核抗原表达的影响

本实验用人重组ｒ－干扰素（ｒｈｕ－ＩＦＮ）作用ＨＥＰ－２细胞后ＨＬＡ－ＤＲ抗原和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）表达的检测来探讨ｒ－干扰素对ＨＥＰ－２细胞ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达诱导作用及体外抗增殖活性。用单克隆抗体ＣＲ３／４３（抗ＨＬＡ－ＤＲ）和Ｋｉ－６７（抗ＰＣＮＡ）。以链霉素一生物素技术（ＬＳＡＢ）检测ＨＥＰ－２细胞ＨＬＡ－ＤＲ抗原和ＰＣＮＡ表达,结果显示：ｒ－ＩＥＮ诱导ＨＬＡ－ＤＲ抗原和抑制ＰＣＮＡ表达其强弱与ｒ－ＩＦＮ剂量有关。资料提示：ｒ－ＩＦＮ不仅对ＨＥＰ－２细胞有细胞毒作用,同时能调节其细胞膜特性,因而在喉癌的治疗中是有效的。     

TNF—α—IL—1β及LPS对血管平滑肌细胞一氧化氮合酶基因表达的…

通过ＲＮＡ印迹分析和亚硝酸盐含量测定检查ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β和ＬＰＳ对大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）诱导型一氧化氮合酶基因表达及ＮＯ生成的影响,结果表明,ＴＮＦ－α、ＩＬ－１β和ＬＰＳ均能显诱导ＶＳＭＣｉＳ基因表达和促进ＮＯ生成,其作用强度与浓度和作用时间有关;双因素（ＴＮＦ－α＋ＬＰＳ,ＬＰＳ＋ＩＬ－１β）对诱导ｉＮＯＳ基因表达及ＮＯ生成产生协同作用,ＰｏｌｙｍｙｘｉｎＢ和地塞米松可部分凶制     

大豆C4途径与光系统Ⅱ光化学功能的相互关系

测定了不同发育时期大豆（Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ（Ｌ）Ｍｅｒｒ．）“黑农４１”叶片的４种Ｃ４酶（ＰＥＰＣａｓｅ（磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶）、ＮＡＤＰ－ＭＤＨ（ＮＡＤＰ苹果酸脱氢酶）、ＮＡＤＰ－ＭＥ（ＮＡＤＰ苹果酸酶）和ＰＰＤＫ（丙酮酸磷酸二激酶））活性、荧光动力学数值（Ｆｖ／Ｆｏ（ＰＳⅡ活性）、ｑＰ（光化学淬灭）、ｑＮ（非光化学淬灭、ΦＰＳⅡ（有效ＰＳⅡ光化学效率））和光合速率。结果表明在“黑农４１”     

老年大鼠单核／巨噬细胞分泌和表达肿瘤坏死因子增多

为研究老年时肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）分泌及表达的改变,在内毒素（ＬＰＳ）１．０μｇ／ｍｌ刺激大鼠单核／巨噬细胞后,用酶联免疫法（ＥＬＩＳＡ）测定培养液中ＴＮＦ－α含量,用半定量逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＫ）测定ＴＮＦ－αｍＲＮＡ。同时测定培养液中一氧化氮（ＮＯ）和前列腺素Ｉ２（ＰＧＩ２）的含量。结果显示：老年鼠ＴＮＦ－α分泌量及其ｍＲ－ＮＡ明显高于青年鼠。ＮＯ产量在老年鼠与青年鼠之间无明显差异。老年鼠ＰＧＩ２分泌明显低于青年鼠。由于ＰＧ能抑制ＴＮＦ－α释放,从而推测,ＰＧＩ２产生能力的降低可能是老年大鼠单核／巨噬细胞ＴＮＦ－α分泌量明显高于青年鼠的原因之一。     

甘油醛-3-磷酸脱氢酶与辅酶类似物ATP及底物磷酸结合特性的晶体学研究

气相扩散共晶生长法培养出Ｐ．ｖｅｒｓｉｃｏｌｏｒ龙虾肌ＡＴＰ－Ｄ－甘油醛－３－磷酸脱氢酶（ＡＴＰ－ＧＡＰＤＨ）的晶体。用同步辐射Ｘ光源－磷光储屏－Ｗｅｉｓｓｅｎｂｅｒｇ照相机系统收集了一套２．０分辨率的衍射数据。用同晶差值傅立叶法解析了其结构。精化后的结构模型最终Ｒ因子为０．１９７,与标准键长、键角的均方根偏差为０．０１６°和３．２０°。ＰｖＡＴＰ－ＧＡＰＤＨ结构总体上和Ｐｖａｐｏ－ＧＡＰＤＨ相似。ＡＴＰ分子的占有率较低,并表现出一定程度的无序性,提示ＡＴＰ与酶蛋白结合的稳定性较低,表明ＮＡＤ＋的尼克酰胺核苷部分与蛋白质分子的作用在辅酶与蛋白质的稳定结合中起关键作用。ＡＴＰ－ＧＡＰＤＨ中每个亚基只有一个磷酸结合位点（Ｐｉ）。认为无机磷酸结合位点Ｐｉ的形成不依赖于ＮＡＤ＋,而底物磷酸结合位点ＰＳ的形成则依赖于ＮＡＤ＋的存在。     

重组人粒系集落刺激因子（rhG—CSF）对白血病细胞HL—60生长 …

本文研究了ｒｈＧ－ＣＳＦ对人白血病细胞系ＨＬ－６０的作用。结果表明：ｒｈＧ－ＣＳＦ能够显著抑制ＨＬ－６０细胞生长和Ｃ－ｍｙｃ基因的表达,降低＾３Ｈ－ＴｄＲ的摄入。在含ｒｈＧ－ＣＳＦ的培养液中经过２－５天的培养,部分ＨＬ－６０细胞具备ＮＢＴ还原能力。这或许说明ｒｈＧ－ＣＳＦ能导致ＨＬ－６０细胞向成熟方向分化的结果。     

神经节苷脂GM_3对人白血病J6－2细胞磷脂酰胆碱代谢的影响

神经节苷脂ＧＭ３诱导人单核样白血病Ｊ６－２细胞沿单核／巨噬细胞途径分化．在ＧＭ３诱导分化同时,Ｊ６－２细胞磷脂代谢发生了显著变化．采用（（３２）Ｐ）Ｐｉ、［ＧＨ３－３Ｈ］胆碱和［ＣＨ３－３Ｈ］ＳＡＭ参入实验对ＧＭ３影响Ｊ６－２细胞ＰＣ代谢的机制进行了初步的探讨．ＧＭ３促进［（３２）Ｐ］Ｐｉ参入Ｊ６－２细胞ＰＣ;抑制［ＣＨ３－３Ｈ］胆碱参入ＰＣ及ＰＣ合成的前体磷酸胆碱及ＣＤＰ－胆碱;ＧＭ３促进［ＣＨ３－３Ｈ］ＳＡＭ参入ＰＣ,但抑制［ＣＨ３－３Ｈ］ＳＡＭ参入ＰＣ合成的前体胆碱、磷酸胆碱和ＣＤＰ－胆碱．上述结果提示,ＧＭ３抑制Ｊ６－２细胞ＰＣ合成的ＣＤＰ－胆碱途径,促进ＰＣ合成的ＰＥ甲基化途径．     

磷脂酶A2介导肿瘤坏死因子诱发的中性粒细胞趋化和粘附增强

肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）对外周中性粒细胞（ＰＭＮ）具有重要调节作用。本文采用生化及放射免疫技术,观察体外重组ＴＮＦ对ＰＭＮ趋化、粘附及血栓素Ｂ２（ＴＸＢ２）和前列环素（６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１ａ）释放的改变。ＴＮＦ（１００ｍｇ／ｍｌ）处理６０ｍｉｎ后,ＰＭＭ对白细胞趋化因子（ＦＭＬＰ）趋化和玻璃珠粘附性均显著增加,同时伴有ＴＸＢ２释放增多,６－Ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１ａ不变。这提示ＴＮＦ体外促ＰＭＭ趋化和粘     

组胺H_2受体激动剂4－甲基组胺及其拮抗剂雷尼替丁对HL－60白血病细胞增殖的作用

在ＨＬ－６０白血病细胞的体外培养中,组胺Ｈ＿２受体激动剂４－甲基组胺（１０￣（－８）－１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ）对ＨＬ－６０细胞的增殖具有轻微的抑制作用,而组胺Ｈ＿２受体拮抗剂雷尼替丁（１０￣（－８）－１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ）对ＨＬ－６０细胞的增殖具有较强的抑制作用。但用１０￣（－６）ｍｏｌ／Ｌ的雷尼替丁预处理ＨＬ－６０细胞则可部分地拮抗４－甲基组胺（１０￣（－８）－１０￣（－４）ｍｏｌ／Ｌ）对ＨＬ－６０白血病细胞的抑制作用。     

PAF对肺内小动脉平滑肌细胞TXA_2，PGI_2乃Ca~（2＋）－ATPase的影响

本工作采用分离培养家兔肺内小动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭＣｓ），观察了外源性血小板活化因子（ｐｌａｔｅｌｅｔａｃｔｉｖａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ，ＰＡＦ）、ＢＮ５２０２１（ＰＡＦ受体拮抗剂）、吲哚美辛、维拉帕米对ＰＡＳＭＣｓ产生血栓素Ａ_２（ＴｘＡ_２）、前列环素（ＰＧＩ_２）及对细胞膜Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰａｓｅ活力的影响。结果表明：（１）基础状态下ＰＡＳＭＣｓ存在花生四烯酸（ＡＡ）代谢。（２）外源性ＰＡＦ通过受体后途径激活环加氧酶促进ＡＡ代谢致ＴＸＡ_２及ＰＧＩ－２增加，ＴＸＡ_２／ＰＧＩ_２比值无明显变化。（３）外源性ＰＡＦ能直接抑制Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰａｓｅ活力。（４）维拉帕米可逆转ＰＡＦ抑制ＰＡＳＭＣｓ膜Ｃａ~（２＋）－ＡＴＰａｓｅ活力的效应。