人PSP94的分泌表达及其表达产物抗前列腺癌作用

将编码人 94个氨基酸的前列腺分泌蛋白 ( PSP94) c DNA与酵母整合载体 p PICZαA重组 ,构建的重组质粒线性化后转染酵母细胞 GS1 1 5,获得了 PSP94在酵母细胞中遗传性稳定表达酵母工程细胞 .诱导后的培养物中 ,rh PSP94表达量约为 0 .9mg/L,分子量约 1 6.5k D.培养上清经离子交换层析纯化后 ,目的蛋白的纯度为 92 % .体外在人前列腺癌细胞上活性分析表明 ,rh PSP94以1 0 0μg/L ,对该细胞的抑制率 2 0 .4% ;单纯新型 TNF,以 1 0 3 U/ml,抑制率 2 9.8% ;rh PSP94和新型 TNF以上述同样剂量联合应用 ,抑制率为 86.3% .提示 PSP94在体外对抗前列腺癌细胞有杀伤作用 ,但不明显 ;PSP94与新型 TNF联合应用 ,可使抑制率明显提高 ,可能 PSP94与新型 TNF有协同抗前列腺癌的作用 .     

PSP94融合蛋白在大肠杆菌中的表达及其抗前列腺癌活性分析

在从成年人正常前列腺组织中获得人９４个氨基酸的前列腺分泌蛋白（ＰＳＰ９４）ｃＤＮＡ基础上,利用ＰＬ表达系统,实现了人ＰＳＰ９４成熟肽Ｎ－末端带有１９个列源氨基酸的融合蛋白在大肠杆菌中的表达。目的蛋白在细胞中主要以包涵体形式存在。表达量约占菌体总蛋白的３０％,分子量约为１６．５ｋＤ。表达产物在人前列腺癌细胞ＰＣ－３上活性分析表明,该融合蛋白能明显抑制前列腺癌细胞的生长。     

人PSP94全长cDNA的获得及PSP94-TNF~Δ融合蛋白的构建

利用ＲＴ－ＰＣＲ从人肥大前列腺组织钓取９４个氨基酸的人前列腺分泌蛋白（ＰＳＰ９４）全长ｃＤＮＡ,序列分析结果与文献报道的完全一致．将ＰＳＰ９４成熟肽与人ＴＮＦα衍生物（ＴＮＦΔ）通过Ｌｉｎｋｅｒ－ＳＡＰＧＴＰ在基因水平上融合成５′ＰＳＰ９４－ＴＮＦΔ,融合基因ＤＮＡ序列分析结果与设计的相符合．５′ＰＳＰ９４－ＴＮＦΔ在大肠杆菌中表达产物分子量约为３１ｋＤ,表达量约占菌体总蛋白量的３５％．以Ｌ９２９细胞和人前列腺癌细胞株ＰＣ－３为靶细胞进行细胞毒分析结果表明,５′ＰＳＰ９４－ＴＮＦΔ融合蛋白既具有ＴＮＦ的细胞毒活性,又具有对前列腺癌细胞ＰＣ－３的杀伤作用     

PSP94融合蛋白在大肠杆菌中的表达及其抗前列腺癌活性分析

在从成年人正常前列腺组织中获得人９４个氨基酸的前列腺分泌蛋白（ＰＳＰ９４）ｃＤＮＡ基础上,利用ＰＬ表达系统,实现了人ＰＳＰ９４成熟肽Ｎ 末端带有１９个外源氨基酸的融合蛋白在大肠杆菌中的表达。目的蛋白在细胞中主要以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的３０％,分子量约为１６－５ｋＤ。表达产物在人前列腺癌细胞ＰＣ ３上活性分析表明,该融合蛋白能明显抑制前列腺癌细胞的生长。     

组蛋白变异体HIST2H2BE通过上调p 21表达诱导细胞衰老

已知组蛋白变异体在基因转录调控、DNA修复以及凋亡等过程中起着重要作用。但组蛋白变异体在细胞衰老中的作用尚不清楚。本研究证明,组蛋白变异体HIST2H2BE可上调p 21的表达,影响细胞的衰老进程。基因芯片、半定量RT-PCR以及Real-time PCR揭示,HIST2H2BE在衰老细胞中表达升高,且其表达具有衰老特异性。在年轻成纤维细胞中过表达HIST2H2BE,可显著减少EdU掺入细胞的百分率,升高细胞衰老标志物SA-β-gal活性以及p 21的表达,提示HIST2H2BE具有细胞衰老调节作用。此外,利用siRNA抑制p 21表达,可明显衰减HIST2H2BE活化SA-β-gal。以上结果显示,组蛋白变异体HIST2H2BE是一个重要的衰老调节蛋白质,其对细胞衰老的调节依赖于p 21。该研究结果为深入探讨染色质结构改变在细胞衰老中的作用提供了新线索。