诱导的HL60细胞表面β1—4半乳糖基转移酶的研究

本文用荧光标记的受体底物〔Ｇｎβ１－２Ｍα１－６（Ｇｎβ１－２Ｍα１－３）Ｍβ１－４Ｇｎβ１－４（Ｆｕｃα１－６）Ｇｎ－ＰＡ〕,结合高效液相层析（ＨＰＬＣ）建立了细胞表面β１－４半乳糖基转移酶的活性检测方法。用这种方法研究ＨＬ６０细胞,发现不同的培养时间,其细胞表面的酶变化明显,在２４小时酶活性最高,此时细胞处在分裂间期。用佛波酯（ＰＭＡ）,视黄酸（ＲＡ）等细胞诱导分化剂处理ＨＬ６０细胞株时,发现其表面活性发生了明显的变化,ＰＭＡ诱导的细胞其表面酶活性在２４小时变化最大,升高到对照的１．３倍;而ＲＡ处理的细胞其表面酶活性在７２小时变化最大,升高到对照的１．７２倍。     

绿盲蝽丝氨酸蛋白酶基因AlSP4的克隆及取食不同寄主植物后的表达谱分析

胰蛋白酶类和胰凝乳蛋白酶类丝氨酸蛋白酶是盲蝽科昆虫消化系统内重要的消化酶。为了更好地了解丝氨酸类蛋白酶在绿盲蝽Apolygus lucorum消化系统中的作用, 本研究首次克隆了绿盲蝽丝氨酸蛋白酶基因AlSP4 (GenBank登录号为JQ609682)。序列分析结果表明, 该基因开放阅读框长999 bp, 编码332个氨基酸, 预测分子量为36.84 kDa, 理论等电点为5.35, N末端疏水区包含有16个氨基酸组成的信号肽。蛋白特征分析表明, 该基因翻译后的蛋白质具有丝氨酸蛋白酶的典型特征, 即氨基酸序列中具有组氨酸(His)、 天门冬氨酸(Asp)以及丝氨酸(Ser)残基组成的酶活性催化中心三元件; 该基因翻译后还具有明显的胰蛋白酶前体的特征, 即此基因具有信号肽、 激活肽以及胰蛋白酶N末端保守的起始氨基酸序列(IVGG)。利用荧光定量PCR技术对绿盲蝽雌、 雄成虫取食不同寄主植物后AlSP4的表达谱进行分析, 结果表明: 相对于其他寄主植物, 雌成虫取食Bt棉后AlSP4的表达量最高, 并显著高于取食常规棉后的表达量(P＜0.01)。雄成虫取食茼蒿后AlSP4的表达量最高; 雄成虫取食Bt棉后, AlSP4的表达水平仅次于取食茼蒿后的表达量, 也显著高于取食常规棉后的表达量(P＜0.01)。由此可见, AlSP4是绿盲蝽取食Bt棉后的重要消化酶基因, 对绿盲蝽适应Bt棉取食具有重要作用。     

细胞诱导分化剂对HL60细胞β-1,4-半乳糖基转移酶活性的影响

用荧光标记的受体底物（Ｇｎβ１－２Ｍα１－６（Ｇｎβ１－２Ｍα１－３）Ｍβ１－４Ｇｎβ１－４（Ｆｕｃα１－６）Ｇｎ－ＰＡ）,结合高效液相层析（ＨＰＬＣ）建立了细胞β－１,４－半乳糖基转移酶的活性检测方法．研究了ＨＬ６０细胞在体外低血清培养后不同的时间其酶活性的变化,发现１２至２４ｈ酶活性达到一个高峰,为５０．１４ｐｍｏｌ／ｍｉｎ（１０６ｃｅｌ）,此时细胞处在分裂间期,其它各测定时间变化不大．用ＰＭＡ,ＲＡ等细胞诱导分化剂处理ＨＬ６０细胞株时,发现其活性发生了较明显的变化,ＰＭＡ诱导的细胞其酶活性在２４ｈ变化最大,升高到对照的１．３２倍;而ＲＡ处理的细胞其酶活性在７２ｈ变化最大,升高到对照的２．１５倍．     

利用毛发水解提取氨酸后的废液研制氨基酸复合肥料

利用胱氨酸废液中游离氨基酸为主要成份研究氨基酸肥料,既解决了废液排放问题,又开辟了新的肥料来源。本文详尽叙述这一研制的工艺原则流,调添加剂在这一流程中的作用,并对氨基酸肥料的肥效进行了试验研究。     

胎羊缺氧模型的血流动力学改变

目的和方法：健康妊娠绵羊７只,体重２０～３０ｋｇ。于妊娠１１６～１２５ｄ行胎儿外科手术。经胎儿股动脉插管引出腹主动脉血压,放置脐动脉电磁流量计探头记录血流信号。术后恢复１ｈ。从胎儿动脉导管注入明胶微球悬浮液（≈５０μｍ）造成胎盘微血管阻塞,每隔１５～２０ｍｉｎ注射一次,构成胎儿缺氧动物模型。采集胎儿动脉血样。分析ｐＨ、ＰａＣＯ２和ＰａＯ２值。分析脐动脉输入阻抗。结果：１、外周阻力Ｒ与血管阻塞程度呈指数关系（ｒ＝０．９７,Ｐ＜０．００１）,但脐动脉特征阻抗基本不变;２、胎儿动脉血氧分压随血管阻塞程度增加而下降（ｒ＝０．８７,Ｐ＜０．００１）;ｐＨ值随血管阻塞程度的增加而减小（ｒ＝０．８５,Ｐ＜０．０１）;二氧化碳分压随血管阻塞程度增加而上升（ｒ＝０．７１,Ｐ＜０．０５）;３、脐动脉血流量与外周阻力呈幂函数关系（ｒ＝０．９９,Ｐ＜０．００１）。结论：本工作为研究胎儿窘迫的病理生理机制提供了成功的动物模型     

DDR2胞外区的可溶性表达、纯化和功能检测

盘状结构域受体2（discoidin domain receptor2,DDR2)一种受体型酷氨酸蛋白激酶,其配体为纤维型胶原。胶原诱导的DDR2磷酸化可上调细胞基质金属蛋白酶1的过表达。DDR2在人体内广泛分布并与肿瘤的转移相关。为进一步研究DDR2在肿瘤转移中的作用和DDR2在细胞内的信号通路,对DDR2的胞外区进行了原核融合表达并纯化可溶性部分,获得纯度约85%的纯化蛋白,竞争结合抑制实验证明,纯化的融合蛋白可以特异性阻断Ⅱ型胶原与天然DDR2受体的结合。     

心血管变异性的中枢调节数学模型

通过建立心血管变异性的数学模型,讨论心血管中枢对心血管调节的作用,血液血动力学公式、心交感和心迷走对心率的控制,压力感受器反射以及心血管中枢的活动性构成闭环的拍－拍心血管变异性数学模型。获得如下结果;模型仿真了,1）心血管变异性的三个主要的频率成分;2）传出神经活动也具有与心血管变异性相同的频谱特性;3）压力反射的S形曲线及其受心血管中枢的影响;4）心血管变异的昼夜节律现象。本模型成功地仿真了心血管变异性的主要特征,尤其提示了心血管中枢的活动对心血管变异性和压力反射敏感性有极大的影响。     

颅内压低频分析

目的：临床和基础研究发现,颅内压存在波动,本工作通过动物实验模拟颅高压并研究颅内压的波动。实验方法：14条犬安置硬膜外球囊并注液制成颅高压模型,通过改变球囊内液体量来改变颅高压程度和颅内容积,由压力传感器持续记录相应压力。结果：对颅内压、腰区脑脊液压分别进行FFT分析,发现都存在一个约为0．2Hz的波动,该频率既不是心率(3Hz左右)也不是呼吸频率(0．4Hz),记为M波。分析表明：1)正常情况下,M波并不出现;2)实验开始阶段,不出现M波,当颅内压超过一定压力水平时,M波出现。随后的药物干预实验显示,采用迷走神经阻断药阿托品能明显抑制M波,而交感神经阻断药心得安效果不明显,初步说明M波与脑血管的某些调节机制有关。     

血管平滑肌收缩的Ca^2＋信号调节机制

血管平滑肌细胞内Ca^2＋的浓度（[Ca^2＋]i）的变化及胞内收缩蛋白对Ca^2＋的敏感性是影响血管紧张的主要因素。研究表明细胞内Ca^2＋浓度的变化在血管平滑肌细胞的激活中发挥重要作用。在静息状态,细胞内的Ca^2＋浓度主要受膜电位的调节,同时,[Ca^2＋]i也可反馈调节膜电位。在平滑肌细胞内存在多种[Ca^2＋]i调节机制。本文概述了这些机制在调节血管平滑肌紧张中的作用,主要包括：[Ca^2＋]i在血管平滑肌收缩中的作用;环二磷酸腺苷（cADPR）在调节Ca^2＋释放中的作用;cADPR介导的肉桂碱受体的激活在调节平滑肌紧张度中的作用;血管平滑肌细胞的Ca^2＋闪烁和细胞膜Ca^2＋敏感性钾通道的激活;[Ca^2＋]i与膜电位之间的相互作用等。     

绿盲蝽成虫对六种寄主及其挥发物的选择趋势

针对绿盲蝽Apolyguslucorum（Meyer-Dttr）6种主要寄主,分别于5～10叶期和花蕾期,采用室内“Y”型嗅觉仪和田间罩笼接虫方法,研究了绿盲蝽成虫对不同寄主及其挥发物的选择趋势。田间罩笼接虫试验结果表明：5—10叶期的茼蒿、国抗22及泗棉3号上绿盲蝽虫量居多,绿豆次之,大豆和豇豆上的较少;花蕾期的茼蒿、绿豆、国抗22及泗棉3号上绿盲蝽较多,而豇豆、大豆上较少。以5～10叶期和花蕾期的上述6种寄主为实验材料,以无寄主花盆为空白对照,每期各成对设置17个气源组合,采用室内“Y”型嗅觉仪测定绿盲蝽成虫对这6种寄主气源的选择趋性。不同气源组合测定结果表明,绿盲蝽对5—10叶期植物性气源的选择趋势为：国抗22〉茼蒿〉绿豆〉泗棉3号〉大豆〉豇豆;绿盲蝽对花蕾期植物性气源的选择趋势为：绿豆〉茼蒿〉国抗22〉泗棉3号〉豇豆〉大豆。上述不同选择性试验结果综合表明,绿盲蝽成虫对5—10叶期和花蕾期不同寄主的选择趋势基本一致。