慢性心力衰竭患者并发抑郁障碍的影响因素及对患者UA、CysC、Scr、生活质量及预后的影响

摘要 目的：探讨慢性心力衰竭（CHF）患者并发抑郁障碍的影响因素,并分析其对患者血清尿酸（UA）、胱抑素C（CysC）、血肌酐（Scr）、生活质量及预后的影响。方法：选取2019年4月~2021年3月我院收治的106例CHF患者作为研究对象。采用汉密尔顿抑郁量表（HAMD）评估所有患者的抑郁情况,根据评估结果将患者分为抑郁组和未抑郁组。收集临床资料,采用多因素Logistic回归分析CHF患者并发抑郁障碍的影响因素。检测并对比两组患者血清UA、CysC、Scr水平差异。比较两组患者明尼苏达心力衰竭生活质量量表（MLHFQ）评分差异。随访半年,比较两组患者预后不良事件的发生率。结果：106例CHF患者中,有21例患者HAMD评分≥8分,抑郁障碍的发生率为19.81%。抑郁组和未抑郁组在性别、年龄、心电图结果是否异常、是否发生房颤、NYHA心功能分级、住院天数方面对比差异有统计学意义（P<0.05）。进一步多因素Logistic回归分析显示：女性、年龄≥65岁、发生房颤、住院天数≥10 d是CHF患者并发抑郁的危险因素（P＜0.05）。抑郁组血清UA、CysC、Scr水平均高于未抑郁组（P<0.05）。抑郁组MLHFQ各领域（躯体领域、其他领域、情绪领域）评分及总分均高于未抑郁组（P<0.05）。抑郁组的预后不良事件发生率高于未抑郁组（P<0.05）。结论：CHF患者中并发抑郁的比例较高,其发生受到住院天数、房颤、性别、年龄等因素影响,抑郁使CHF患者的生活质量明显降低,血清UA、CysC、Scr水平呈高表达,且预后相对更差,需引起临床重视。     

血清Trx1、FGL2与急性心肌梗死后心力衰竭患者预后的关系

摘要 目的：探讨血清硫氧还蛋白1（Trx1）、纤维蛋白原样蛋白2（FGL2）与急性心肌梗死后心力衰竭患者预后的关系。方法：选择2019年10月至2020年5月我院收治的158例急性心肌梗死后心力衰竭患者作为观察组,并根据心功能Killip分级分为Ⅱ级组54例、Ⅲ级组57例、Ⅳ级组47例。另选择同期我院收治的102例急性心肌梗死患者作为对照组。入院后采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测所有患者血清Trx1、FGL2水平;观察组患者出院后随访2年,并根据是否出现主要不良心血管事件（MACE）将患者分为预后不良组和预后良好组。采用多因素Logistic回归分析影响急性心肌梗死后心力衰竭患者预后的相关因素,采用受试者工作特征（ROC）曲线评估血清Trx1、FGL2对急性心肌梗死后心力衰竭患者预后的预测价值。结果：观察组血清FGL2水平明显高于对照组,血清Trx1水平明显低于对照组（P<0.05）;心功能Killip分级Ⅳ级组患者血清Trx1水平明显低于Ⅱ级组、Ⅲ级组（P<0.05）,血清FGL2水平明显高于Ⅱ级组、Ⅲ级组（P<0.05）。预后不良组患者血清Trx1、LVEF均明显低于预后良好组,而年龄、血清FGL2及血尿酸、血肌酐、N末端B型利钠肽原（NT-proBNP）均明显高于预后良好组（P<0.05）,两组心功能Killip分级比例比较差异有统计学意义（P<0.05）。多因素Logistic回归分析显示,年龄（较高）、心功能Killip分级为Ⅳ级、Trx1下降、FGL2升高均是影响急性心肌梗死后心力衰竭患者预后的危险因素（P<0.05）。ROC曲线结果显示,血清Trx1、FGL2预测急性心肌梗死后心力衰竭患者预后的曲线下面积分别为0.807、0.811,两者联合检测预测急性心肌梗死后心力衰竭患者预后的曲线下面积为0.889。结论：急性心肌梗死后心力衰竭患者血清中Trx1水平降低,FGL2水平升高,且血清Trx1、FGL2水平与患者心功能分级及预后密切相关,可作为评估急性心肌梗死后心力衰竭患者预后的辅助性指标。     

血清尿酸、同型半胱氨酸、白细胞介素-6与冠心病患者肠道菌群和主要不良心血管事件的关系研究

摘要 目的：研究血清尿酸（UA）、同型半胱氨酸（Hcy）、白细胞介素-6（IL-6）与冠心病患者肠道菌群和主要不良心血管事件（MACE）的关系。方法：选取2018年5月~2020年12月期间在中国人民解放军联勤保障部队第九八九医院行经皮冠状动脉介入术（PCI）的冠心病患者120例作为冠心病组,选取同期来中国人民解放军联勤保障部队第九八九医院体检的健康志愿者80例作为对照组。对比对照组、冠心病组的血清IL-6、Hcy、UA水平和乳酸杆菌、双歧杆菌、大肠杆菌。Pearson相关性分析IL-6、Hcy、UA和乳酸杆菌、双歧杆菌、大肠杆菌的相关性。记录冠心病组PCI术后随访1年MACE的发生率,并采用多因素Logistic回归分析MACE发生的影响因素。结果：冠心病组的血清IL-6、Hcy、UA水平高于对照组（P<0.05）。冠心病组的乳酸杆菌、双歧杆菌、大肠杆菌数量少于对照组（P<0.05）。Pearson相关性分析结果显示,IL-6、Hcy、UA均与乳酸杆菌、双歧杆菌、大肠杆菌呈负相关（P<0.05）。所有患者均完成随访,无失访患者。随访过程中发现有32例患者发生MACE,发生率为26.67%。根据是否发生MACE分为MACE组（n=32）和无MACE组（n=88）。单因素分析结果显示,MACE的发生与病程、吸烟史、合并高血压、合并糖尿病、置入支架数目、IL-6、Hcy、UA、乳酸杆菌、双歧杆菌、大肠杆菌有关（P<0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示：病程偏长、吸烟史、合并高血压、合并糖尿病、置入支架数目更多、IL-6偏高、Hcy偏高、UA偏高是冠心病患者MACE发生的危险因素（P<0.05）。结论：冠心病患者体内IL-6、Hcy、UA水平升高,肠道菌群紊乱,且肠道菌群紊乱与IL-6、Hcy、UA水平相关。此外,冠心病PCI术后MACE发生不可避免,且受到病程、吸烟史、合并高血压等多种因素的影响。     

急性心肌梗死患者PCI术后心室重构患者血清Hcy、CysC、MMP-1、NGAL的表达及临床意义

摘要 目的：观察急性心肌梗死（AMI）患者经皮冠脉介入术（PCI）术后心室重构患者血清同型半胱氨酸（Hcy）、胱抑素C（CysC）、基质金属蛋白酶-1（MMP-1）、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）的表达及临床意义。方法：选取2018年3月~2020年9月期间我院收治的AMI患者70例。根据PCI术后是否发生心室重构将其分为无心室重构组（n=49）和心室重构组（n=21）。检测患者血清MMP-1、Hcy、NGAL、CysC水平及心功能指标[左室后壁厚度( LVPWT)、左室舒张末期内径( LVEDD)、左室射血分数( LVEF)、室间隔厚度( IVST)]。分析血清MMP-1、Hcy、NGAL、CysC水平与心功能指标的相关性。分析AMI患者PCI术后心室重构的影响因素。结果：心室重构组血清MMP-1、Hcy、NGAL、CysC水平均高于无心室重构组（P<0.05）;LVEDD、IVST、 LVPWT均大于无心室重构组,LVEF低于无心室重构组（P<0.05）。Pearson相关性分析结果显示：血清MMP-1、Hcy、NGAL、CysC水平和LVEDD、IVST、 LVPWT均呈正相关,而与LVEF呈负相关（P<0.05）。单因素分析结果显示：两组患者梗死部位、心律失常情况、单核细胞（MO）、肌酸激酶同功酶（CK-MB）、发病到开通梗死相关动脉时间组间对比差异均有统计学意义（P<0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示：梗死部位为前壁、发生心律失常以及高水平的MO、CK-MB、MMP-1、Hcy、CysC均是AMI患者PCI术后发生心室重构的危险因素（P<0.05）。结论：血清MMP-1、Hcy、NGAL、CysC表达均与AMI患者PCI术后的心室重构密切相关,检测以上指标水平可对AMI患者PCI术后心室重构的预测和防治提供一定参考。     

心脏外科术后重症患者死亡影响因素的Logistic回归分析及对预后的预测价值

摘要 目的：探讨心脏外科术后重症患者死亡的影响因素并分析其对预后的预测价值。方法：回顾性分析2016年3月至2021年6月本院重症监护室（ICU）收治的108例心脏外科术后重症患者的临床资料,根据出院前临床结局分为死亡组及存活组,比较两组临床指标的差异,采用Logistic回归分析患者死亡的危险因素,绘制受试者特征工作曲线（ROC）分析危险因素对预后的预测价值。结果：108例患者存活组80例,死亡组28例;死亡组房颤史比例、Killip心功能分级≧III级比例、左室射血分数（LVEF）<40%比例、血管活性药物输注比例、急性生理学与慢性健康状况评分II（APACHEII）、心肌肌钙蛋白I（cTnI）、血肌酐（Scr）、B型钠尿肽（BNP）高于存活组,肾小球滤过率（eGFR）低于存活组,差异有统计学意义（P<0.05）;多因素Logistic回归分析显示,APACHEII评分、eGFR、cTnI是心脏外科术后重症患者死亡的独立危险因素（P<0.05）;ROC曲线显示,APACHEII评分、eGFR、cTnI预测心脏外科术后重症患者预后的曲线下面积分别为0.836、0.799、0.710,三者联合预测曲线下面积为0.862。结论：APACHEII评分、eGFR、cTnI是心脏外科术后重症患者预后的独立危险因素,三者联合用于预后的预测价值更高,可为临床治疗提供一定参考。     

冷冻球囊消融术与射频导管消融术治疗阵发性心房颤动的疗效比较及术后1年复发的危险因素探讨

摘要 目的：对比冷冻球囊消融术（CBA）与射频导管消融术（RFCA）治疗阵发性心房颤动（AF）的疗效,并探讨术后1年复发的危险因素。方法：选择2019年2月～2021年2月期间我院收治的阵发性AF患者100例,根据手术方案的不同将患者分为A组（n=48,RFCA）和B组（n=52,CBA）。对比两组手术相关指标、并发症发生率和术后1年复发率情况。根据是否复发将所有患者分为复发组和无复发组,多因素Logistic回归分析术后1年复发的危险因素。结果：B组的手术时间、消融时间、X线曝光时间短于A组（P<0.05）。B组的并发症总发生率低于对照组（P<0.05）。两组复发率组间对比差异无统计学意义（P>0.05）。单因素分析显示,阵发性AF患者术后1年复发与B型利钠肽（BNP）、年龄、白细胞计数（WBC）、体质量指数、肌酐（Cr）、合并高血压、超敏C反应蛋白（hs-CRP）、合并糖尿病、左心房内径（LAD）、合并冠心病、病程、尿酸、心电图f波类型有关（P<0.05）。多因素分析结果显示：病程偏长、尿酸偏高、LAD偏大、年龄偏大、hs-CRP偏高、心电图f波类型为细波、BNP偏高是阵发性AF患者术后1年复发的危险因素（P<0.05）。结论：CBA与RFCA治疗阵发性AF,均可获得较好的疗效,CBA在改善患者手术情况及安全性方面的效果较好。阵发性AF患者术后1年的复发率较高,病程、尿酸、LAD、年龄、hs-CRP、BNP、心电图f波类型均是其影响因素。     

老年冠心病患者经皮冠状动脉介入治疗术后衰弱的影响因素及其对认知功能和预后的影响

摘要 目的：探讨老年冠心病患者经皮冠状动脉介入治疗（PCI）术后衰弱的影响因素及其对认知功能和预后的影响。方法：选取2019年3月~2021年3月期间本院收治的行PCI的老年冠心病患者134例。查阅相关问卷制定调查表,收集、整理患者资料,统计术后衰弱发生情况,衰弱的影响因素采用多因素Logistic回归分析。根据患者是否合并衰弱纳为衰弱组和非衰弱组,对比两组认知功能和预后情况。结果：接受PCI治疗的134例老年冠心病患者中,术后合并衰弱者92例,占比68.66%。未合并衰弱者42例,占比31.34%。合并衰弱的患者纳为衰弱组（n=92）,未合并衰弱的纳为非衰弱组（n=42）。单因素分析显示,老年冠心病患者PCI术后衰弱与婚姻状况、年龄、放入支架数量、家庭人均月收入、饮酒史、文化程度、吸烟史、心功能分级、合并症种类数、体质量指数、营养状况、近1年跌倒史、焦虑情况、抑郁情况有关（P<0.05）。多因素Logistic回归分析结果显示：有饮酒史、年龄偏大、合并症种类数≥3种、心功能分级III级、有焦虑情况、文化程度小学及其以下、有抑郁情况、有近1年跌倒史、家庭人均月收入≤3000元、营养状况不良是老年冠心病患者PCI术后衰弱的危险因素（P<0.05）。衰弱组的非常规就诊发生率、全因死亡率、主要不良心血管事件发生率均高于非衰弱组（P<0.05）。衰弱组的简易智力状态检查量表（MMSE）评分低于非衰弱组（P<0.05）。结论：老年冠心病患者PCI术后衰弱的发生率较高,且受到年龄、家庭人均月收入、文化程度、饮酒史、合并症种类数、心功能分级、焦虑情况、抑郁情况、有近1年跌倒史、营养状况等因素的影响。衰弱会导致患者的认知功能下降以及不良预后。     

长病程低疾病活动度的系统性红斑狼疮患者血清β2-微球蛋白、肌酐水平与心血管疾病风险的相关性研究

摘要 目的：研究长病程低疾病活动度的系统性红斑狼疮患者血清β2-微球蛋白、肌酐表达水平与心血管疾病风险的相关性。方法：回顾性搜集2017年1月至2022年12月于我院风湿免疫科住院治疗的100例长病程低疾病活动度的系统性红斑狼疮患者作为研究组,并纳入同期健康体检者作为阴性对照组。采用Framingham评分将研究组分为高风险组和低风险组。采用酶联免疫吸附实验检测所有研究对象血清β2-微球蛋白（β2-MG）、肌酐（Scr）的表达水平,采用logistics回归模型分析长病程低疾病活动度的系统性红斑狼疮患者发生心血管疾病的危险因素,采用Pearson检验分析β2-MG、Scr水平与Framingham评分相关性。结果：长病程低疾病活动度的系统性红斑狼疮患者血清β2-MG、Scr表达水平明显升高（P<0.05）;高心血管病风险组长病程低疾病活动度的系统性红斑狼疮患者血清β2-MG、Scr表达水平较低风险组明显升高（P<0.05）;预后情况不同,患者β2-MG、Scr表达水平具有显著差异（P<0.05）;预后良好患者β2-MG、Scr表达水平显著低于预后不良者,预后情况越好,β2-MG、Scr表达水平越低;高危组较低危组代谢综合征比例高、胆固醇及甘油三酯表达水平高（P<0.05）;Framingham评分、β2-MG、Scr是长病程低疾病活动度的系统性红斑狼疮患者发生心血管疾病的危险因素;长病程低疾病活动度的系统性红斑狼疮患者β2-MG、Scr表达水平与Framingham评分正相关。结论：长病程低疾病活动度的系统性红斑狼疮患者血清β2-MG、Scr表达水平与心血管疾病风险正相关。     

血清PCT、presepsin和Gas6对老年慢性心力衰竭合并肺部感染患者病情及预后的评估价值

摘要 目的：探讨血清降钙素原（PCT）、白细胞分化抗原14亚型（presepsin）联合生长停滞特异性基因产物6（Gas6）对老年慢性心力衰竭（CHF）患者合并肺部感染患者病情及预后的评估价值。方法：412例老年CHF患者根据有无合并肺部感染分为肺部感染组（n=176）和无肺部感染组（n=236）,另选取同期体检健康的40例健康体检者作为健康对照组,比较三组血清PCT、presepsin、Gas6水平。统计住院28 d内老年CHF合并肺部感染患者的预后情况,根据预后不同分为死亡组（n=37）和生存组（n=139）,多因素Logistic回归模型分析老年CHF合并肺部感染患者死亡的危险因素。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析血清PCT、presepsin联合Gas6对老年CHF合并肺部感染患者死亡的预测价值。结果：肺部感染组和无肺部感染组血清PCT、presepsin、Gas6水平均高于健康对照组,且肺部感染组高于无肺部感染组（P＜0.05）。多因素Logistic回归分析显示,年龄偏高、心功能分级Ⅳ级、PCT升高、presepsin升高、Gas6升高均是导致老年CHF合并肺部感染患者死亡的独立危险因素（P＜0.05）。ROC结果显示,血清PCT、presepsin、Gas6单独及联合检测对预测老年CHF合并肺部感染患者死亡风险的AUC分别为0.663、0.731、0.751、0.855,三指标联合检测的预测效能优于各指标单独检测。结论：血清PCT、presepsin及Gas6水平在老年CHF合并肺部感染患者中升高,且是短期预后不良的独立危险因素,检测PCT、presepsin及Gas6水平对老年CHF合并肺部感染患者病情及预后具有一定评估价值。     

心脏彩超检查联合血清BNP、ALB、CysC在慢性心力衰竭患者预后评估中的临床价值分析

摘要 目的：分析心脏彩超检查联合血清B型钠尿肽（BNP）、白蛋白（ALB）、胱抑素C（CysC）在慢性心力衰竭（CHF）患者预后评估中的临床价值。方法：选取2017年6月-2018年5月我院收治的123例CHF患者,心脏彩超检查左心室射血分数（LVEF）、左心房内径（LAD）和左心室内径（LVD）,实验室检测血清BNP、ALB、CysC水平。按照3年随访后患者是否死亡分为死亡组35例和存活组88例,收集临床资料,采用多因素Logistic回归分析CHF患者预后的影响因素。采用受试者工作特征（ROC）曲线分析心脏彩超检查联合血清BNP、ALB、CysC对CHF患者预后的评估价值。结果：死亡组患者的LAD、LVD及血清BNP、CysC水平高于存活组患者,而LVEF及血清ALB水平低于存活组患者（P＜0.05）。心脏彩超指标LVEF、LAD、LVD及血清BNP、ALB、CysC是CHF患者预后的影响因素（P＜0.05）。心脏彩超指标LVEF、LAD、LVD联合血清BNP、ALB、CysC检测对CHF患者预后评估的ROC曲线下面积（AUC）（0.95CI）为0.857（0.771～0.938）,灵敏度及特异度分别为0.914（32/35）、0.795（70/88）,均明显高于上述各指标单独检测。结论：心脏彩超指标LVEF、LAD、LVD和血清BNP、ALB、CysC均为CHF患者预后的影响因素,且联合检测对患者预后的评估价值较高,具有一定的临床应用价值。     

壳聚糖酶的克隆表达与壳寡糖的制备分析

目的:克隆壳聚糖酶基因于大肠杆菌中实现高表达,制备壳寡糖。方法:以枯草芽孢杆菌总DNA为模板扩增壳聚糖酶基因(CSN),克隆至载体pET23a(+)上,转化菌株BL21(DE3)。重组子经0.5 mmol/L IPTG诱导后,SDS-PAGE和质谱检测与鉴定重组酶。酶纯化后水解壳聚糖,薄层色谱分析其水解产物。结果:质谱证明壳聚糖酶(31.5kDa)成功表达,表达量占菌体总蛋白的45%左右。纯化后重组酶浓度为900 mg/L,纯度95%、回收率85%,酶活力为10 000 U/mg。壳聚糖降解产物为壳二糖至壳四糖。结论:原核表达载体pET23a(+)-CSN构建正确,壳聚糖酶表达量与活性高,适用于水解壳聚糖制备壳寡糖。     

国内外蝗害治理技术现状与展望

本文首先概述了国内外蝗虫发生与为害的态势,总结了现阶段我国蝗虫发生与为害的主要特点:即农田飞蝗暴发频繁而且严重,草原土蝗的发生时常造成严重的经济损失,而且侵入城市干扰市民生活,我国与周边国家之间蝗虫过境迁移频繁,使用化学农药污染环境和农产品;分析了国内外蝗虫防治对策与技术的发展现状,重点介绍了应急防治和可持续治理对策、...     

Coiled-coil nanomechanics and uncoiling and unfolding of the superhelix and alpha-helices of myosin

The nanomechanical properties of the coiled-coils of myosin are fundamentally important in understanding muscle assembly and contraction. Force spectra of single molecules of double-headed myosin, single-headed myosin, and coiled-coil tail fragments were acquired with an atomic force microscope and displayed characteristic triphasic force-distance responses to stretch: a rise phase (R) and a plateau phase (P) and an exponential phase (E). The R and P phases arise mainly from the stretching of the coiled-coils, with the hinge region being the main contributor to the rise phase at low force. Only the E phase was analyzable by the worm-like chain model of polymer elasticity. Restrained molecular mechanics simulations on an existing x-ray structure of scallop S2 yielded force spectra with either two or three phases, depending on the mode of stretch. It revealed that coiled-coil chains separate completely near the end of the P phase and the stretching of the unfolded chains gives rise to the E phase. Extensive conformational searching yielded a P phase force near 40 pN that agreed well with the experimental value. We suggest that the flexible and elastic S2 region, particularly the hinge region, may undergo force-induced unfolding and extend reversibly during actomyosin powerstroke.     

Kinetics and thermodynamics of peroxidase- and laccase-catalyzed oxidation of N-substituted phenothiazines and phenoxazines

N -substituted phenothiazines (PTs) and phenoxazines (POs) catalyzed by fungal Coprinus cinereus peroxidase and Polyporus pinsitus laccase were investigated at pH 4–10. In the case of peroxidase, an apparent bimolecular rate constant (expressed as k _cat/K _m) varied from 1 ×10⁷M⁻¹s⁻¹to 2.6×10⁸M⁻¹s⁻¹ at pH 7.0. The constants for PO oxidation were higher in comparison to PT. pH dependence revealed two or three ionizable groups with pK _a values of 4.9–5.7 and 7.7–9.7 that significantly affected the activity of peroxidase. Single-turnover experiments showed that the limiting step of PT oxidation was reduction of compound II and second-order rate constants were obtained which were consistent with the constants at steady-state conditions. Laccase-catalyzed PT and PO oxidation rates were lower; apparent bimolecular rate constants varied from 1.8×10⁵M⁻¹s⁻¹ to 2.0×10⁷M⁻¹s⁻¹ at pH 5.3. PO constants were higher in comparison to PT, as was the case with peroxidase. The dependence of the apparent bimolecular constants of compound II or copper type 1 reduction, in the case of peroxidase or laccase, respectively, was analyzed in the framework of the Marcus outer-sphere electron-transfer theory. Peroxidase-catalyzed reactions with PT, as well as PO, fitted the same hyperbolic dependence with a maximal oxidation rate of 1.6×10⁸M⁻¹s⁻¹ and a reorganization energy of 0.30 eV. The respective parameters for laccase were 5.0×10⁷M⁻¹s⁻¹ and 0.29 eV. Received: 20 September 1999 / Accepted: 24 February 2000     

白术同源四倍体的诱导和鉴定及其与二倍体过氧化物酶的比较

以白术（Atractylodes macrooephala Koidz.）二倍体组培苗为材料,对其四倍体诱导方法进行研究,共获得45个白术同源四倍体株系,为优良株系的选育提供了材料。此外,还分析比较了其中8个白术四倍体株系与二倍体的过氧化物酶同工酶（POD）的酶谱差异,发现四倍体各株系过氧化物酶同工酶谱比二倍体的均多了Rf0.310的谱带,且总过氧化物酶比活力也发生了很大改变,对探讨白术四倍体优良株系的生理生化机理具有一定的参考价值。     

放牧对牧草光合作用、呼吸作用和氮、碳吸收与转运的影响

研究放牧对草地植物生理活动的影响,对于揭示草地放牧演替的生理机制有重要意义.大量研究表明,家畜放牧对牧草光合作用、呼吸作用以及C和N吸收与转运的影响,可以分为生理伤害和生理恢复2个阶段.放牧通过改变草地冠层结构影响牧草光合作用,净光合作用速率短期内迅速下降,随着叶面积指数增加又逐渐上升,呼吸作用有相似的变化趋势.牧草放牧后再生长所需的C和N最初主要来自根系和留茬中的贮藏物质,此后随着牧草生长恢复逐渐由同化作用供给,C代谢与土壤N水平负相关.放牧后牧草生理活动变化与牧草遗传特性、种间竞争、家畜放牧特征、非生物环境等因素密切相关.     

Synthesis of hapten and conjugates of coumestrol and development of immunoassay

3-O-Carboxymethylcoumestrol was prepared as the hapten for immunoassay by a partial alkylation of coumestrol with ethyl chloroacetate in acetone alkalized with potassium carbonate. 3-O-Ethoxycarbonylmethylcoumestrol was separated by column chromatography and finally was hydrolyzed with formic acid. 1H and 13C NMR data (APT, COSY, HMQC, and HMBC) revealed that the reaction was regioselective, as 3-O-ethoxycarboxymethylcoumestrol was the only monosubstituted derivative. The hapten was then conjugated to bovine serum albumin and used for immunization of rabbits. A radioimmunoassay (RIA) system was established based on the polyclonal antiserum and a 125I-labeled hapten-tyrosine methyl ester conjugate as the radioligand. Parameters of the RIA: sensitivity: 12 pg per tube, 50% intercept: 140 pg per tube, working range: 20-4000 pg per tube. The cross-reactivity of a panel isoflavonoid and lignan phytoestrogens was either negligible (e.g. formononetin 0.07%; biochanin A 0.06%) or not detectable at all. The major immunoreactive peak in HPLC fractions from an alfalfa extract had the same retention time as coumestrol standard and represented 94.8% of the signal. The remaining 5.2% of immunoreactivity was distributed between five minor peaks. We conclude that after the validation for particular matrices, the method will be a useful tool for analysis of coumestrol, especially in low volume and low concentration samples.