光动力疗法诱导增生滑膜细胞凋亡的初步研究

目的：观察光动力疗法（PDT）诱导类风湿性关节炎（RA）动物模型的增生滑膜细胞的凋亡情况。方法：兔AIA模型在关节类出现第七天进行PDT治疗,随机治疗一侧膝关节,另一侧作自身对照,免耳静脉注入HMME10mg/Kg,20分钟后,膝关节用金蒸气激光照射,激光波长627.8nm,功率密度100mW/cm^2,能量密度100J/cm^2,24小时后取膝关节滑膜作病理检查,并用脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）原位检测凋亡结论。结果：PDT治疗组凋亡阳性细胞较对照组明显增多,图像分析结果单位视野内阳性细胞数和面密度PDT治疗组高于对照组,统计学检验差异有显著性,凋亡细胞核直径PDT治疗组较小,与对照组相比,统计学检验差异有显著性。结论：PDT有可能通过诱发滑膜细胞的凋亡,使增生的滑膜细胞减少。     

PDCD5在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡中表达上调

为了研究程序化细胞死亡因子5(PDCD5)在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡中的作用,在不同的时间加入有效剂量100 nmol/L雷公藤内醇酯（triptolide）后,采用实时定量PCR、RT-PCR、Western 印迹和直接免疫荧光染色方法检测体外分离培养的类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中PDCD5在mRNA和蛋白水平的表达及蛋白表达特征.在雷公藤内醇酯诱导类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡的过程中,PDCD5mRNA表达水平明显地渐次增加,呈现一种明确的时间依赖性递增表达模式,而PDCD5蛋白有时间依赖性表达上调持续16 h,并维持在相对恒定水平.直接免疫荧光染色结果显示,在正常体外培养的类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞中,PDCD5蛋白的表达较弱,且主要分布在细胞浆.经雷公藤内醇酯处理4 h后,大多数细胞有PDCD5蛋白的聚集,直至12 h,细胞核周围PDCD5蛋白聚集显著增强.36 h后,PDCD5蛋白以核固缩的形式存在于凋亡的RA FLS中,细胞核染色质明显浓缩,片段化并出现了凋亡小体.上述结果表明,在类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡的过程中,PDCD5表达上调并在凋亡早期出现核转位,PDCD5蛋白核转位要早于凋亡小体形成.PDCD5蛋白核转位是类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡的早期事件,PDCD5不仅参与了类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的凋亡过程,而且在类风湿关节炎滑膜增生的凋亡调节中起到重要调节作用.     

人IL-12和B7-1基因对HuPBL-SCID小鼠模型中人源肿瘤的协同抑制作用

人IL 12 (hIL 12 )对鼠源的免疫细胞作用较弱 ,进行hIL 12抗瘤研究缺乏有效的动物模型。为此利用荷人瘤的HuPBL SCID小鼠模型 ,将改良的Winnassay细胞免疫功能分析方法应用于评价hIL 12和hB 1协同抗瘤作用。用商业化的非脂质转基因试剂配制单独的hIL 12、hB7 1或hIL 12联合hB7 1的基因转染液。将上述三种基因转染液分别瞬时转基因入人恶性黑色素瘤A375细胞 ,转基因 30min后 ,按组别 (hIL 12组、hB7 1组、hIL 12 hB7 1组、rhIL 2对照组、HuPBL对照组和肿瘤对照组 )同人外周血淋巴细胞混合接种于SCID小鼠皮下 ,2 0天后处死实验小鼠 ,测得hIL 12和hB7 1的抑瘤率分别为 74 .0 6 %和 6 6 .98% ,联合作用达 93.4 0 % ,rhIL 2和HuPBL对照组无抗瘤作用。同时 ,在此模型上hIL 12联合hB7 1基因对人大肠癌LoVo和人肺癌SPC的抑制率分别为 98.37%和 97.39%。实验建立的各组HuPBL SCID小鼠 2 0天的外周血都含有人IgG(>0 .5mg/L)和极少量人CD3 淋巴细胞 (>0 .5个 /10 0个有核细胞 )。hIL 12、hB7 1和hIL 12 hB7 1组的瘤灶内人淋巴细胞浸润生长 ,肿瘤细胞残存 ,而rhIL 2和HuPBL对照组的瘤灶内人淋巴细胞“似团样”生长 ,肿瘤生长旺盛。表明此HuPBL SCID小鼠模型上的抗瘤机制为局部免疫反应。结果表明以此动物模型可跨     

重组腺病毒介导IL-2、TNF-α抗肿瘤实验研究

目的　研究腺病毒介导的细胞因子基因hIL 2、hTNF a对人肺腺癌细胞系的生物学特性的影响 ,探讨重组腺病毒的体内抗肿瘤作用。方法　将分别携带有hIL 2基因、hTNF a基因的重组腺病毒 (rAd hIL 2、rAd hTNF a)感染人肺腺癌Anip973细胞系 ,通过细胞生长实验、克隆形成实验等观察其对肿瘤细胞的作用 ;利用PCR技术对转染后的细胞进行检测并应用ELISA试剂盒检测转染后的细胞IL 2、TNF a的分泌量 ;通过肿瘤局部注射rAd hIL 2、rAd hTNF a的方法观察其在小鼠体内的抗肿瘤作用。结果　rAd hIL 2、rAd hTNF a经纯化后 ,滴度可达 10 1 0 PFU ml,当病毒为 30MOI时 ,对Anip973细胞的转染率达 90 %以上。体外转染的肿瘤细胞生长能力、克隆形成率等无明显变化。 2 4h细胞培养上清IL 2的分泌量为 5 0pg 2× 10 5细胞 ,TNF a的分泌量为 2 0pg 2× 10 5细胞。体内实验表明注射rAd LacZ、rAd hIL 2、rAd hTNF a的小鼠肿瘤生长缓慢 ,体积明显小于对照组 (P <0 0 5 ) ,生存期显著延长。结论　腺病毒介导的细胞因子基因hIL 2、hTNF a转染的肿瘤细胞形态学未见明显变化。转染hIL 2、hTNF a基因的肿瘤细胞可表达IL 2及TNF a。rAd hIL 2、rAd hTNF a重组腺病毒具有抗肿瘤作用     

虎杖苷对类风湿关节炎大鼠的治疗机制探究北大核心CSCD

探讨虎杖苷对类风湿关节炎(RA)大鼠的治疗作用及其可能作用机制。采用大鼠右后足趾皮内注射0. 1 m L完全弗氏佐剂致炎制备RA模型,分别给予160、80、40 mg/kg的虎杖苷混悬液灌胃,每日1次,造模后第28 d,对RA大鼠关节炎评分和足爪肿胀评分进行评估,并观察大鼠踝关节的病理学变化。检测血清TNF-α、IL-1β水平及关节滑膜组织中的Bax、caspase-3、Bcl-2、Wnt4、GSK-3β、β-catenin mRNA的表达及Wnt4、GSK-3β、β-catenin蛋白的表达。结果表明虎杖苷可显著降低RA大鼠的关节炎评分和足爪肿胀评分,改善关节腔炎症状态,降低血清TNF-α及IL-1β水平及FLS中的Wnt4、GSK-3β、β-catenin mRNA和蛋白及Bcl-2 mRNA的表达,并升高FLS中Bax、caspase3 mRNA的表达。虎杖苷可有效抑制RA大鼠滑膜增殖,促进滑膜细胞凋亡,控制关节炎症状态,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。     

虎杖苷对类风湿关节炎大鼠的治疗机制探究

探讨虎杖苷对类风湿关节炎(RA)大鼠的治疗作用及其可能作用机制。采用大鼠右后足趾皮内注射0. 1 m L完全弗氏佐剂致炎制备RA模型,分别给予160、80、40 mg/kg的虎杖苷混悬液灌胃,每日1次,造模后第28 d,对RA大鼠关节炎评分和足爪肿胀评分进行评估,并观察大鼠踝关节的病理学变化。检测血清TNF-α、IL-1β水平及关节滑膜组织中的Bax、caspase-3、Bcl-2、Wnt4、GSK-3β、β-catenin mRNA的表达及Wnt4、GSK-3β、β-catenin蛋白的表达。结果表明虎杖苷可显著降低RA大鼠的关节炎评分和足爪肿胀评分,改善关节腔炎症状态,降低血清TNF-α及IL-1β水平及FLS中的Wnt4、GSK-3β、β-catenin mRNA和蛋白及Bcl-2 mRNA的表达,并升高FLS中Bax、caspase3 mRNA的表达。虎杖苷可有效抑制RA大鼠滑膜增殖,促进滑膜细胞凋亡,控制关节炎症状态,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活有关。     

关节腔注射强力霉素对兔膝骨关节炎模型的影响

目的:研究关节腔内注射强力霉素对兔制动性骨关节炎模型的影响.方法:30只新西兰大白兔随机分成正常组6只及实验组24只,试验组左膝关节伸直位石膏固定4周随机选取6只处死左膝关节取材证实造模成功后剩余18只为左膝骨关节炎模型,随机分为治疗组、阴性对照组和模型对照组,治疗组每日给予1.33%的强力霉素0.3毫升左膝关节腔内注射,阴性对照组每日给予生理盐水0.3毫升左膝关节腔注射,模型对照组不做处理,于8周处死取材.观察指标包括关节软骨大体形态,软骨Mankin's评分,软骨细胞基质金属蛋白酶-3(MMP-3)表达及滑膜细胞白介素-1(IL-1)表达.结果:强力霉素治疗组软骨面退变明显轻于模型组及生理盐水对照组,软骨大体评分,Mankin评分,MMP-3表达及滑膜IL-1表达亦显著降低.结论:强力霉素关节腔内注射对兔制动性骨关节炎模型软骨退变有明显的缓解作用.     

大豆多肽Lunasin对类风湿关节炎大鼠T细胞免疫指标的影响

目的：探讨Lunasin对实验性类风湿关节炎（RA）大鼠免疫功能的影响。方法： Wistar雄性大鼠50只,按体重随机分为（n=10）：对照组、模型组和3个Lunasin处理组（0.1,0.2,0.4 mg/kg灌胃）。利用弗氏完全佐剂（FCA）局部注入大鼠足跖皮内,建立RA模型,治疗组Lunasin灌胃每天1次,对照组和模型组灌胃等量生理盐水;于实验第21天,检测足跖厚度、滑膜液T淋巴细胞活化情况和滑液中白介素-12（IL-12）、肿瘤坏死因子β（TNF-β）和I L-4、IL-10的分泌情况。结果：Lunasin可降低T淋巴细胞活化标志物CD69⁺和CD25⁺的表达,减少滑膜液中IL-12、TNF-β的分泌,增加IL-4、IL-10的分泌。结论：Lunasin能够抑制类风湿关节炎滑膜液中T细胞的活化并能反转Th1/Th2型细胞因子的分泌,调节类风湿关节炎免疫微环境。     

TAK1基因沉默对TNF-a诱导的滑膜细胞IL-6、IL-8表达的影响

目的：观察转化生长因子β激活激酶1（TAK1）基因沉默对肿瘤坏死因子a （TNF-a）诱导的滑膜细胞中促炎介质白介素-6（IL-6）和白介素-8（IL-8）表达的影响,以探讨TAK1在类风湿关节炎（RA）发病中的作用。方法：采取脂质体转染方法将TAK1特异性的小干扰RNA （siRNA）和阴性对照RNA （scRNA）导入类风湿关节炎的滑膜成纤维细胞株MH7A细胞,然后分别用20 ng/ml TNF-a刺激后,检测细胞内IL-6、IL-8 mRNA的表达和培养上清中IL-6和IL-8分泌情况以及p38、ERK、JNK、p65磷酸化的水平和抑制性蛋白IκBα的变化情况。结果：siRNA-TAK1转染72 h后滑膜细胞中TAK mRNA和蛋白表达的平均抑制率分别为75%和55%。siRNA-TAK1转染下调TNF-a诱导状态下IL-6和IL-8的表达,并能抑制p38、JNK、p65磷酸化和增加IκBα水平。结论：TAK1基因沉默能抑制TNF-a诱导的滑膜细胞IL-6、IL-8表达,可能与其抑制JNK和p38MAPK的活化及NF-κB的活化有关。     

Fas/FasL系统与类风湿关节炎发病机制的研究进展

类风湿关节炎是机体对自身滑膜发生免疫反应的疾病,其主要病理特征是滑膜增生和多种炎症细胞的浸润。滑膜增生的有关机制仍不清楚,目前认为可能是滑膜细胞和炎症浸润细胞数量增加及凋亡相对减少,即细胞凋亡程度不及增殖程度所致。Fas/FasL系统是细胞凋亡的重要途径之一,通过影响滑膜细胞的Fas/FasL表达可以诱导其凋亡。本文对Fas/FasL的性质、结构、功能、Fas/FasL与RA发病机制及RA治疗的关系进行综述。     

LncRNA MEG3调控miR-328影响类风湿性关节炎滑膜细胞增殖、凋亡和炎性反应

目的本研究旨在探讨LncRNA MEG3吸附miR-328对类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)滑膜细胞增殖、凋亡以及炎性反应的影响。方法收集我院RA标本并取非RA标本作为对照。qRT-PCR检测滑膜组织中LncRNA MEG3和miR-328的表达。验证LncRNA MEG3和miR-328的靶向关系;qRT-PCR和Western blot检测RA滑膜组织和正常滑膜组织中细胞凋亡相关因子Fas、Bcl-2、Bax及细胞增殖相关因子PCNA的mRNA和蛋白表达水平。干预RA滑膜细胞中LncRNA MEG3、mi R-328的表达并分组,ELISA法检测RA滑膜细胞上清液中炎性因子的表达,MTT法检验各组细胞转染后增殖能力变化,Transwell实验和流式细胞术检验各组RA滑膜细胞侵袭及细胞凋亡情况。结果 LncRNA MEG3在RA滑膜组织中表达减少,上调其表达可降低炎性因子浓度,诱导细胞凋亡并抑制RA滑膜细胞增殖和侵袭,沉默其表达则效果反转。LncRNA MEG3可作为miR-328的竞争性内源RNA,LncRNA MEG3对RA滑膜细胞的作用可被miR-328部分逆转。结论 LncRNA MEG3能够吸附miR-328,降低其表达,从而抑制RA滑膜细胞炎性因子表达,诱导RA滑膜细胞的凋亡并减少其增殖和侵袭。     

LRP16对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响

用Northern印迹方法检测雌二醇 (17β E2 )对LRP16mRNA表达的时间及剂量依赖性调控作用 .构建LRP16基因启动子序列调控的萤光素酶报告子 (pS0 ) ,并与雌激素受体α和 β(ERα和ERβ)表达载体共转染COS 7和MCF 7细胞后测定萤光素酶活性 .将LRP16基因的表达载体转染MCF 7细胞 ,测定过表达LRP16对细胞的生长特性的影响 .17β E2 使MCF 7细胞中LRP16mRNA表达水平增加 ,增加幅度未显示出 17β E2 培养时间和剂量的依赖性 .pS0 与ERα表达载体共转染细胞的相对萤光素酶活性较非共转染组 (对照组 )及pS0 ERβ表载体共转染组升高 5～ 10倍 .LRP16基因过表达促进MCF 7细胞的增殖 .研究表明 ,雌激素可能通过ERα上调乳腺癌MCF 7细胞LRP16基因的表达并促进细胞增殖     

用改良消减杂交筛选类风湿性关节炎滑膜细胞中高表达基因

 为了研究类风湿性关节炎 (rheumatoid arthritis,RA)滑膜细胞 (fibroblast- like synovialcells,FLS)过度增殖和破坏软骨的分子机理 ,利用改良消减杂交法以骨性关节炎 (osteoarthritis,OA)病人滑膜细胞为对照 ,筛选 RA滑膜细胞中的高表达基因 .将得到的基因片段克隆入质粒载体 ,通过反向点杂交排除假阳性克隆后 ,将阳性克隆进行核酸序列分析 ,最后用 Northern杂交方法检测一些高表达基因在 RA和 OA病人滑膜细胞中的表达水平 .结果显示 ,共分离到 1 50个 RA高表达基因片段 ,其中长于 1 0 0 0 bp的片段占 8% (1 2 /1 50 ) ,长于 40 0 bp的片段占 36.7% (55/1 50 ) ,在大于 40 0 bp的片段中 ,假阳性率为 2 3.7% (1 3/55) .在测序的 1 8个片段中 ,已知基因有 1 2个 ,其中包括 IGF- 1结合蛋白 (IGFBP)特异性丝氨酸蛋白酶、层粘连蛋白受体和组织蛋白酶 B等 .新序列有 6个 ,其中两个序列分别与 Ring- box蛋白 1和 SON DNA结合蛋白同源 .对 IGFBP特异性丝氨酸蛋白酶、层粘连蛋白受体和组织蛋白酶 B基因的 Northern杂交分析显示 ,在 RA病人滑膜细胞中 ,这些基因的表达水平高于 OA病人滑膜细胞 .这些结果提示 ,这种改良消减杂交法是一种简便有效的分离差异表达基因的方法 ;IGF- 1结合蛋白特异性丝氨酸蛋白酶、层粘     

LOX-1特异性小发夹RNA 表达载体的构建及其对巨噬细胞源性泡沫细胞形成的影响

[摘　要]　目的：靶向血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体-1基因的发卡样siRNA(shRNA)表达载体及其对巨噬细胞源性泡沫细胞形成的影响。方法：(1)采用DNA重组技术,将LOX-1 shRNA双链与线性化pGenesil-1质粒表达载体连接,脂质体法转染小鼠单核巨噬细胞（RAW264.7）,半定量逆转录聚合酶链反应法检测LOX-1 mRNA的表达,Western blot法检测LOX-1蛋白的表达。(2) Ox-LDL诱导巨噬细胞建立泡沫细胞模型, LOX-1-shRNA进行干预,干预组使用脂质体法进行细胞转染,转染24小时后,再加入Ox-LDL作用24小时,用油红O染色法及细胞内游离胆固醇及总胆固醇测定法观察对泡沫细胞形成的影响,倒置荧光显微镜观察转染LOX-1 shRNA后RAW264.7细胞对Dil-ox-LDL的摄取率。结果：测序鉴定发现插入的发卡样序列正确,成功合成了发卡样LOX-1基因RNA干扰表达载体;靶向LOX-1基因的发卡样shRNA表达载体转染RAW264.7细胞后,其LOX-1基因和蛋白表达显著下调, 同时可抑制巨噬细胞源性泡沫细胞形成及对Dil-ox-LDL的摄取。结论：成功构建了能有效抑制LOX-1 mRNA表达的发卡样LOX-1基因RNA干扰表达载体,并在一定程度上能抑制巨噬细胞源性泡沫细胞的形成,为进一步利用RNA干扰技术防治动脉粥样硬化提供理论基础。     

特异AT序列结合蛋白-1促进胰岛素样生长因子 结合蛋白-2在K562细胞中的表达

探讨过表达特异AT序列结合蛋白-1 ( special AT-rich sequence binding protein ,SATB1)核基质结合区（MAR）结合蛋白对胰岛素样生长因子结合蛋白-2（IGFBP2）基因表 达的影响,并对其影响机制进行初步探索．首先用脂质体将SATB1的真核表达载体pcDNA3.1-SATB1转染至K562细胞,通过6周G418的筛选获得阳性克隆,RT-PCR、实时PCR及Western 印迹验证过表达情况,对阳性克隆细胞中IGFBP2的表达用RT-PCR、实时PCR及Western 印迹方法进行检测;然后用RNAi的方法干扰阳性细胞中SATB1 的表达后,同样用上述3种方法再次检测IGFBP2的表达状况;用生物信息学方法对IGFBP2基因进行MAR序列与SATB1结合位点搜索分析,寻找SATB1影响IGFBP2基因表达的机制．结果显示,在稳定转染的情况下,实验组K562-SATB1细胞与转染空载体pcDNA3.1的K562-3.1细胞和未转染细胞K562相比,IGFBP2 mRNA水平上调了近7倍,而蛋白水平变化不明显．RNA干扰后,IGFBP2的表达在mRNA水平也相应下调,蛋白水平的变化同样不明显．通过生物信息学分析发现,IGFBP2第1个内含子中可能存在2. 5 kb MAR样序列,且MAR样序列上存在多个SATB1的潜在结合位点．综上所述,过表达SATB1可以使K562细胞中IGFBP2 mRNA表达水平提高,而且其调控机制可能与SATB1直接和IGFBP2基因中的MAR样序列结合有关．     

miR-29a对于膝关节骨性关节炎大鼠滑膜损伤中的保护作用研究

摘要 目的：探讨miR-29a对于膝关节骨性关节炎（KOA）大鼠滑膜损伤中的保护作用研究。方法：采用前交叉韧带横断法（ACLT）建立KOA大鼠模型。大鼠注射microRNA阴性对照和miR-29a。通过实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测KOA滑膜组织和滑膜细胞中miR-29a的表达。RT-qPCR和蛋白免疫印迹试验检测Toll样受体4/髓样分化蛋白88/核因子κB（TLR4/Myd88/NF-κB）信号通路相关蛋白的表达。检测KOA滑膜组织及滑膜细胞中炎症因子的表达水平。结果：KOA滑膜组织和滑膜细胞中miR-29a表达下调。上调miR-29a可抑制KOA大鼠滑膜细胞的炎症反应,促使KOA大鼠的TLR4/Myd88/NF-κB信号通路失活。结论：上调miR-29a可通过TLR4/Myd88/NF-κB信号通路失活化抑制KOA大鼠滑膜细胞炎症反应,从而保护滑膜损伤。     

条件性感染金黄色葡萄球菌关节炎小鼠模型的建立和分析

目的建立与分析条件性感染金黄色葡萄球菌感染关节炎模型,为关节炎机理研究及药物开发提供动物模型。方法先对小鼠进行环磷酰胺免疫抑制处理,再尾静脉接种金黄色葡萄球菌,通过关节表观特征观察、关节炎指数分析和病理观察评分对模型进行评价。结果接种后第1天开始,小鼠关节部位轻微肿胀,关节组织病变由少量滑膜增生且排列疏散紊乱,发展至滑膜增厚,往关节腔内延伸生长,中性粒细胞浸润增多等病理变化。结论成功建立条件性感染SA模型,能在较短时间内模拟人关节炎的临床症状和病程发展,且在感染和免疫机理方面体现了人关节炎发病病因。     

Wnt/beta-catenin 信号通路活化的人滑膜细胞对软骨细胞的影响

目的：研究Wnt/beta-catenin 信号通路活化的人滑膜细胞对软骨细胞的作用,探讨骨关节炎（OA）发生及进展的可能途径和分子 机制。方法：beta-catenin 过表达慢病毒载体转染正常人滑膜细胞,荧光显微镜观察病毒转染情况,Western blot方法检测滑膜细胞核 内beta-catenin 蛋白表达。Transwell 小室共培养人滑膜细胞与正常人软骨细胞,倒置显微镜观察滑膜细胞对软骨细胞生长形态变化 的影响。酶联免疫吸附（ELISA）法检测不同时间点共培养体系中软骨细胞培养上清液中MMP-7 的变化,找出MMP-7 变化最明 显的时间点。同时在最佳时间点ELISA 方法检测软骨细胞培养上清液CTX-II、COMP的水平。结果：慢病毒转染滑膜细胞后,荧 光显微镜下可见多数滑膜细胞表达荧光,Western blot检测发现滑膜细胞胞浆及胞核中茁-catenin 表达明显上调（P<0.01）。通路活 化的人滑膜细胞与软骨细胞共培养后,光镜下观察软骨细胞生长形态变化不明显,但随共培养时间的延长软骨细胞生长受到抑 制,胞体边缘发白,贴壁强度降低。ELISA 结果显示通路活化的人滑膜细胞与软骨细胞共培养后软骨细胞上清液中MMP-7表达 明显升高,与正常组相比有显著差异（P<0.01）,软骨细胞上清液MMP-7 的变化有一定的时间依赖性,在共培养2 h、6 h、12 h时逐 渐升高,24 h 时略有降低,且在共培养6 h 时变化最为明显。而共培养6 h时通路激活组软骨细胞培养上清液中COMP、CTX-II水 平与正常对照组相比均明显升高（P<0.01）。结论：茁-catenin 过表达慢病毒转染正常人滑膜细胞可成功激活Wnt/茁-catenin 信号通 路,Wnt/茁-catenin 信号通路活化的滑膜细胞可影响正常软骨细胞的生长,并引起滑膜- 软骨体系内环境异常,促使软骨基质的降 解,这可能是滑膜炎促进OA 发生、发展的机制之一。     

FK506增强雷公藤内酯醇对滑膜成纤维细胞COX—2和iNOS表达的抑制作用

研究了FK5 0 6对雷公藤内酯醇抑制类风湿关节炎滑膜成纤维细胞 (RASF)增殖和表达环氧化酶 2 (COX 2 )、诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)及合成前列腺素E2 (PGE2 )、一氧化氮 (NO)的影响 ,探讨了FK5 0 6联合雷公藤抗类风湿作用的机制。分离培养人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞 ,用不同浓度的FK5 0 6处理后 ,加或不加雷公藤内酯醇 (TP)和TNFα ,分别用 [3H] TdR法、竞争ELISA和硝酸酶还原法、半定量逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)法、细胞酶免疫法及Western印迹法检测滑膜细胞的增殖活性、细胞培养上清液中PGE2和NO的水平、滑膜细胞COX 2和iNOSmRNA表达水平及蛋白质表达水平。同时提取各组细胞蛋白质 ,测定其核转录因子NF κB活性。结果表明 ,FK5 0 6( 10～ 10 0 0nmol/L)及低浓度的TP( 10 μg/L)单独对TNFα活化的RASF表达COX 2、iNOS及合成PGE2、NO均无明显的抑制作用 ;FK5 0 6与低浓度的TP联合作用后 ,对活化的RASF具有不同程度的抑制作用 ,并与联合的FK5 0 6浓度 ( 10～ 10 0 0nmol/L)呈明显正相关性 ,且两者联合对TNFα激活的RASF核转录因子NF κB活性有明显的抑制作用。实验未观察到FK5 0 6对TP抑制滑膜细胞增殖的影响。以上结果说明 ,FK5 0 6可显著增强TP对滑膜细胞COX 2和iNOS的表达及其产物PGE2和NO合成     

肾小球系膜细胞中硫氧还蛋白1过表达对基质金属蛋白酶9表达的影响

为进一步探讨硫氧还蛋白1（thioredoxin1,Trx1）过表达对高糖环境下肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶9（Matrix metalloproteinase9．MMP0）表达的影响．采用RT-PCR和明胶酶谱法检测细胞中MMP-9mRNA和酶活性的变化．用脂质体介导瞬时转染法转染正义Trx1及反义Trx1,观察高糖环境Trx1过表达对MMP9表达的影响．结果表明．HBZY-1高糖组与正常糖组比较,MMP9mRNA在12h,24h,48h时表达增加（P〈0．05）,同时酶活性于12h、24h、48h也明显增高（P〈0．01）．转染正义Trx1组细胞,MMP．9mRNA水平及MMP9酶活性,在高糖组与正常糖组差异无统计学意义（P〉0．05）;但转染反义Trx1组和未转染组细胞的MMP9 mRNA水平及酶活性．高糖组均比正常糖组表达增加,差异有统计学意义（P〈0．01）．提示Trx1过表达可抑制高糖环境诱导的肾小球系膜细胞MMP9高表达．