在活细胞中应用FRET技术研究TGFβ/TβRI信号传导

转移生长因子β(TGFβ)信号传导通路参与调节细胞的增殖、分化、凋亡、细胞迁移等一系列细胞过程,与骨代谢疾病的发病机制密切相关.本研究根据荧光共振能量转移(FRET)技术原理,构建包含CFP-TβRI-YFP融合蛋白的TβRI生物传感器,转染293T细胞,观察转染效率.以TGFβ1为诱导剂,激活TGFβ/TβRI信号传导通路,在活细胞生理条件下,动态监测TβRI生物传感器的FRET效应.结果表明,成功构建了TβRI生物传感器,转染细胞效率达50%,在TGFβ1诱导刺激6min后,FRET效率增加并达到最大值,该过程经历9 min后,随时间的延长,FRET效率下降.研究结果表明:在活细胞生理条件下,TGFβ1/TβRI信号转导过程存在一定的时间特异性.     

关节腔注射强力霉素对兔膝骨关节炎模型的影响

目的:研究关节腔内注射强力霉素对兔制动性骨关节炎模型的影响.方法:30只新西兰大白兔随机分成正常组6只及实验组24只,试验组左膝关节伸直位石膏固定4周随机选取6只处死左膝关节取材证实造模成功后剩余18只为左膝骨关节炎模型,随机分为治疗组、阴性对照组和模型对照组,治疗组每日给予1.33%的强力霉素0.3毫升左膝关节腔内注射,阴性对照组每日给予生理盐水0.3毫升左膝关节腔注射,模型对照组不做处理,于8周处死取材.观察指标包括关节软骨大体形态,软骨Mankin's评分,软骨细胞基质金属蛋白酶-3(MMP-3)表达及滑膜细胞白介素-1(IL-1)表达.结果:强力霉素治疗组软骨面退变明显轻于模型组及生理盐水对照组,软骨大体评分,Mankin评分,MMP-3表达及滑膜IL-1表达亦显著降低.结论:强力霉素关节腔内注射对兔制动性骨关节炎模型软骨退变有明显的缓解作用.     

反义uPAR质粒对从大鼠滑膜VEGF影响的初步研究

目的:初步探讨反义uPAR质粒对在佐剂关节炎大鼠滑膜组织中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法:40只雄性SD大鼠,其中8只为正常对照组,其余32只建立完全弗氏佐剂(CFA)诱导的大鼠从模型,15日后将造模成功的大鼠随机分为3组,每组8只,为模型对照组、空质粒治疗组、重组质粒治疗组,后2组踝关节腔内分别注射空质粒及重组反义uPAR表达质粒,观察大鼠的一般情况、关节炎指数,关节滑膜大体变化及免疫组化法检测踝关节滑膜uPAR,VEGF的表达.结果:重组质粒治疗组关节炎指数明显低于模型对照组及空质粒治疗组(p＜0.01).uPAR和VEGF定位于滑膜组织细胞质,uPAR及VEGF表达结果,重组质粒治疗组明显低于模型对照组、空质粒治疗组(p＜0.01).反义uPAR表达质粒可以显著抑制大鼠滑膜组织uPAR、VEGF的表达.结论:反义uPAR表达质粒对AA大鼠滑膜血管翳及VEGF表达的抑制作用,可为类风湿性关节炎的基因治疗提供理论依据.     

甲醛诱导Tau蛋白形成“孔道样”聚集结构

尽管Lin等(University of California, Santa Barbara)就蛋白构象病中细胞死亡的机制提出了“非特异性淀粉样离子通道”(aspecific amyloid ion channels)学说,但到目前为止,尚未发现神经Tau蛋白能形成“孔道样”聚集结构,也未寻找到可以导致蛋白质形成“孔道样”聚集结构的诱导剂．依据本实验室提出的“散发性老年痴呆发生发展中的内源性甲醛慢性损伤”假说,采用一定浓度的甲醛与Tau蛋白进行温育,观察到甲醛可以明显诱导Tau蛋白分子聚集并形成淀粉样沉积物,同时也观察到了Tau蛋白“孔道样”聚集结构．上述结果为探索甲醛诱导Tau蛋白错误折叠形成的产物导致细胞代谢障碍和死亡的机制提供了新的研究思路．