生物信息大分子结构修饰对其功能的影响——酵母甘露聚糖硫酸酯化衍生物的制备及其对HIV-1细胞生长抑制效应的初步研究

研究由安徽大学ADF实验室以拟规模化环保型循环工艺生产流程分离、提取、纯化制得的生物多糖-酵母甘露聚糖(Yeast Mannan,简称Man),在对其结构、性质和生物活性研究的基础上,进一步对其结构进行硫酸酯化修饰,制得新产品硫酸酯化酵母甘露聚糖(Man-Sulfated),并探索Man、Man-Sulfated对HIV-1病毒细胞生长的抑制作用。研究结果表明:1)Man对宿主细胞C8166无毒性;2)实验用HIV-1病毒细胞对宿主细胞C8166有毒性,TCID50为1.1×10~6Cells/m L;3)用氯磺酸∶吡啶(2∶1)甲酰胺法制得的Man-Sulfated对宿主细胞C8166也无毒性,并具有抑制HIV-1病毒细胞生长的功能,而Man则无此新功能;4)Man-Sulfated具有抑制HIV-1生长的效能,其与硫酸酯化修饰Man结构时使用的硫酸酯化试剂类别、方法及反应条件的不同,而引起对Man结构、构象的修饰变化程度不同密切相关。浓硫酸酯化法对Man结构修饰太强烈,构象变化过大,影响其生物功能。     

生物大分子功能的研究:--酵母甘露聚糖对8.2Gy60Coγ-射线辐照小鼠的辐射防护作用

目的：为了解酵母甘露聚糖对小鼠辐射损伤的保护作用。方法：６０ Ｃｏ γ射线以８２ Ｇｙ 照射 ６０ 只小鼠,雌雄各半。其中 ３０ 只在辐照前 １０ 分钟腹腔注射 ４００ｍ ｇ Ｍ ａｎ／ｋｇ,另 ３０ 只注射生理盐水。结果：从比较研究项目：鼠的存活率,成活天数;４０ 天体重的动态变化;外同血 Ｗ Ｂ Ｃ、 Ｒ Ｂ Ｃ及 Ｐ Ｌ Ｔ 及脾指数等的数值差异上,均显示酸母甘露聚糖对６０ Ｃｏ γ射线辐射损伤有保护作用。同时也发现该保护作用存在性别敏感性差异。结论：酵母甘露聚糖是一种比较好的辐射防护剂;酵母甘露聚糖对雄性鼠辐射损伤的保护作用显著,有统计学意义（ Ｐ＜ ００１）。     

黄连素对小鼠S-180移植瘤的抑制作用

[目的]利用S-180荷瘤小鼠及细胞研究黄连素抑制肿瘤的作用及分子机制。[方法]利用免疫组织化学染色、WST1实验、流式细胞术及Real-time PCR等技术,检测黄连素抑制S-180肉瘤细胞的作用及机制。[结果]体内实验结果表明黄连素组生存时间明显延长(P 0. 05),抑瘤率为25. 19%,肿瘤直径(2. 11±0. 39)显著小于对照组(2. 48±0. 20),磷酸化组蛋白H3及Cyclin D1阳性细胞数目明显降低(P 0. 05)。体外实验结果表明黄连素可以抑制S-180细胞的生长,并诱导凋亡(P 0. 05),Real-time PCR结果表明,黄连素组C-myc、Cyclin D1、Bcl-2及FAS表达水平降低,Caspase-1及PGC-1α表达水平升高(P 0. 05)。[结论]黄连素在体内水平抑制S-180荷瘤小鼠肿瘤的增殖,延长生存时间,在体外水平抑制S-180细胞的生长并诱导凋亡,黄连素通过调控增殖、凋亡及代谢等相关基因发挥抗肿瘤作用。     

亮叶杨桐黄酮提取物抗瘤活性及其对小鼠p53基因表达活性的影响

本文从亮叶杨桐中分离提取出黄酮类生物活性物质,对进行小鼠体内抗肿瘤试验和小鼠S-180肿瘤细胞中p53基因表达抑制实验。研究结果表明,亮叶杨桐中总黄酮含量达28.4％,黄酮提取物在剂量50mg·kg~(-1)时对小鼠肉瘤S-180的抑瘤率为64.0％,对艾氏腹水癌(EAC)Ⅰ小鼠的生命延长率为51.2％,有显著的抗肿瘤作用,并且药效与用药量有关。同时发现,黄酮类提取物的抗肿瘤活性优于化疗药物呋喃氟尿嘧啶(Ftorafur)。RT-PCR实验结果表明,在剂量500mg·kg~(-1)时,黄酮类提取物可以明显抑制小鼠S-180肿瘤细胞中突变型p53基因的转录活性,其抑制程度和呋喃氟尿嘧啶相同。     

红曲多糖抑瘤作用初步研究

以昆明种小鼠为试验动物,通过皮下注射建立小鼠移植性S180肿瘤模型,红曲多糖灌胃2周后,摘取瘤体和脾脏,计算抑瘤率和脾指数,并用SPSS软件进行统计分析。结果显示,红曲多糖低、中、高剂量组均能抑制荷瘤小鼠的肿瘤生长,抑瘤率分别达24.70%、31.03%、39.82%,呈量效关系,对S180肉瘤生长有明显的抑制作用;红曲多糖能提高小鼠的免疫力,高剂量组免疫器官质量显著增加。研究表明红曲多糖有抗肿瘤作用,具有一定的开发价值。     

大豆多糖联合环磷酰胺对S180荷瘤小鼠抗肿瘤增效作用研究

目的 从免疫学角度研究大豆多糖对环磷酰胺的减毒增效作用及其机制.方法 选用昆明种小鼠80只,随机分为阴性对照;大豆多糖(SSPS)组:50、100、200 mg/(kg· d);阳性对照:环磷酰胺(CP) 25 mg/(kg·d);大豆多糖联合环磷酰胺组:(1)CP 25 mg/(kg·d)+SSPS mg/(kg·d)、(2)CP 25 mg/(kg·d)+SSPS 100 mg/(kg·d)、(3)CP25 mg/(kg·d)+SSPS200 mg/(kg·d);0.2 mL/只,腋下接种S180,腹腔给药,连续给药10d.测定大豆多糖联合环磷酰胺对S180荷瘤小鼠瘤重、胸腺指数、脾指数的影响,ELISA法检测S180荷瘤小鼠外周血血清中细胞因子IL-2含量的影响.结果 大豆多糖能够抑制S180荷瘤小鼠的肿瘤生长,其抑瘤率分别为24.10％、35.39％和39.75％,与环磷酰胺合用后其抑瘤率为89.87％、91.91％和92.63％(P＜0.05,P＜0.01),q值0.99 ～1.00,具有协同作用;且合用后提高了环磷酰胺所致免疫低下小鼠的胸腺指数和脾指数;并促进S180荷瘤小鼠分泌IL-2.结论 大豆多糖通过增加荷瘤小鼠免疫功能而减轻环磷酰胺对机体的毒副反应,增强其抗肿瘤作用.     

纳米中药对S180荷瘤小鼠肠道菌群影响的研究及其防治作用

目的研究纳米中药对S180荷瘤小鼠肠道菌群的影响及其抑制作用。方法将S180荷瘤瘤株以2×105/(0.2 m l.鼠)用注射器接种于小鼠右前肢腋下,建立实体瘤模型,肿瘤发生率为100%。观察小鼠的一般状态,用梯度稀释法和培养法测定小鼠4种肠道正常菌群,即乳酸杆菌、双歧杆菌、肠球菌、肠杆菌。用电子天平称瘤重并计算瘤抑制率。病理行HE(苏木精-伊红)染色,在光学显微镜下观察。结果与模型组比较,纳米中药组双歧杆菌和乳酸杆菌数量明显升高,肠球菌和肠杆菌数量明显减少,肿瘤坏死因子数量增加,抑瘤率达64%,病理显示肿瘤组织间坏死灶明显,有大量的炎性细胞浸润。结论纳米中药提高机体免疫屏障功能,增强药物的靶向性,扶植机体正常菌群的生长,实现抗肿瘤的目的。     

激光在研究生物大分子结构与功能中的应用——酵母甘露聚糖波谱性质和形成分子载体的初步研究

为了进一步了解酵母甘露聚糖的精细结构信息,以便研究其功能,我们采用本实验室“拟规模化制备酵母甘露聚糖新工艺”,从废啤酒酵母（工厂下脚料）和市售鲜酵母细胞壁中制取了纯化的酵母甘露聚糖（ｍａｎｎａｎ）。气相色谱法测定它们的糖组分和其相对含量,并且测定和比较分析酵母甘露聚糖与其组份糖的游离形式（甘露糖和葡萄糖）和酸解后的单体糖的可见—紫外吸收光谱和荧光发射光谱,和以Ｈｅ—Ｎｅ激光为激发光源的红外光谱。从中获得了：组份单糖聚合成甘露聚糖和多聚糖再分解成组份糖单体的光谱特征峰;和这些相关样品的光谱特征峰在聚合和分解过程中的变化与相应糖的细微结构变化的相关光谱信息。这些糖结构光谱特征相关信息为我们制备新型分子载体——甘露聚糖的聚合物（ｐｏｌｙｍａｎｎａｎ）和其功能研究提供了研究基础。     

亚砷酸对裸鼠宫颈癌移植瘤模型的干预研究

目的建立宫颈癌移植瘤模型,研究亚砷酸的体内干预效果及机制。方法将Hela细胞注射于裸鼠皮下接种,成瘤后腹腔分别连续注射亚砷酸、卡铂及生理盐水14d,观察肿瘤大小和裸鼠精神状态,用流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡和细胞周期。结果亚砷酸组小鼠精神状态良好。与对照组比较,亚砷酸组治疗7d后肿瘤生长速度减慢;治疗14d肿瘤重量显著性降低（P〈0．05）,抑瘤率达到35．8％,高于卡铂组的27．9％;治疗14d肿瘤细胞的凋亡率显著升高（P〈0．01）,增殖指数（PI）显著降低（P〈0．01）,处于G0／G1周期的细胞明显增多（P〈O．01）,处于G2/M周期的细胞明显减少（P〈0．05）。结论亚砷酸具有抑制宫颈癌移植瘤生长的作用,且未见明显毒副作用,其抑瘤的机理可能与诱导肿瘤细胞凋亡、干扰肿瘤细胞生长周期和抑制肿瘤细胞增殖有关。     

西南银莲花皂苷的抗肿瘤作用

目的：对西南银莲花中抑制人癌细胞生长的主要活性成分3－O－鼠李糖基（2）[葡萄糖基（4）]阿拉伯糖基－齐墩果酸（皂苷2）等进行动物体内抗癌活性试验研究。方法：用小鼠肉瘤S180实体模型观测腹腔注射和灌服两种给药途径的抑瘤率,结果:ip皂苷2为10mg/kg时抑瘤率为48．9％,po皂苷2为125,200和500mg/kg时抑瘤率分别为32．6％,39．3％和48．1％,但均不同程度地出现动物死亡,结论：不论腹腔注射[还是灌服给药,皂苷2对小鼠肉瘤S180生长均具有一定的抑制作用,但在有效剂量下已表现出一定的毒性。     

MTHF对C57BL/6鼠Lewis肺癌细胞生长的影响

通过观察MTHF纯体对C57BL/6鼠移植瘤细胞生长的影响,初步探讨MTHF抗肿瘤作用的机理。将42只接种Lewis肺癌LL2细胞的C57BL/6鼠随机分成对照组、MTHF组和顺铂组。分别处理后观察各组肿瘤生长情况,于接种22 d后处死荷瘤鼠,收集肿瘤标本后测量瘤体质量,并进行电镜以及组织学分析,通过免疫组化检测肿瘤组织PCNA、Bcl-2及Bax的表达。结果表明MTHF组、顺铂组抑瘤率分别为46.2%、54.5%。电镜显示MTHF组出现细胞凋亡。MTHF处理Lewis肺癌细胞后,PCNA和Bcl-2基因下调,Bax基因上调。MTHF可显著抑制C57BL/6鼠移植瘤肺癌细胞的生长,其机制可能与诱导Lewis肺癌细胞凋亡并抑制其增殖有关,是一种有前景的抗肿瘤药物。     

西施舌多糖对人食管鳞癌裸鼠移植瘤作用的研究北大核心CSCD

构建人食管鳞癌EC-9706细胞裸鼠移植瘤模型,研究西施舌多糖对人食管鳞癌EC-9706细胞裸鼠移植瘤生长的影响。将移植瘤裸鼠随机分成5组,每天分别腹腔注射生理盐水(NS)、环磷酰胺(CTX,5 mg/kg)、西施舌多糖3个剂量(100、200、300 mg/kg),2周后,每3 d用游标卡尺测量肿瘤体积。实验持续26 d,实验结束后,处死裸鼠,称瘤重,计算抑瘤率。结果表明,不同浓度西施舌多糖对人食管鳞癌裸鼠移植瘤生长均有抑制作用,且西施舌多糖各剂量组中抑瘤率呈现剂量-效应关系,其中西施舌多糖300 mg/kg实验组效果最佳,抑瘤率达28.85%。     

人骨骼肌肌钙蛋白C在大肠杆菌中的表达及其抗肿瘤作用

为了探索重组人骨骼肌型肌钙蛋白C(rhTnC)的抗肿瘤作用,采用PCR技术,从人乳腺cDNA文库中获得编码TnC的cDNA序列,在大肠杆菌中进行了表达.经镍柱亲和层析纯化后,分别检测其在体外对人脐静脉内皮细胞生长的抑制作用与对小鼠异位移植肿瘤(S-180)生长的抑制作用.结果表明,rhTnC在大肠杆菌中呈可溶性表达.分离纯化后的rhTnC在体外对人脐静脉内皮细胞生长呈剂量依赖性抑制(IC50为7.5μg/ml);对小鼠异位移植肿瘤的生长也有明显的抑制作用,在20mg/(kg·d)剂量下对S-180的抑制率为64.4%.以上结果说明,rhTnC可抑制血管内皮细胞生长,并具有抗肿瘤作用.     

西施舌多糖对人食管鳞癌裸鼠移植瘤作用的研究

构建人食管鳞癌EC-9706细胞裸鼠移植瘤模型,研究西施舌多糖对人食管鳞癌EC-9706细胞裸鼠移植瘤生长的影响。将移植瘤裸鼠随机分成5组,每天分别腹腔注射生理盐水(NS)、环磷酰胺(CTX,5 mg/kg)、西施舌多糖3个剂量(100、200、300 mg/kg),2周后,每3 d用游标卡尺测量肿瘤体积。实验持续26 d,实验结束后,处死裸鼠,称瘤重,计算抑瘤率。结果表明,不同浓度西施舌多糖对人食管鳞癌裸鼠移植瘤生长均有抑制作用,且西施舌多糖各剂量组中抑瘤率呈现剂量-效应关系,其中西施舌多糖300 mg/kg实验组效果最佳,抑瘤率达28.85%。     

消痰散结方对人胃癌MNK-45荷瘤鼠机体HK-Ⅱ表达的影响

目的：观察消痰散结方对人胃癌MNK-45荷瘤鼠糖酵解相关蛋白己糖激酶-Ⅱ（HK-Ⅱ）表达的影响,探讨该方抗肿瘤机理。方法：30只小鼠随机分为生理盐水组、消痰散结方组和希罗达组,每组10只。建立人胃癌MNK-45皮下移植瘤模型。灌胃治疗六周后,称取各组瘤质量,计算抑瘤率和瘤体积。酶联免疫吸附测定法检测荷瘤鼠血清中HK-Ⅱ的水平;免疫组化方法检测瘤组织中HK-Ⅱ蛋白的表达;结果：消痰散结方可明显抑制裸鼠人胃癌MNK-45皮下移植瘤生长,下调荷瘤鼠血清及瘤组织中HK-Ⅱ表达水平。结论：降低荷瘤鼠血清和组织中HK-Ⅱ的表达,抑制荷瘤鼠机体糖代谢过程可能是该方抗肿瘤作用的机制之一。     

PLGA-5-氟尿嘧啶缓释微球治疗结直肠癌裸鼠的探讨

目的研究PLGA-5-氟尿嘧啶缓释微球瘤周给药对结直肠癌移植瘤的治疗效果。方法将60只结直肠癌荷瘤鼠随机分为6组,每组10只。A、B组瘤周注射PLGA-5-氟尿嘧啶缓释微球,5-氟尿嘧啶剂量分别为200mg/kg和100 mg/kg;C、D组瘤周注射5-氟尿嘧啶注射液,5-氟尿嘧啶剂量分别为200 mg/kg和100 mg/kg;E组瘤周注射PLGA微球,800 mg/kg;F组不给予任何治疗。于0、3、6、9、12、15d观察裸鼠生存状况、称体重、测量肿瘤大小。15d时处死动物,称瘤重,计算抑瘤率,绘制肿瘤生长曲线;取血行白细胞计数、肝肾功能检查。结果A、B组肿瘤生长曲线平缓,15 d时A、B组肿瘤体积与C、D、E、F组比较,结果差异有显著性,C、D组肿瘤体积与E、F组比较差异无显著性;A、B组抑瘤率分别为75%和62%,与C、D组比较,结果差异有显著性;A、B、C、D、E组体重在0 d及15 d与F组比较,差异无显著性,15 d时各组白细胞计数及肝肾功能检查值均在正常范围。结论PLGA-5-氟尿嘧啶缓释微球瘤周给药能有效抑制结直肠癌移植瘤的生长,且无明显的毒副作用。     

不同免疫力小鼠肾包膜下移殖人食管癌细胞株Ecal09的生长观察

结果显示将Ecal69移植于鼠肾包膜下,裸小鼠对移植瘤无排异反应,肿瘤持续生长;正常免疫力鼠移植瘤在6d时达生长高峰,并有炎症细胞浸润及结缔组织增生;免疫抑制鼠移植瘤于第8～10天达生长高峰,瘤体生长较大,提示免疫抑制鼠的免疫反应出现时间可较正常免疫力鼠推迟2～4d,故免疫抑制鼠可代替裸鼠用于短期肿瘤移植实验,优于正常免疫力小鼠。     

藏红花素对人膀胱移行细胞癌T24细胞裸鼠移植瘤的实验研究

目的检测藏红花素（crocin）对人膀胱移行细胞癌T24细胞株裸鼠移植瘤的作用。方法12只裸鼠右后腿背侧皮下接种T24移植瘤细胞后随机分为PBS对照组（6只）和50mmol/L藏红花素治疗组（6只）。从接种后第28d开始,每3d一次于肿瘤局部注射给予PBS或藏红花素,每3d测量1次肿瘤大小,并绘制移植瘤生长曲线;处理后第21d杀鼠摘取移植瘤,光镜、电镜观察肿瘤组织形态改变;RT-PCR检测Bcl-2、Bax mRNA表达;SP-免疫组织化学法分析sur-vivin、cyclinD1蛋白表达。结果藏红花素对人膀胱癌T24细胞裸鼠移植瘤的生长具有抑制作用,抑制率达28.7%。HE染色结果显示肿瘤标本内出现片状坏死灶;电镜观察可见凋亡的形态学改变;RT-PCR检测结果显示Bcl-2的表达水平下降,而Bax的表达水平上调;免疫组化结果显示经藏红花素处理后survivin、CyclinD1的表达下调。结论藏红花素能够抑制人膀胱癌T24细胞裸鼠移植瘤的生长,作用的分子机制与下调Bcl-2、survivin、cyclinD1和上调Bax基因表达有关。     

望江南总蒽醌苷抗肿瘤作用的研究

探讨望江南总蒽醌苷(CSAG)的抗肿瘤作用及其作用机制.利用MTT法检测望江南总蒽醌苷对肝癌细胞HepS、肺癌细胞(A549)、小鼠肉瘤(S180)腹水型肿瘤细胞等肿瘤细胞和人正常肝细胞L-02增殖的影响;实体瘤称重法测定CSAG对肝癌(HepS)实体瘤的抑制情况,将接种肿瘤的小鼠分成5组,每组6只小鼠,雌雄各半,给药12 d,停药后24 h处死动物,秤鼠体重,剥离出肿瘤,秤瘤重,测定生化指标.结果显示,CSAG对以上肿瘤细胞的增殖均有抑制作用,对肝癌细胞荷瘤小鼠肿瘤生长具有明显的抑制作用;同时可增加胸腺指数和脾指数.因此,CSAG具有明显的抗肿瘤效果,其抗肿瘤作用可能与提高机体免疫力和诱导细胞凋亡有关.     

中药麝香胶囊抑瘤作用的实验研究

目的探讨中药麝香胶囊对小鼠实验性肿瘤的疗效。方法昆明小鼠分别接种艾氏腹水癌、S-180、肝癌细胞株（hepatocellular carcinoma,HCC）三种癌细胞株,接种24h后开始给予中药麝香胶囊,每日1次,共10d。分高、中、低三个剂量给药（4、2、1g／kg以主药麝香药量计）。阳性对照以天仙丸胶囊（1g／kg）一次性灌服。阴性对照组以同体积生理盐水灌服。接种实体瘤动物于第10天处死,称瘤重,计算抑瘤率;接种腹水瘤动物,观察存活时间,计算生命延长率。结果中药麝香胶囊对实体癌有一定的抑瘤作用,但未达到药典规定的抑瘤率30％的要求;对腹水癌也有一定的抑瘤作用,但也未达到药典规定生命延长率50％的要求;统计学分析（P〉0．05）差异没有显著性。结论中药麝香胶囊抑瘤作用不明显,其配方及剂型有待进一步研究与改进。