丝瓜籽中蛋白质生物合成抑制蛋白的分离、纯化及性质研究

丝瓜（Ｌｕｆｆａｃｙｌｉｎｄｒｉｃａ）种籽,经捣碎、抽提、硫酸铵分级沉淀,ＣＭ－５２离子交换层析,Ｓｅｐｈａｃｒｙ１Ｓ－１００分子筛,阳离子交换ＦＰＬＣ等步骤,分离到两种单链蛋白质生物合成抑制蛋白：Ｌｕｆｆｉｎ－Ａ和Ｌｕｆｆｉｎ－Ｂ。它们都是等电点接近１０的碱性蛋白,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定分子量分别约为２７ｋｄ和２８ｋｄ,氨基酸组成分析表明两者具很大同源性,但免疫双扩散及ＥＬＩＳＡ检测证明两者的免疫原性有差异。Ｌｕｆｆｉｎｓ对兔网织红细胞裂解液的蛋白质生物合成有强烈的抑制作用,ＩＣ５０分别为１．４×１０－１１ｍｏｌ／Ｌ和２．０×１０－１１ｍｏｌ／Ｌ,比ＴＣＳ的２．９×１０－１０ｍｏｌ／Ｌ低得多。因而,Ｌｕｆｆｉｎｓ很有可能成为肿瘤导向药物的高效＂弹头＂。     

一组丝瓜籽小分子核糖体失活蛋白LuffinS的分离,纯化 …

通过硫酸铵分级沉淀、ＣＭ－５２阳离子交换层析、ＨＲＬＣ分子排阻层析及ＦＰＬＣ Ｍｏｎｏ Ｓ离子交换层析等步骤,从丝瓜籽中分离到一组分子量为８ｋＤ左右的小分子核糖体失活蛋白－ＬｕｆｆｉｎＳ１、ＬｕｆｆｉｎＳ２、ＬｕｆｆｉｎＳ３。末端分析结果表明,它们的Ｎ端氨基酸分别为Ａｌａ、Ｐｒｏ和Ｔｈｒ。氨基酸序列分析确定了ＬｕｆｆｉｎＳ２的Ｎ端９个氨基酸的序列是Ｐｒｏ－Ａｒｇ－Ｇｌｙ－Ｇｌｎ－Ａｌａ－Ｐｈｅ－Ａ     

腺苷转运体亲和层析分离

本文合成了一种腺苷亲和层析凝胶,并采用亲和层析法从牛脑细胞膜上分离出了几种膜上结合的腺苷结合蛋白质。这些蛋白质在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳凝胶上为单一或主要的蛋白带,分子量分别为６４ｋｄ,４５ｋｄ,３５ｋｄ。腺苷转运体抑制剂潘生丁和ＮＢＭＰＲ对６４ｋｄ蛋白与＾３ｈ－腺苷的结合抑制作用远强于腺苷受体的激动剂ＮＥＣＡ和Ｒ－ＰＩＡ;这表明６４ｋｄ蛋白为牛脑细胞膜上结合的腺苷转运体。     

天花粉同工凝集素－1双链的拆分和鉴定

天花粉同工凝集素－１经巯基乙醇还原,碘代乙酰胺保护,其链间二硫键被打开,但仍非共价结合在一起。我们利用尿素变性的Ｑ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换层忻分离了此凝集素的两条链。氨基酸组成测定与其他３种肽链作一比较,它们都含有较多的酸性和羟基氨基酸。蛋白质印迹显示ＴＫＬ的抗血清不仅能与ＴＫＬ－１的两条链分别反应,也能与天花粉毒蛋白及蓖麻毒蛋白的Ａ链起作用。溴化氰裂解的ＳＤＳ－ＰＡＧＥＲ肽谱表明天花粉凝集素的两条链与天花粉毒蛋白含有类似的裂解片段,在分子量１６ｋｄ左右有相同的电泳条带。ＴＫＬ－１两亚基的Ｎ末端序列已经测定,同源性比较发现其３３ｋｄ亚基的Ｎ末端序列与天花粉毒蛋白、蓖麻毒蛋白的一些肽段类似。迄今已有的证据表明ＴＫＬ与ＴＣＳ等是一些非常相关的蛋白质。     

蛇毒蛋白C激活物的初步研究

目的：研究蝮蛇毒蛋白Ｃ激活物的分离纯化与理化性质。方法：经ＤＥ５２－纤维素、ＣＭ－Ｓｐｈａｄｅｘ Ｃ－５０、Ｇ－７５柱层析,从安徽芜湖产蝮蛇（Ａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎ ｈａｌｙｓ）蛇毒中纯化一种均一的蛋白Ｃ激活物（ＰＣＡ）。结果：ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定分子量约为１５５０００Ｄａ,ＩＥＦ－ＰＡＧＥ测定等电点为４．８。它能使人血浆的ＫＰＴＴ明显延长,显示出强烈的抗凝活性。通过中和试验与显色肽定量实验表明,     

重组人GM－CSF／MCAF融合蛋白抗血清的制备与鉴定

重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）和人单核细胞趋化激活因子（ＭＣＡＦ）融合蛋白经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５和ＣＭ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ两步柱层析,获得了电泳纯的ＧＭ－ＣＳＦ／ＭＣＡＦ融合蛋白。为进一步研究其结构与功能,我们以纯化的该融合蛋白为抗原免疫家兔制备抗血清。ＤｏｔＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ试验表明,该抗血清效价高、特异性好,可分别与ＧＭ－ＣＳＦ／ＭＣＡＦ、ＧＭ－ＣＳＦ和ＭＣＡＦ发生反应。     

重组人GM－CSF／MCAF融合蛋白抗血清的制备与鉴定

重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）和人单核细胞趋化激活因子（ＭＣＡＦ）融合蛋白经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５和ＣＭ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ两步柱层析,获得了电泳纯的ＧＭ－ＣＳＦ／ＭＣＡＦ融合蛋白。为进一步研究其结构与功能,我们以纯化的该融合蛋白为抗原免疫家兔制备抗血清。ＤｏｔＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ试验表明,该抗血清效价高、特异性好,可分别与ＧＭ－ＣＳＦ／ＭＣＡＦ、ＧＭ－ＣＳＦ和ＭＣＡＦ发生反应。     

条斑紫菜中R－藻红蛋白的生化特性

条斑紫菜的Ｒ－藻红蛋白（Ｒ－ＰＥ）,在ＣＭ－５２柱上用含８ｍｏｌ／Ｌ脲的０．０２ｍｏｌ／Ｌ乙酸铵缓冲液（ｐＨ＝５．０５）洗脱,观察到３条色带,经吸收光谱测定表明,它们分别是α、β、γ亚基。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定的α、β和γ亚基分子量分别是１７．０ｋｄ,１８．０ｋｄ和３１．７ｋｄ。Ｒ－ＰＥ中亚基的摩尔比是６α：６β：１γ。条斑紫菜的Ｒ－ＰＥ最稳定的聚集态分子量是２２９ｋｄ。各亚基的发色团含量：α亚基含２个藻红胆素（ＰＥＢ）,β亚基含１个ＰＥＢ和０．５个藻尿胆素（ＰＵＢ）,γ亚基含２个ＰＥＢ和３个ＰＵＢ。结合Ｒ－ＰＥ和各亚基的氨基酸组成分析,条斑紫菜的Ｒ－ＰＥ亚基组成是（αβ）６γ。     

在酵母体内用RNA聚合酶II表达大肠杆菌tRNA^Sec基因

我们将大肠杆菌的硒代半胱氨酸ｔＲＮＡ基因（ＳｅｌＣ基因）连接到分泌型表达质粒ＰＶＴ１０２Ｕ－αＭＦＬ中,并调整好阅读框架,使蛋白翻译的终止密码子位于ＳｅｌＣ基因的下游。将该质粒转化酵母,通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析,在ＳＤ液体培养基中检测出７￣８ｋｄ的蛋白条带,这与理论值是相符合的。同时,我们抽提出酵母的总ＲＮＡ用互补与该ｔＲＮＡ ＴψＣ茎环区的２１－ｍｅｒ寡核苷酸,经５＇标记后作为探针进行Ｎｏｒｔｈ     

血链球菌拮抗可疑牙周病原菌机理探讨：Ⅱ细胞素的产生及…

血链球菌产生细菌素至培养上清液中,无论是需氧或厌氧环境,血链球菌均可产生血逻素。采用无水乙醇沉淀法提取血链球菌培养上清液中的蛋白质,运用ＳＤＳ－ＰＡＥＧ分析其蛋白成份,发现１３０ｋｄ、１２０ｋｄ、７４ｋｄ、和５６ｋｄ四条蛋白区带,通过电泳凝胶弥散法抑菌试验显示,５６ｋｄ蛋白带具很强的抑菌活性,提示此蛋白质可能为血链素的所在位置。     

血链球菌拮抗可疑牙周病原菌机理探讨Ⅱ细菌素的产生及影响因素

血链球菌产生细菌素（血链素）至培养上清液中，无论是需氧或厌氧环境，血链球菌均可产生血链素。采用无水乙醇沉淀法提取血链球菌培养上清液中的蛋白质，运用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析其蛋白成份，发现有１３０ｋｄ、１２０ｋｄ、７４ｋｄ、和５６ｋｄ四条蛋白区带，通过电泳凝胶弥散法抑菌试验显示，５６ｋｄ蛋白带具很强的抑菌活性，提示此蛋白质可能为血链素的所在位置。     

Epstein─Barr病毒膜抗原在中国仓鼠卵巢（CHO）细胞中的表达

将切去３’端穿膜序列的ＥＢ病毒膜抗原（ＭＡ）基因,插入ｐＳＶ２－ｄｈｆｒ质粒的ＳＶ４０早期启动子下游,构建了真核表达载体ｐＳＶ２－ｄｈｆｒＧＰＴＲ,使两个ＳＶ４０早期启动子分别调控ＭＡ和二氢叶酸还原酶（ｄｈｆｒ）基因。将该重组质粒转化ＣＨＯ－ｄｈｆｒ细胞,在选择培养基中筛选阳性克隆,用氨甲喋呤加压扩增,建立了表达ＥＢＶ－ＭＡ的克隆细胞系。ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析证明,所表达的蛋白的分子量大约为３４０ｋｄ和２２０ｋｄ。经过细Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ２Ｂ琼脂糖凝胶层析初步纯化的抗原与福氏佐剂混合免疫小鼠,２周后小鼠血清中出现明显的ｇｐ３４０／２２０特异性抗体,表明切去嵌膜区结构的ＥＢＶ－ＭＡ基因在ＣＨＯ细胞中的表达产物具有同天然膜抗原相似的分子量大小、糖基化程度、免疫特异性和免疫原性,可望成为ＥＢ病毒人用基因工程亚单位疫苗。     

番茄叶片胞外β—半乳糖苷酶的纯化和性质

健康或系统感染ＴＭＶ的番茄叶片胞外都存在高比活可溶性β－半乳糖苷酶。系统感染ＴＭＶ的番匣叶胞外提取液经冰冻干燥浓缩－２０℃丙酮沉淀、ＣＭ－ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－２５阳离子交换层析、ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５阴离子交换层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０凝胶层析纯化,获得ＰＡＧＥ和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ均一的β－半乳糖苷酶。该酶的分子量为７４ｋＤ,酶蛋白带能被过碘酸－Ｓｃｈｉｆｆ试剂染成档红色,属糖蛋白     

枸杞子糖蛋白的分离纯化,物化性质及糖肽键特征

从宁夏枸杞子提取得到的粗多糖,经ＤＥＡＥ－Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱层析,得到均一的枸杞子糖蛋白ＬｂＧＰ。分子量由ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定为８８ｋｄ,糖含量为７０％,糖组成为Ａｒａ：Ｇａｌ：Ｇｌｃ＝２．５：１．０：１．０,并含有其他１８种天然氨基酸。初步分析表明ＬｂＧＰ是Ｏ－连接的糖蛋白。     

GST融合蛋白在杆状病毒系统中表达的可溶性研究

将构建好的可表达ＧＳＴ融合蛋白的重组病毒ＡｃＭＮＰＶ－ＯＣＣ＾－－ＧＳＴ－６ｘＨｉｓ－Ｅｔｐ２８感染Ｓｆ９细胞,一定时间后取感染了病毒的细胞裂解物上清液进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析,结果显示５３ｋＤａ的融合蛋白（ＧＳＴ－６ｘＨｉｓ－Ｅｔｐ２８）呈不溶状态。在原有裂解液的基础上,加固体十二烷基肌氨酸钠致终浓度１．５％,并将Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００的比例由１％提高到２％。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果显示至少有１／     

甲基单胞菌Methylomonas sp.GYJ3中甲烷单加氧酶还原酶组分的纯化和性质

Ｍｅｔｙｌｏｍｏｎａｓｓｐ．ＧＹＪ３菌的甲烷单加氧酶（ＭＭＯ）粗酶提取液经ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ阴离子交换层析、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤层析和ＤＥＡＥ－ＴＳＫｇｅｌＨＰＬＣ分离纯化出ＭＭＯ还原酶组分．经ＨＰＬＣ分析,纯度大于９５％,纯化倍数为４．４,加入至ＭＭＯ羟基化酶和调节蛋白Ｂ的体系中表现比活为２２８ｎｍｏｌ环氧丙烷每分钟毫克蛋白．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳表明还原酶由一种亚基组成,分子量４２ｋＤ．ＩＣＰ－ＡＥＳ测定还原酶的Ｆｅ含量为１．８３ｍｏｌＦｅ每ｍｏｌ蛋白．ＵＶ－Ｖｉｓ光谱表明还原酶除２８０ｎｍ蛋白质特征峰外在４６０ｎｍ有最大吸收峰,且Ａ２８０ｎｍ／Ａ４６０ｎｍ为２．５０,与其它黄素一铁硫蛋白相似,推测还原酶可能含一个ＦＡＤ辅基和Ｆｅ２Ｓ２中心．在厌氧条件下,还原酶能够和ＮＡＤＨ作用,ＵＶ－Ｖｉｓ光谱分析表明还原酶４６０ｎｍ处特征吸收峰消失,说明在ＭＭＯ催化过程中还原酶接受ＮＡＤＨ的电子．ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ阴离子交换层析分离出调节蛋白Ｂ,部分纯化的调节蛋白Ｂ的分子量大约在２０ｋＤ,它能够提高ＭＭＯ比活性４０倍,ＭＭＯ还原酶和调节蛋白Ｂ单独存在时不具有ＭＭＯ     

重组人GM—CSF基因在昆虫细胞中的表达

利用苜蓿夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）带β－Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ基因标记的非融合蛋白基因转移载体ｐＢｌｕｅＢａｃ将人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ｈＧＭ－ＣＳＦ）基因成功地插入病毒ＡｃＮＰＶ的基因组中．ｈＧＭ－ＣＳＦ基因在感染重组病毒的草地夜蛾（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）培养细胞Ｓｆ９中得到表达,感染后的Ｓｆ９细胞培养液能刺激人骨髓细胞在体外形成典型的集落,表达水平可达２．７×１０５５ＣＦＵ／ｍｌ。以ｈＧＭ－ＣＳＦ单抗所作的ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｔｉｎｇ表明,表达的ｈＧＭ－ＣＳＦ对是３种糖基化程度不同的产物,分子量分别约为１５ｋｄ,１８ｋｄ和２０ｋｄ。     

PSI颗粒中LHPC—I含量与类囊体膜状态的关系

菠菜叶绿体经低渗ＫＣＬ或１ｍｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ溶液处理后,再用毛地黄苷法提取ＰＳＩ颗粒,前者ｃｈｌ ａ／ｂ高于后者。而ＥＤＴＡ－ＰＳＩ颗粒的耗氧活力极强,低温荧光发射具很强的Ｆ６８０。ＳＤＳ－凝胶电脉谱带也表明ＥＤＴＡ－ＰＳＩ颗粒具较浓的２０－２４ｋｄ谱带。凡此都说明ＥＤＴＡ－ＰＳＩ颗粒的ＬＨＰＣ－Ｉ含量远超过ＫＣＬ－ＰＳＩ颗粒的。而叶绿体经ＭｇＣｌ２、ＫＣｌ、ＥＤＴＡ溶液处理后,基粒类囊体膜垛叠     

热激蛋白的分子生物学研究进展

热激蛋白的分子生物学研究进展费云标,黄涛,舒念红,江勇（中国科学院发育生物研究所,北京１０００８０）ＡＤＶＡＮＣＥＳＯＦＭＯＬＥＣＵＬＡＲＢＩＯＬＯＧＹＯＮＨＥＡＴＳＨＯＣＫＰＲＯＴＥＩＮＳ￥ＦｅｉＹｕｎ－ｂｉａｏ;ＨｕａｎｇＴａｏ;ＳｈｕＮｉａｎ－...     

Gi和Go的同时纯化及其性质研究

经ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｃｅｌ、ＵｌｔｒｏｇｅｌＡｃＡ ３４、Ｈｅｐｔｙｌａｍ ｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ 和Ｂｉｏ Ｓｃａｌｅ Ｑ２等四步层析从牛脑皮层膜中同时纯化出抑制型Ｇ 蛋白（ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ Ｇ ｐｒｏｔｅｉｎ, Ｇｉ）和Ｏ型Ｇ蛋白（ｏｔｈｅｒ Ｇ ｐｒｏ－ｔｅｉｎ, Ｇｏ）．对Ｇｏ 的选择性激活使Ｇｉ 和Ｇｏ 的分离大为简化,并使二者的大量制备成为可能．纯化的Ｇ 蛋白的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ银染显示单一蛋白带,其结合［３５Ｓ］ＧＴＰγＳ的活性分别提高６８倍和１２４倍．用圆二色光谱法（ＣＤ）测量了纯化的Ｇ蛋白的二级结构．