九连小檗悬浮培养细胞生理生化特性的研究 Ⅴ．细胞生长与呼吸作用及对主要营养元素吸收、消耗的关系

叙述了九连小檗细胞悬浮培养细胞生长与呼吸作用及对主要营养元素吸收消耗的关系。细胞接种于新鲜培养液中,呼吸作用强度和对主要营养元素的吸收,消耗便迅速增加。接种后第６天,培养液中ＰＯ４＾３＾－几乎被耗尽,Ｋ＾＋和ＮＯ３的浓度也减少一半,细胞生长由延迟期进入起始生长期。至第８天呼吸强度达到高,细胞生长加,但细胞生长高峰延迟于呼吸高峰。随后,营养物质的消耗减少,呼吸降低,生长减慢,至静止期细胞生长停止,呼     

岩黄连细胞生长与营养物质消耗的动态学研究

在岩黄连细胞悬浮培养过程中,对培养液pH值,碳源、氮源和磷酸盐含量,以及细胞生物量和生物碱含量进行测定,分析其动态变化过程。结果显示培养液pH值在培养初期降低,后逐渐升高;碳源在培养过程中逐渐被利用,磷酸盐和氮源在培养中期几乎耗尽,其中磷酸盐的消耗速率最快;悬浮细胞的生长周期为20 d左右,第18天细胞鲜重和干重达最大,而第21天脱氢卡维丁和小檗碱的含量最高,分别为8.22mg/L和4.31mg/L。结果表明营养物质(碳、氮和磷)的吸收与细胞生长以及生物碱的合成密切相关,营养元素的相对消耗速率为磷>氮>碳,推测氮和磷是影响岩黄连细胞培养的主要因素。     

应用电导率监测红豆杉细胞悬浮培养中细胞生长与紫杉醇的累积

对中国红豆杉细胞悬浮培养过程中细胞生长和紫杉醇累积及培养液的电导率变化规律进行了研究,实验表明,细胞悬浮培养过程中随着细胞生物量与紫杉醇含量的增加,培养液的电导率逐渐下降,细胞生长和紫杉醇累积曲线与培养液的电导率曲线恰成镜像相关,当生物量达到最高时电导率达到并稳定于最低;紫杉醇累积的高峰滞后于细胞生物量的高峰2～3 d;电导率可作为红豆杉细胞培养中确定生物量和紫杉醇累积高峰期的监测指标.     

低密度和条件培养对红豆杉细胞生长的影响

红豆杉种胚来源的细胞,在改良Ｂ５液体培养基中继代培养的临界接种密度为鲜重４０ｇ／Ｌ．低密度培养下,１０－１６ｄ的条件培养液（ＣＭ）与新鲜培养液按５７：４３的比例混合时,能显著缩短细胞生长的延迟期,提高生长率,１００Ｌ生物反应器中,按４５．５％体积分数添加条件培养液,在鲜重２７ｇ／Ｌ低接种密度下培养５周,生物量增长９倍,达干重１４．３ｇ／Ｌ．对内源植物激素、精胺、维生素和氨基酸等的比较分析表明,吲哚     

吲哚乙酸、吲哚乙酸氧化酶和几种愈伤组织生长的关系

将大豆(Glycine max(L.)Merr.)哈密瓜(Cucumus melo L.var saccharinus)烟草(Nicotianatabacum L.)和毛白杨(Populus tometasa Carr.)的愈伤组织分别接种在附加IAA4毫克/升和激动素0.5毫克/升的Miller液体培养基上。烟草和哈密瓜的愈伤组织迅速地生长,能持续到50天左右;而大豆和毛白杨的愈伤组织生长缓慢,且20天就停止生长。 测定培养中IAA的消耗情况表明,接种大豆和哈密瓜的愈伤组织的培养液IAA消耗最快,到第四天就消耗完了;接种毛白杨愈伤组织的培养液IAA消耗次之,到第六天也消耗完了;接种烟草愈伤组织的培养液IAA消耗最慢,到第20天仍有加入量的2.8％。 培养液中IAA的消耗与吲哚乙酸氧化酶的活性有密切的关系。吲哚乙酸氧化酶的活性越高,IAA消耗越快,大豆、烟草和毛白杨愈伤组织的生长也随IAA的降低而减慢,但是哈密瓜愈伤组织的生长在IAA消耗完以后,仍能持续生长多日。因此可以认为有些愈伤组织的生长为其所包含的吲哚乙酸氧化酶的活性所制约;有的并不如此。     

人参细胞大量培养的研究

人参细胞培养液的 pH 值在培养过程中先迅速降低然后缓缓回升,后又趋于平稳。合成皂甙高峰在细胞生长对数期稍后出现。生产皂甙的最佳收获期,细胞悬浮培养为20—25天,细胞发酵培养为15—18天。细胞生长和皂甙累积要求有一个稳定而又适宜的 pH 值环境。发酵培养无论对细胞生长、培养规模、还是皂甙含量均是一种较为理想的培养方式。     

搅拌式光生物反应器培养海带配子体细胞：不同脉冲补料方式的研究

本文以批次培养为对照,研究了七种脉冲补料方式对搅拌式光生物反应器中培养大型褐藻海带配子体细胞生长和培养液内氮磷营养盐消耗的影响,并首次探讨了脉冲补料方式下不同补料时间点和补料量的影响作用。培养条件设定为50 mg DCW (细胞干重) L-1接种密度、培养液为改良的APSW人工海水、光强60 µE m-2 s-1、光周期16/8 h L/D、通气速率和搅拌速率分别为50 mL min-1和100 rpm。结果表明少量补料利于细胞对氮磷的协同吸收,进而利于生物量扩增。当培养液内氮磷富足或耗尽时补料对于生物量大量生产效果甚微,可能由于氮磷吸收变缓、其储存现象显著,或是其吸收协同性降低。文中当细胞生长至对数中期开始频繁补加少量氮磷营养盐,即维持培养液内氮磷浓度在各自起始浓度的1/3至1/2之间,对生物量生产最有效,生物量增长倍数高达12.270倍。     

西洋参细胞大量培养的研究

当西洋参细胞培养在Ms培养液中,KN0₃含量提高一倍而去掉NH₄NO₃。时细胞生长速率和皂甙产量分别比在正常培养液中提高65．1％和166．2％。黑节草寡糖素和人参寡糖素均有利于西洋参细胞的生长和皂甙含量的提高,尤其能增加Rg组皂甙的含量。西洋参细胞悬浮培养以生产皂甙收获的最佳时期为培养25天以上,其合成皂甙的高峰在细胞生长的对数期稍后出现。细胞悬浮培养和发酵培养过程中均未见pH值回升的现象。pH值稳定的发酵培养和pH值任其变化的培养相比,其皂甙含量,生长速率和生物量均要高。最后对细胞的培养方式进行了比较。     

九连小檗悬浮培养细胞生理生化特性的研究——Ⅱ.干物质积累与过氧化物酶同工酶和蛋白质的变化

本文报道了九连小檗细胞悬浮培养过程干物质积累与过氧化物酶同工酶和可溶性蛋白质的变化。实验表明在悬浮培养过程中细胞干物质积累可分为四个时期,即延迟期、缓慢增重期、线性增重期和减慢静止期。过氧化物酶同工酶谱的变化与干物质积累相关,在延迟期和减慢静止期的同工酶谱带较少,活力较低,在增重期的同工酶谱带较多,活力较高。蛋白质含量在接种后的第2至5天达到高峰,随后便逐渐降低,这些大分子的变化是在一定条件下基因表达的引发或阻抑的结果。     

乳鼠外周神经雪旺氏细胞的体外培养和纯化的研究

本文取５～７天ＳＤ新生大鼠坐骨神经剪碎,用０．２５％胰蛋白酶及０．０３％胶原酶在３７℃消化４５分钟,吹打分散后接种于培养瓶。培养基为含１０％胎牛血清的Ｆ１０。接种后４８小时,加入阿糖胞苷（Ａｒａ－ｃ,Ｓｉｇｍａ）１０－５ｍｏｌ／Ｌ处理,４８小时后换每毫升含神经生长因子（ＮＧＦ）１００μｇ的培养液,刺激雪旺氏细胞（ＳＣ）生长５～７天。此时根据成纤维细胞去除的情况,可再次加入Ａｒａ－Ｃ１～２天或转为无血清培养基一周。这种抗有丝分裂法结合无血清培养法,既能有效去除成纤维细胞,又能减少对ＳＣ的损伤,获得的ＳＣ纯净度可达９８％。     

九连小檗悬浮培养细胞生理生化研究——Ⅳ.细胞生长与酯酶同工酶变化的关系

本文报道了九连小檗细胞悬浮培养过程中细胞生长与酯酶同工酶变化的关系。分析了25代及第10代和第25代不同生长时期的细胞和培养液的酯酶同工酶。结果表明,各代第18天的酯酶同工酶谱没有差异,而在生长周期中,不同时期的酶谱则有变化,对数期出现了新的谱带,这说明培养细胞的酯酶同工酶与细胞生长相关。     

云南红豆杉细胞的悬浮培养

在云南经豆杉细胞悬浮培养中,适宜的增减基为Ｂ５,接种量为０．５－０．８ｇ干重细胞／１００ｍｌ培养基,２,４－Ｄ浓度为１．０ｍｇ／Ｌ;培养细胞的生长周期约３０ｄ;增减基中较高浓度的蔗糖（４０ｇ／Ｌ）可提高紫杉醇含量;添加的椰子汁（ＣＭ）、酪蛋白氨基酸（ＣＡ）和水解乳蛋白（ＬＨ）３种有机添加剂均能提高培养细胞中紫杉醇的含量,但只有ＣＭ和ＣＡ能促进细胞的生长。于Ｂ５培养基中添国不同浓度的ＮＨ４ＮＯ３对培     

小鼠睾丸支持细胞体外培养特性

支持细胞是睾丸的重要组成部分,其主要功能是为生精细胞提供适宜的生长环境。从幼鼠睾丸中分离得到支持细胞,并通过苏木精-伊红和Fas-L免疫组化染色对分离得到的细胞进行了鉴定。通过对原代小鼠睾丸支持细胞的贴壁、生长和培养液中葡萄糖、谷氨酰胺、氨基酸等营养底物及其副产物乳酸、铵根离子等的代谢以及培养液渗透压和pH的研究,发现支持细胞的贴壁时间主要集中在接种后2～4h;当培养液中氨根离子浓度高于2.3mmol/L,渗透压高于326mosm/kg,pH≤6.8时支持细胞生长进入衰亡期;在氨基酸代谢方面,发现培养过程中丙氨酸和谷氨酸浓度迅速增加,缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸浓度略有降低,丝氨酸、精氨酸和甘氨酸浓度基本保持不变。因此培养液中铵根离子浓度的过量积累、渗透压和pH的异常和贴壁面积不足是限制支持细胞静态生长的主要因素。研究结果为支持细胞大规模培养及工艺优化奠定了基础。     

Vero细胞最佳培养体系筛选

为了筛选出适合Vero细胞生长的最佳条件,本研究分别对Vero细胞的培养液、传代比例和接种浓度进行了优化.首先将Vero细胞在不同组合培养液中进行连续3代传代培养,筛选出适宜Vero细胞连续稳定传代的最佳培养液组成.然后分别在不同的传代比例和接种浓度下进行连续3代培养,筛选出适宜Vero细胞连续稳定传代的最佳传代比例和接种浓度.最终结果显示,Vero细胞在1.296%MEM溶液与特级胎牛血清的组合优于其他组合,可满足Vero细胞连续稳定传代.并且在该培养基的培养下,1∶6的传代比例为最适宜Vero细胞的传代比例,3×10^4/cm^2的接种密度为最适宜Vero细胞的接种密度.本研究最终完成了Vero细胞最佳培养体系条件筛选,并证实该条件满足Vero细胞连续稳定传代.     

腐植酸对植物生理活动的影响

本文介绍了腐植酸的形成、提取、分类以及活性基团等方面的特征。腐植酸能影响植物的多种生理活动,包括植物的生长、营养元素的吸收、蛋白质和核酸的合成、光合作用、呼吸作用以及有些酶的活性等。腐植酸对植物的这些作用受自身不同成分、浓度、植物种类、外界营养条件等多方面的影响。本文也从细胞或分子水平讨论了腐植酸促进植物生长、影响营养元素吸收及促进呼吸作用的机理。     

不同碳源对悬浮培养玫瑰茄细胞呼吸强度及产生辅酶Q的影响

以蔗糖、葡萄糖、可溶性淀粉为３种不同碳源,以Ｂ５培养基为基础,研究在不同碳源情况下,悬浮培养玫瑰茄细胞的生长,以及培养过程中细胞的氧消耗速率,同时也考察了在整个细胞生长过程中,辅酶Ｑ的含量变化。结果表明,蔗糖和葡萄糖能有效支持玫瑰茄细胞的生长,其细胞活力也高,表现在呼吸强度较高;可溶性淀粉不能被植物细胞利用,不仅表现在细胞生物量低,而且细胞活力差,呼吸水平也较低     

新疆紫草细胞悬浮培养过程研究

新疆紫草细胞生长和紫草素合成之间属非生长偶联型,所以采用二步培养法研究悬浮培养过程。新疆紫草细胞悬浮培养的生长周期约为21 d,紫草素合成周期约为16 d。新疆紫草细胞生长阶段培养液的电导率与生物量呈线性负相关,随着生物量的增加,培养液的电导率降低。因此,可以通过测量电导率来预测培养体系中生物量的变化情况。细胞生长过程中硝酸盐、铵盐和可溶性糖的消耗与生物量的变化具有很好的线性相关性,基于硝酸盐、铵盐和可溶性糖的细胞收率系数分别为8.64、104.3和0.68 g/g。     

细胞工厂培养轮状病毒基因重配株Ls(G3型)条件的优化研究

目的以细胞工厂代替转瓶培养轮状病毒基因重配株Ls的可行性研究。方法采用细胞工厂与相应的转瓶培养工艺作对比,比较两种容器内细胞生长状态与病毒收获液滴度,并对细胞工厂培养条件进行了优化。结果以相同浓度接种细胞时,细胞工厂4 d长成单层,转瓶却需要7 d,经细胞仪计数后单位面积内细胞密度相当;以相同MOI接种病毒后,转瓶内的病毒于第7天病毒滴度达到峰值,细胞已完全脱落;细胞工厂于第3天病毒滴度达到峰值,并实现了3次收获。细胞工厂每次收获的病毒液滴度都稳定在一定范围,与转瓶相当。另外,细胞工厂培养条件优化结果表明,Vero细胞最佳接种浓度为3.0×104细胞/cm2,接种病毒的最适MOI为0.02~0.04。结论使用细胞工厂培养Ls株病毒不仅提高了效率,而且减少了培养空间,可替代转瓶规模化生产轮状病毒疫苗。     

HCO3^—对海生颗石藻细胞表面钙化和CO2固定作用的研究

颗石藻（ＥｍｉｌｉａｎｉａｈｕｘｌｅｙｉＨａｙｕａｎｄＭｏｈｌｅｒ）是海洋浮游生物中生物量最大的普生性种群。在添加了２０ｍｍｏｌ／ＬＨＣＯ－３的ＥＳＭ培养液中生长的Ｅ．ｈｕｘｌｅｙｉ,细胞表面形成颗石片落所固定的碳酸钙与细胞合成的有机质干重比达２．４７∶１,在不添加ＨＣＯ－３的ＥＳＭ培养液中生长的Ｅ．ｈｕｘｌｅｙｉ,细胞表面的碳酸钙与细胞合成的有机质干重比为０．０５∶１,脂类含量达细胞干重的１８６％。细胞钙化实验和扫描电镜分析证实,培养液中ＨＣＯ－３离子是控制Ｅ．ｈｕｘｌｅｙｉ细胞钙化的主要因素,Ｅ．ｈｕｘｌｅｙｉ细胞除了具有光合作用途径利用和固定ＣＯ２外,在一定ＨＣＯ－３离子的浓度条件下还具有另一条固定ＣＯ２的途径,形成以ＣａＣＯ３为主要成分的钙质片落（颗石片落）。Ｅ．ｈｕｘｌｅｙｉ细胞热转化成烃实验结果显示,富含脂类的Ｅ．ｈｕｘｌｅｙｉ在３００℃热解时产出的“氯仿沥青Ａ”、饱和烃和芳烃的量很高,其饱和烃产量可达细胞干重的２．８％,是一般藻类产烃量的６～１５倍。研究结果初步显示,Ｅ．ｈｕｘｌｅｙｉ是开展碳循环的环境优化研究和可再生生物能源研究良好的实验生物系统。     

腐植酸对植物生理活动的影响

本文介绍了腐植酸的形成、提取、分类以及活性基团等方面的特征。腐植酸能影响植物的多种生理活动,包括植物的生长、营养元素的吸收、蛋白质和核酸的合长、光合作用、呼吸作用以及有些酶的活性等。腐植酸对植物的这些作用受自身不同成分、浓度、植物种类、外界营养条件等多方面的影响。本文也从细胞或分子水平讨论了腐植酸促进植物生长、影响营养元素吸收促进呼吸作用的机理。