葡萄果实中脱落酸结合蛋白的存在及其性质

葡萄果实微粒体上存在高亲和力的脱落酸（ＡＢＡ）结合位点,这些位点与ＡＢＡ的结合具有饱和性,高亲和力及低容量,胰蛋白酶或ＤＴＴ处理可以使该位点的特异结合活性下降约９０％,表明此结合位点是一种蛋白质,故称为ＡＢＡ结合蛋白,它含有维系蛋白质特定构象的二硫键,该蛋白与ＡＢＡ反应的最适ｐＨ为６．０,说明与配基结合部位可能存在带有正电荷的氨基酸残基,结合活性在２５℃高于０℃,结合反应达到动态平衡需要３０ｍｉｎ,３０ｍｉｎ以后结合活性随时间延长而下降。该蛋白与ＡＢＡ结合反应的平衡解离常数为１７．５ｎｍｏｌ／Ｌ,最大结合容量（Ｂｍａｘ）为９８．４ｆｍｏｌ／ｍｇｐｒｏｔｅｉｎ。     

玉米根微粒体ABA结合蛋白的性质及逆境胁迫的影响

以玉米根微粒体为材料进行的微量放射配体结合（ＭＲＬＢ）实验表明玉米根微粒体膜上存在着ＡＢＡ结合位点,ＡＢＡ与ＡＢＡ结合蛋白（ＡＢＡ－ＢＰ）结合的最适ｐＨ为６．５,结合反应对温度（０℃和２５℃）不太敏感,ＡＢＡ与ＡＢＡ－ＢＰ的结合反应是一个动态平衡过程,５ｍｉｎ即可达最大结合（Ｂｍａｘ）的５０％,３０ｍｉｎ达到最大结合,１ｈ内基本保持不变。胰蛋白酶处理表明此结合位点为蛋白质,冻融实验则表明此蛋白与Ａ     

玉米根微粒体ABA结合蛋白的性质及逆境胁迫的影响

以玉米根微粒体为材料进行的微量放射配体结合（ＭＲＬＢ）实验表明玉米根微粒体膜上存在着ＡＢＡ结合位点,ＡＢＡ与ＡＢＡ结合蛋白（ＡＢＡ－ＢＰ）结合的最适ｐＨ为６．５,结合反应对温度（０℃和２５℃）不太敏感,ＡＢＡ与ＡＢＡ－ＢＰ的结合反应是一个动态平衡过程,５ｍｉｎ即可达最大结合（Ｂｍａｘ）的５０％,３０ｍｉｎ达到最大结合,１ｈ内基本保持不变。胰蛋白酶处理表明此结合位点为蛋白质,冻融实验则表明此蛋白与ＡＢＡ的结合不仅要求其自身具有特定构象而且需要有一定的膜脂环境,ＤＴＴ处理实验结果显示ＡＢＡ－ＢＰ中可能存在着二硫键。逆境处理可以提高玉米根微粒体膜对ＡＢＡ的结合活性,盐胁迫、渗透胁迫、干旱胁迫和热冲激处理分别使结合活性上升３４．９％、１７．８％、２３．１％和１３．３％。     

小麦叶绿体中细胞分裂素结合蛋白的特性

小麦叶绿体中的ＣＴＫ结合蛋白属热敏感蛋白,它与６－ＢＡ结合的最适温度约为２５℃;最适ｐＨ为８左右;在其蛋白分子上存在两类ＣＴＫ结合位点,高亲和力位点与６－ＢＡ结合的Ｋα值为１．１×１０－９ｍｏｌ／Ｌ,低亲和力位点的Ｋα值为９×１０－７ｍｏｌ／Ｌ;激动素、玉米素对６－ＢＡ的结合只有部分抑制作用,而ＡＢＡ、ＧＡ３、ＩＡＡ及腺嘌呤则无竞争作用。ＣＴＫ结合蛋白分子中的中性氨基酸含量很高,在中性介质中带弱负电。     

苹果果实细胞质中依赖活体组织的ABA高亲和力特异结合蛋白

将苹果（Malus pumila L.cv.Starkrimon)果肉微粒体和细胞可溶组分在含有^3H-ABA的缓冲介质中分别温育,仅在细胞可溶组分中测到微弱的^3H-ABA结合活性。但是,如何将果肉组织圆片在^3H-ABA缓冲介质中直接温育,经制备亚细胞组分后直接测定,在细胞可溶组分中测到很高的^3H-ABA特异结合活性。果肉圆片用沸水预先热处理使细胞可溶组分中的^3H-ABA结合活性完全丧失,说明ABA结合依赖于组织的活体状态。药理实验证明了ABA结合位点的蛋白质性质,同时证明该蛋白的活性中心具有－SH和丝氨酸基因。ABA结合蛋白对ABA的结合具有可饱和性、可逆性和高亲和力。Scatchard作图证明存在2种ABA结合蛋白,一种具有较高的亲和力,其解离常数（Kd)为2.9mmol/L,另一种亲和力相对较低,其Kd值为71.4nmol/L。用ABA结构相似物进行的竞争实验证明了ABA结合蛋白对配体结合的立体特异性。分析了ABA结合蛋白与ABA结合的时间曲线、pH和温度依赖性。本研究检测到的依赖活体组织的ABA结合蛋白可能是果实发育过程中介导ABA信号的受体。     

葡萄果实发育过程中脱落酸结合蛋白动力学特性的变化

联系葡萄果实发育不同阶段生长动态、果肉组织中糖、酸和ＡＢＡ 含量变化的测定, 利用微量放射配基结合法,通过Ｓｃａｔｃｈａｒｄ 作图,分析了巨峰葡萄（Ｖｉｔｉｓｖｉｎｉｆｅｒａ×Ｖ． ｌａｂｒｕｓｃａ）果实生长发育第Ⅰ期、第Ⅱ期、始熟期和第Ⅲ期膜联系的ＡＢＡ 结合蛋白的动力学特性参数,其解离常数（Ｋｄ） 依次分别为１７．５、５０．０、６．３、１３．３ ｎｍ ｏｌ／Ｌ;最大结合容量依次分别为９８．６、５２３．０、４１．６、８５．４ ｐｍ ｏｌ／ｇ 蛋白。这４ 个时期的Ｓｃａｔｃｈａｒｄ 图都是一条直线, 说明在同一发育时期,果实微粒体上可能存在一种相同的或若干种不同的但动力学特性相同或相似的高亲和力的ＡＢＡ 结合位点。ＡＢＡ 结合蛋白与ＡＢＡ 的亲和力在始熟期高于其它时期,特别是从第Ⅱ期到始熟期,亲和力提高了将近１０ 倍,而其浓度却在始熟期降到最低。始熟期果实组织中低浓度的ＡＢＡ 启动成熟的原因可能是由于ＡＢＡ 结合蛋白与ＡＢＡ 亲和力的提高。讨论了ＡＢＡ 结合蛋白在果实发育不同时期的功能,推测这种（些）蛋白可能是ＡＢＡ 作用的受体或载体     

脊髓损伤后脊髓神经细胞膜PAF受体特性的变化

采用３ＨＰＡＦ放射配体结合试验方法测定脊髓神经细胞膜上ＰＡＦ受体的特异性位点,观察脊髓损伤后２、６ｈ、１、３周脊髓神经细胞膜ＰＡＦ受体结合特性变化。结果显示,脊髓神经细胞膜上存在ＰＡＦ高、低亲和力结合位点,脊髓损伤后２、６ｈ、１周组ＰＡＦ受体高、低亲和力位点Ｋｄ值和Ｂｍａｘ均有不同程度下降,与对照组比较,有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。表明在伤后早期ＰＡＦ受体亲和力增加,结合位点减少。提示ＰＡＦ受体在脊髓损伤后继发性损害病理生理过程中起一定作用。     

蚕豆叶片下表皮ABA结合蛋白提取及分离条件的选择

以蚕豆（ＶｉｃｉａｆａｂａＬ．）叶片下表皮为材料,比较ＴｒｉｔｏｎＸ１００、冷丙酮和（ＮＨ４）２ＳＯ４对ＡＢＡ结合蛋白（简称ＡＢＡＢＰ）的提取效果。结果表明：０．５％（Ｗ／Ｖ）ＴｒｉｔｏｎＸ１００去垢剂提取的ＡＢＡＢＰ与ＡＢＡ特异结合活性较高（０．４８７ｎｍｏｌ／ｇｐｒｏｔｅｉｎ）,维持结合活性的时间较长（４℃下反应４０ｈ保持最大结合的６０％）;而冷丙酮法提取的ＡＢＡＢＰ特异结合活性只有０．３２５ｎｍｏｌ／ｇｐｒｏｔｅｉｎ,且容易失活,１０ｈ仅保持最大结合的３０％左右。实验比较了各种盐离子对ＡＢＡＢＰ的影响,高盐（＞３００ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ）不利于ＡＢＡＢＰ的结合反应,低浓度ＫＣｌ对ＡＢＡＢＰ活性略有促进。ＡＢＡＢＰ的结合活性需要介质中有一定量的Ｃａ２＋和Ｍｇ２＋,用ＥＤＴＡ螯合介质中Ｍｇ２＋、Ｃａ２＋后,ＡＢＡＢＰ活性大大降低,分别为最大结合的７５％和６０％。ＡＢＡＢＰ与ＡＢＡ反应的最适ｐＨ在６．５,这些条件为亲和层析纯化ＡＢＡＢＰ提供了依据。     

不同籼稻品种的矮生性与内源ABA水平及其结合蛋白的关系

试验研究了内源脱落酸及其结合蛋白与含有不同矮秆主基因的籼稻矮生性状的关系。结果表明：籼稻的矮生性也受内源ＡＢＡ及其结合蛋白协同调控。矮秆品种幼苗内源ＡＢＡ及其幼芽膜上ＡＢＡ结合蛋白水平显著高于离秆品种,且含有强矮化效应的ｓｄ－ｇ基因的新桂矮、双矮的内源ＡＢＡ及其结合蛋白水平又明显高于含ｓｄ－１半矮秆基因的广场矮。外源ＡＢＡ能显著抑制籼稻幼苗伸长,苗高下降率与ＡＢＡ结合蛋白水平有一定的关系,且矮秆品     

脱落酸对黄连体细胞胚胎发育的影响

用ＨＰＬＣ法测得黄连体细胞胚的内源ＡＢＡ含量,在胚性细胞团、球形胚、鱼雷形胚和子叶胚中分别为０．４５２、０．４６１、０．８３１和２．５０μｇ／ｇ ｆｒ．ｗｔ。培养基中加入４μｍｏｌ／Ｌ ＡＢ时,可最大幅度地提高正常子叶胚的和次生胚的产量,环己亚胺对体细胞胚（子叶胚）蛋白质合成的抑制率在含ＡＢＡ的培养基上显著高于不含ＡＢＡ的培养。由此推测,ＡＢＡ调节黄连体细胞胚发育的方式之一是诱导蛋白质合成。     

水稻幼叶中与ABA亲和力强的结合蛋白

在水稻幼苗叶片中存在膜结合的 ABA 专一结合位点。专一结合位点对 ABA 具有强的亲和力,其与 ABA 反应的平衡解离常数为2.69×10~(-7)mol/L,总浓度为4 nmol mg~(-1)蛋白质。专一结合位点与 ABA 结合活力在0℃时比25℃时高115%。专一结合位点与 ABA 结合的最适 pH 为4.5。ABA 与其专一结合位点的结合量随反应时间延长而增加,1小时达最大值,以后又逐渐降低。这种降低可能是由于专一结合使点活性逐渐减弱所致。这类结合位点可能是 ABA 进入细胞的载体,也可能是 ABA 作用的受体。     

专一识别脱落酸甲酯的单克隆抗体的制备与应用

专一识别２－顺（Ｓ）ＡＢＡ甲酯的单克隆抗体来源于以ＡＢＡ分子中的１－ＣＯＯＨ为偶联位点合成的免疫原。它与游离态ＡＢＡ和结合态ＡＢＡ葡萄糖酯的交叉反应仅分别为１％与３．５％,而与ＡＢＡ类似物,如２－顺－黄质醛、紫黄质以及ＡＢＡ的２－反式异构体和（Ｒ）－对映体则无交叉反应。利用该抗体建立的高度灵敏和精确的ＡＢＡｍｅ酶联免疫测定法,其检测线性范围为０．０４８～１．５２ｐｍｏｌ。通过ＡＢＡｍｅＥＬＩＳＡ和ＧＡ１＋３ＥＬＩＳＡ分析可知羊蹄叶片衰老与内源ＧＡ１＋３／ＡＢＡ比值的下降有关。     

重组I型cAMP依赖的蛋白激酶调节亚基的表达,纯化和鉴定

Ｉ型蛋白激酶的调节亚基（ＲＩ）具有两个ｃＡＭＰ结合位点,对ｃＡＭＰ具有很高亲和力和特异性,我们从人神经细胞中克隆人ＲＩ亚基ｃＤＮＡ片段（编码氨基酸残基９３－３８１）并将其亚克隆至ｐＥＴ３０ａ原核表达载体,实验表明该表达质粒在大肠杆菌ＢＬ２１中,在ＩＰＴＧ诱导下,表达产生大量带聚组氨酸标记的重组ＲＩ亚基。这些蛋白质以可溶性蛋白形式存在,经组氨酸结合金属螯合树脂亲和柱层析纯化后,每０．１升培养菌可制备     

脂肪酸结合蛋白的研究进展

脂脉酸结合蛋白（ＦＡＢＰ）是一族小分子细胞内蛋白质,对长链脂肪酸有很高的亲和力,能把脂肪酸从细胞膜转运到细胞内利用位点,在长链脂肪酸的代谢中起重要作用。本文就脂肪酸结合蛋白的结构、功能及其对脂肪酸代谢调节方面的研究进行了综述,并阐述了猪脂肪酸结合蛋白基因地对肌内脂肪合成的影响。     

玉米根ABA结合蛋白的亚细胞定位及动力学性质

以玉米（Ｚｅａ ｍａｙｓＬ．）根或胚芽鞘为材料,经匀浆、分级离心得到胞质部分和膜部分（微粒体）,进一步用６．２％ （Ｗ／Ｗ ） Ｄｅｘｔｒａｎ Ｔ５００ 和ＰＥＧ ３３５０ 两相系统制备质膜,用１％ 和８％ （Ｗ ／Ｗ） Ｄｅｘｔｒａｎ Ｔ７０ 梯度离心制备液泡膜． 电镜鉴定及多种标志酶检测表明,制备获得了高纯度正向型质膜和富含液泡膜的组分,其它内膜的污染很少． 用微量放射配体结合（ＭＲＬＢ）实验证明,玉米根微粒体的ＡＢＡ专一性结合位点主要分布在液泡膜和质膜上,这两种膜组分与ＡＢＡ 的特异结合活性分别为２４８５．４ ｆｍ ｏｌ／ｍ ｇ ｐｒｏｔｅｉｎ 和１２５７．３ ｆｍ ｏｌ／ｍ ｇ ｐｒｏ－ｔｅｉｎ,玉米根段胞质部分结合活性最低（差一个数量级）．质膜上ＡＢＡ－ＢＰ与ＡＢＡ 的结合平衡解离常数（ＫＤ）为１．５７ ｎｍ ｏｌ／Ｌ．     

天然型与非天然型脱落酸的生物活性比较

采用新方法精制脱落酸（ＡＢＡ）异构体试样,提高了（Ｓ）－（＋）－ＡＢＡ与（Ｒ）－（－）－ＡＢＡ两对映体纯度。抑制生长试验和残留量分析以及气孔闭合试验表明：天然型（Ｓ）－（＋）－ＡＢＡ活性显著高于非天然型（Ｒ）－（－）－ＡＢＡ或（ＳＲ）－（±）－ＡＢＡ。抑制莴苣种子发芽５０％的活性强度,（Ｓ）－（＋）－ＡＢＡ约是（Ｒ）－（－）－ＡＢＡ的５倍,（ＳＲ）－（±）－ＡＢＡ介于两者之间。抑制萝卜下胚轴生长试验,最显著有效期为２～６ｄ,生理作用期约为一周,（Ｓ）－（＋）－ＡＢＡ活性是（Ｒ）－（一）－ＡＢＡ的３．５倍。鸭跖革气孔闭合试验,（Ｓ）－（＋）－ＡＢＡ活性比（Ｒ）－（－）－ＡＢＡ高１倍。     

脱落酸对线粒体Na^＋—K^＋ATPase活性的影响

在提取大豆（Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍ ａｘ）黄化子叶的线粒体时,于清洗和悬浮介质中加入ＡＢＡ,发现４０ μｍ ｏｌ／Ｌ（±） ＡＢＡ 对线粒体膜结合Ｎａ＋ －Ｋ＋ ＡＴＰａｓｅ 活性及线粒体吸氧速率有明显的促进作用。ＡＢＡ 可使１６℃与２７℃培养的大豆子叶线粒体膜结合Ｎａ＋ －Ｋ＋ ＡＴＰａｓｅ Ａｒｒｈｅｎｉｕｓ图的折点温度分别下降６．３℃和５．９℃,并将该酶的底物动力学曲线由正协同曲线转变为非协同曲线。表明ＡＢＡ 可降低线粒体的膜相变温度     

植物激素脱落酸的信号转导

介绍了与ＡＢＡ信号转导直接相关的ＡＢＡ结合蛋白、第二信使和ＡＢＡ响应基因的诱导表达等方面的最新研究进展。     

苹果果实组织脱落酸结合位点的亚细胞定位

在苹果（ＭａｌｕｓｐｕｍｉｌａＭｉｌ）果实细胞的可溶性组分中存在ＡＢＡ特异结合位点,这些位点能与ＡＢＡ形成稳定的３ＨＡＢＡ蛋白结合复合物,而微粒体部分未表现出３ＨＡＢＡ结合活性。可溶性组分对３ＨＡＢＡ的结合效率与结合稳定性需要活体组织完整细胞的存在。ＡＢＡ共价交联物ＡＢＡＬＹＣＨ,具有与ＡＢＡ相同的抑制红苋菜（ＡｍａｒａｎｔｈｕｓｔｒｉｃｏｌｏｒＬ．）种子萌发的生物活性,能有效地竞争抑制果实组织圆片对３ＨＡＢＡ的结合。通过ＡＢＡＬＹＣＨ对苹果果实组织圆片及果实组织游离细胞的荧光染色表明,未成熟果实的细胞外周被特异性地染色。在ＢＳＡ存在的情况下,ＡＢＡＬＹＣＨ复合物被转运进细胞,形成密集的强烈荧光团。结果表明,ＡＢＡＬＹＣＨ与３ＨＡＢＡ的竞争性结合发生在细胞质膜水平。     

cDNA克隆p14－6肿瘤抑制功能的分子机制

本文探讨了具有肿瘤抑制功能的ｃＤＮＡ克隆Ｐ１４－６（即人白细胞介素６核转录因子ＮＦ－ＩＬ６的３’非翻译区）的ＲＮＡ转录物与回复相关蛋白ＢＮＦ的相互作用,发现该ＲＮＡ与ＢＮＦ的相互作用位点为其３’侧的富Ｕ序列内的１个２４核苷酸片段;并发现ＢＮＦ系一群蛋白质,它们可能先相互结合成１个蛋白质复合物,然后再与ＲＮＡ位点作用．其中可能只有１个蛋白质（Ｒ６２）直接与该ＲＮＡ结合。